Ruský názov
TRIPSIN + HYMOTPSINLatinské názvy látok trypsínu + chmetrypsínu
Trypsinum + Chymotrypsinum ( tyč. Trypsini + Chymotrypsini)Farmakologická skupina látok TRIPSIN + HYMOTPSIN
Typický klinický a farmakologický článok 1
Farmaceutické. Proteolytická prirodzená príroda. Dostať sa z pankreasu dobytka. Pod miestnym a vonkajším využitím, zakryté tkanivá a fibrinálne vzdelávanie; Vyzerá to ako viskózne tajomstvo, exsudát, krvné zrazeniny. Hydrolyzuje proteíny a peptony s tvorbou peptidov s nízkou molekulovou hmotnosťou, rozdeľuje kopuláciu tvorenú zvyškami aromatických aminokyselín (tyrozín, tropotofán, fenylalanín, metionín).
Indikácie. Viazanie bronchopilných ochorení (bronchiktorátové ochorenie, absces svetlo, atelektáza, exsudative Plegritis). ENTR-ORGANY: hustá sínusitída, hnisavú otitídu (akútna, subakútna, chronická), eustheitída s viskóznym exsudátom, po tracheosti, aby sa uľahčilo odstránenie hrubého viskózneho exsudátu, chronickej rinitídy. Popáleniny, poruchy, trofické vredy, hnisavé rany. V oftalmológii: ochorenia rohovky (vred, herpeta keratitída); Popálenie sliznice oka, obštrukciu sĺz slz, pomalé hojenie očí viečok.
Kontraindikácie. Precitlivenosť, malígne neoplazmy, deštruktívne formy pľúcnej tuberkulózy, HSN II-III Art., Emfyzém pľúc s respiračná porucha. Nie je možné zaviesť do krvácajúcich dutín, aplikovať na ulcerované povrchy malígnych nádorov.
Opatrne. Etiológia Emponama Pleura Tuberculosis (resorpcia exsudáty môže prispieť k rozvoju bronchiplorálnej fistuly).
Dávkovanie. Lokálne, externe.
Na liečbu hnavý beh. A sterilné obrúsky navlhčené roztokom: 25-50 mg liečiva v 10-50 ml 0,25% roztoku prokuratúry sa ukladá obdobím 2 až 24 hodín (v závislosti od hrúbky hnisavých nekrotických hmôt ) Na povrchu rany. Obväzy sa menia každé 3-5 dní.
Pre tepelné popáleniny Iii Art. Tenká vrstva liečiva sa aplikuje na páse rýchlosťou 1 g na 100 sq. Cm povrchu rany, pokrytý obväzom, navlhčený 0,9% roztokom NaCl alebo 0,25% roztoku; uložiť bandáž vlhkosti. Zmena obväzov vyrobených za deň. Počas každého posunu sa obväzy odstránia ľahko oddelené oblasti nekrotického tkaniva. Keď rany pokryté hustým kolom, je rezané pred prekrytím obliekania.
S otravným bronchildren choroby Používa sa inhalácia 25-30 mg liečiva, rozvedená v 5 ml destilovanej vody, 1-3-krát denne. Roztok môže byť tiež podávaný cez bronchoskop, endotracheálnu sondu, trachestone. V riešení môžete pridať antibiotiká, svetlé ls.
Na úpravu vredov sa popáleniny rohovky a keratitídy používajú vo forme očných kobercov v roztoku 1: 500 denne, v priebehu 2-3 dní alebo pochovaný 2 cap 0,25% roztok, 4 krát denne, do 1,25% 2 dni. Obštrukcia slz a kožných rán a rán viečok: premyje slzami a obrúsky s 1% roztokom. Riešenia sú pripravené ex Tempore.
Pri chronickej rinitíde sú vstrekované alebo zavlažované roztokom (5 mg v 5 ml 0,9% roztoku NaCl) liekovej nosovej dutiny 2-3 krát denne.
Pri chronickej hnisavej ohybe komplikovanej choleaátom, po premytí dutiny 0,9% roztoku NaCl, 0,5% roztoku liečiva (rozvedený o 0,9% roztok NACL), 2-3 krát denne počas 20-30 minút.
Vedľajší účinok. Alergické reakcie, Zvýšte telesnú teplotu na subtebrile, tachykardia.
Po inhalačnom podaní: Podráždenie sliznice zvršku dýchacie cesty, kurva hlas.
V oftalmológii: Podráždenie a opuch spojivky (v tomto prípade sa odporúča znížiť koncentráciu aplikovaného roztoku).
Špeciálne pokyny. V nadchádzajúcich hodinách po inhalácii musí pacient dôkladne vyčistiť spúta alebo by sa mal odstrániť nasávaním.
ohmy sa zúčastňujú proteínov proteínových proteínov v tenký črevo Hymmotrypsín je výhodne rozdeľuje väzby vytvorené cotonovými skupinami aminokyselín, ktoré majú hydrofóbne bočné reťazce, a charakterizuje širšiu špecifickosť ako. Naproti tomu trypsin h. Životové túžby.
Chymotrypsín sa vyrába exokrinným pankreatickým bunkám (pankreas) vo forme neaktívneho profrovaného - chmeotrypsinogénu, ktorý je vylučovaný duodenálny črevokde sa vplyv trypsínu zmení na chmemotrypsín. Osoba a väčšina cicavcov našli dva typy chmemotrypsinogénu - A a B, sa líšili fyzikálne chemické vlastnosti. V procese aktivácie chmemotrypsinogénu A sa vytvorí niekoľko aktívnych foriem chmeotrypsínu, rôzne rozpustnosti, forma kryštálov a veľkosť enzymatickej aktivity. Hlavnou formou chmemotrypsínu je chmemotrypsín A - proteín s molekulovou hmotnosťou asi 25 000. Maximálne odolné voči slabosti; V neutrálnych a slabo alkalických médiách podlieha autolýze. Optimálne akcie X. je pri pH 7,5-8,2.
Ak chcete určiť aktivitu H. Navrhované množstvo metód založených na rozdelení proteínov a syntetických substrátov. Riadené spektrofotometrické estery Tyrosínu substituovaného M-substituovaným sa široko používajú.
Aktivita X. je utláčaná množstvom syntetických a prírodných inhibítorov. V plazme krvi a tkanív sú proteínové inhibítory H., chránené pred zničením tohto enzýmu. Mnohé z nich sú polyvalentné, aby utláčali iné proteázy (napríklad a2-machroglobulín, niektoré inhibítory trypsínu); Špecifický inhibítor X. Krvná plazma je a1 -Anthihymotripsisis.
Chymotrypsin sa používa ako drogaSchopný selektívne rozdeliť proteíny nekrotických tkanív, vláknitých útvarov, zapaľovacích viskóznych exsudátov, hanlivých hmôt. Má protizápalový, anti-etnický účinok a podporuje hojenie Ruskej akadémie vied. Lieky H. sa získava z chmeotrypsinogénu A, ktorý je izolovaný z pankreasu hovädzieho dobytka a po rekryštalizácii sa aktivuje trypsínom. V lekárskej praxi sa používa Chymotrypsin A, vyrába "Chimothrixin Crystaline". na to biela farba, dobre rozpustný vo vode a v izotonickom roztoku chloridu sodného.
Indikácie na použitie, spôsoby použitia, dávky a možné komplikácie Rovnaké ako v kryštalickej trypsínom. Okrem toho X. sa používajú s extrakciou intrakapsulárneho kataraktu. Spoločne s Trypsinom X. je súčasťou hiopcínu, pankreátu a niektorých ďalších liekov používaných v prípade nedostatočnosti funkcie pankreasu.
Formulár uvoľnenia: Hermeticky pečené fľaše alebo ampulky obsahujúce 0,005 g. (5 mg.) a 0,01. g. (10 mg.) Crystal Chymotrypsin. Skladovanie v mieste chránenom svetlom pri teplote nie je vyššia ako + 10 °.
II. Chimotrixínenzým sekrécie pankreasu týkajúci sa triedy hydrolyzov (CF 3.4.21.1), katalyzujúce hydrolytické štiepenie proteínov, peptidov, amidov a aminokyselín, pri trávení potravín v čreve.
1. Malé lekárske encyklopédie. - m.: Lekárska encyklopédia. 1991-96 2. Najprv zdravotná starostlivosť. - m.: Veľká ruská encyklopédia. 1994 3. Encyklopedický slovník lekárske podmienky. - M.: Sovietska encyklopédia. - 1982-1984.
Synonymá:Sledujte, čo je "Chimothrixin" v iných slovníkoch:
HIMES ... Orfografický slovník
Hymmotrypsin, látka vyrobená v tele, ktorá prispieva k tráveniu potravy. Himotrypsin je enzým, ktorý rozdeľuje proteíny. Vyrába sa v tenkom čreve komplexom chemické reakcie Od Chymotrypsinogen ... Vedecký a technický encyklopédový slovník
Tráviaci enzým pankreatická šťava; Podieľa sa na rozdelení proteínov v čreve. Vyrába sa vo forme neaktívneho chmemotrypsinogénu ... Veľký encyklopedický slovník
Proteolytické. Enzým väčšiny stavovcov, ktorí sa podieľajú na trypsínom a inými peptidázami v rozdelení proteínov v tenké črevo; \\ T Je syntetizovaný bunkami pankreasu vo forme neaktívneho prekurzora chmemotrypsinogénu a ... ... Biologický encyklopedický slovník
SUT., Počet synonymá: 1 enzým (253) synonymá pre ASIS. V.N. Trishin. 2013 ... Synonymný slovník
chimotrixín - Proteolytický enzýmovitý enzým, syntetizuje sa v pankrease vo forme mriežky chmemotrypsinogénu. [Arefiev V.A., L. L. L. English English slovník GENETICKÉ PODMIENKY 1995 407S.] Témy genetiky EN CYMOTRIPSIN ... Technický adresár prekladateľa
Tráviaci enzým pankreatická šťava; Podieľa sa na rozdelení proteínov v čreve. Vyrába sa vo forme neaktívneho chmemotrypsinogénu. * * * Chymotrypsin Chymotrypsin, tráviaci enzým pankreatická šťava; Zúčastňuje sa ... ... Encyklopedický slovník
- (G.ChyMoscok + Tripsin) enzým, rozdelenie potravinových proteínov; Vyrába sa bunkami pankreasu. Nový slovník zahraničné slová. Prostredníctvom Edwart, 2009. Chimotrypsin A, Mn. Žiadne M. (… Slovník cudzích slov ruského jazyka
Chymotripsin Chymotrypsin [CF 3.4.21.1 2]. Proteolytický stavovcový enzým sa syntetizuje v pankrease vo forme hymotrypsinogénneho prekurzora. (
Chimotrixín - proteolytický enzým; Katalyzuje rozdelenie proteínov a peptidov. Označuje peptidové hydrolázy. Spolu s trypsín Zúčastňuje sa na proteínových proteínoch v tenkom čreve chmemotrypsínu, výhodne rozdeľuje väzby vytvorené cotonovými skupinami aminokyselín, ktoré majú hydrofóbne bočné reťazce, a je charakterizovaný širšou špecificitou ako trypsín. Na rozdiel od Trypsin X. Mliečne túžby.
Hymmipcín je produkovaný exokrinnými bunkami pankreas Vo forme neaktívneho profitovaného - chymotrygenegénu, ktorý je vylučovaný v dvanástniku, kde pod vplyvom trypsínu sa zmení na chmemotrypsín. Osoba a väčšina cicavcov objavili dva typy chmemotrypsinogénu - A a B, sa líšili vo svojich fyzikálno-chemických vlastnostiach. V procese aktivácie chmemotrypsinogénu A sa vytvorí niekoľko aktívnych foriem chmeotrypsínu, rôzne rozpustnosti, forma kryštálov a veľkosť enzymatickej aktivity. Hlavnou formou chmemotrypsínu je chmeotrypsín A - proteín s molekulovou hmotnosťou približne 25 000. Enzým je maximálny odolný voči slabosti; V neutrálnych a slabo alkalických médiách podlieha autolýze. Optimálne akcie X. je pri pH 7,5-8,2.
Ak chcete určiť aktivitu H. Navrhované množstvo metód, \\ t
Na základe rozdeľovacích proteínov a syntetických substrátov. Hydrolýza kontrolovanej spektrofotometrie sa široko používa.Aktivita X. je utláčaná množstvom syntetických a prírodných inhibítorov. V plazme krvi a tkanív existujú inhibítory proteínov H., ktoré zabraňujú proteínom z deštrukcie týmto enzýmom. Mnohé z nich sú politické, aby utláčali aktivitu iných proteáz (napríklad 2-machroglobulín, niektoré inhibítory tripsínu); Špecifický inhibítor X. V krvi plazme je 1 -Anthihymotrixín.
Hymmotrypsín sa používa ako liek, ktorý môže selektívne rozdeliť proteíny nekrotických tkanív, foriem, zapaľovacích viskóznych exsudátov, hanlivých hmôt. Má protizápalový, anti-etnický účinok a podporuje hojenie Ruskej akadémie vied. X. Liečivé prípravky sa získajú z chmemotrygegenagénu A, ktorý je izolovaný z pankreasu hovädzieho dobytka a po rekryštalizácii sa aktivuje trypsínom. V lekárskej praxi sa používa Chymotrypsin A, vyrába "Chimothrixin Crystaline". Toto je biely prášok, dobre rozpustný vo vode a v izotonickom roztoku chloridu sodného.
Indikácie na použitie,
Spôsoby použitia, dávky, kontraindikácie a možné komplikácie sú rovnaké ako v triciach kryštalickej. Okrem toho X. sa používajú s extrakciou intrakapsulárneho kataraktu. Spoločne s Trypsinom X. je súčasťou hiopcínu, pankreátu a niektorých ďalších liekov používaných v prípade nedostatočnosti funkcie pankreasu.Formulár uvoľnenia: Hermeticky pečené fľaše alebo ampulky obsahujúce 0,005 g. (5 mg.) a 0,01. g. (10 mg.) Crystal Chymotrypsin. Skladovanie v mieste chránenom svetlom pri teplote nie je vyššia ako + 10 °.
Enzým Chymotrypsin (Chymotrypsinum)
Chymotrypsin (Chymotrypsinum)
Farmachologický účinok:
V rámci miestnej prihlášky sa nerušujú nekrológované (mŕtve) tkaniny a fibrínové útvary (krvné zrazeniny / burgre); Liehavé viskózne tajomstvo (oddelené špeciálnymi žľazami, napríklad spúta), exsudáty (uvoľnené z malých ciev tkanivo bohaté na proteínovú kvapalinu), krvnú zrazeninu. Štruktúra:
Chimotrixínje to proteolytický enzým vytvorený v pankrease cicavcov. Pre lekárska aplikácia Získa sa z pankreasu hovädzieho dobytka. V pankreasovej šťave, obsahuje v neaktívnom stave vo forme chylnogénneho (chymotrygerogen A a B), ktorý je aktivovaný pod vplyvom trypsínu, a množstvo foriem sa vytvára z chmemotrypsinogénu a vytvára sa množstvo foriem: A, B, G, S a P - Cymotrypsins, a z chmemotrypsinogénu B. Všetky formy chmemotrypsínu sú blízko enzymatických vlastností, ale líšia sa v aktivitách. Praktický význam ako liek má v súčasnosti -hympripsis, ktorý je vyrobený pod názvom "Cymotrypsin Crystaline".A - Chimotrixín Je to proteín s relatívnou molekulovou hmotnosťou 21 600 - 27 000. Vzťahuje sa na skupinu proteolytických enzýmov. Podobne ako trypsín, proteíny a peptony sa hydrolyzujú s relatívne peptidmi s nízkou molekulovou hmotnosťou. Z trypsínu sa líši od toho, že štiepi predovšetkým väzby tvorené zvyškami aromatických aminokyselín (tyrozín, tryptofán, fenylalanín, metionín). V niektorých prípadoch tempotrypsín produkuje hlbšiu hydrolýzu proteínu ako trypsín. To sa líši od trypsínu aj volaním koagulácie mlieka. Viac regálov ako trypsín a je pomalší inaktivovaný.
Chimotrixíncrystal je brilantné váhy alebo biely prášok. Rozpustný vo vode a v izotonickom roztoku chloridu sodného; pH 0,2% vodný roztok 4,5 - 6,5. V suchom pohľade na regály; vodné roztoky Rýchlo inaktivovať, najmä pri vysokých teplotách.
Indikácie na použitie:
Trombophlebbitis (zápal stien žíl s ich blokádami), zápalové-dystrofické formy periodontu (ochorenie zubov), osteomyelitída (zápal kostnej drene a susedí kostný tkanivo), sinusitída (zápal čeľustného sínusu), otitída (zápal ušnej dutiny), podráždenie (zápal IRIS), iridocyklit (očné ochorenia); Tracheites (zápal priedušnice), bronchitída (zápal bronchi), extrakcia kataraktu (odstránenie ťahovej kôry oka).Spôsob aplikácie:
Intramuskulárne dospelí pri 0,0025 g 1 krát denne. Pre injekciu, okamžite rozpustená pred použitím 0,005 g crymotrypsínu kryštalického v 1 -2 ml izotonický roztok Chlorid sodný alebo 0,5-2% novocaínový roztok. Roztok sa zavádza hlboko do horného vonkajšieho kvadrantu bobuľového svalu. Kurz -6-15 injekcie.Vedľajšie účinky:
Alergické reakcie, pocit pálenia v mieste aplikácie. Krvácanie z granulácie (hojenia) grafov. Pri zavedení do dutiny je možné uvoľňovať látky s činnosťou podobným histamínom.Kontraindikácie:
Krvácanie rany a rozpadnutie malígne nádory. Individuálna neznášanlivosť. Liek nie je vhodný na intravenózne podávanie.Formulár uvoľnenia:
Prášok v hermeticky upchatých liekovkách 0,005 g a 0,01Pozor!
Pred použitím prípravy Hymmipcinu musíte poradiť so svojím lekárom. Táto aplikácia sa poskytuje vo voľnom preklade a je určený výlučne na oboznámenie sa. Ďalšie informácie nájdete v anotácii výrobcu.
Serínové proteinázy.
Mechanizmus pôsobenia chmemotrypsínu a karboxypeptidázy.
Už bolo spomenuté, že pankreas je zodpovedný za produkty celej skupiny proteolytických enzýmov, peptidových väzieb hydrolýzy tvorených rôznymi aminokyselinami. Enzýmy zapojené do štiepenia proteínov a ich špecifickosť vzhľadom na peptidové spojenia vytvorené rôznymi aminokyselinami sú uvedené v tabuľke. 3.1. Najdôležitejší a plne študovaný zástupca črevných proteináz patriacich do rodiny serínové proteinázy, je chymotrypsin. Hymotrypsín je tráviaci enzým, syntetizovaný vo forme fermentácie kyseliny pankreasu.
Tabuľka 3.1
Podkladové špecifickosti proteinázy gastrointestinálneho traktu
Aktívny enzým |
Zimogén |
Aktivátor |
Rozdelenie |
|
peptidová komunikácia |
||||
Karboxyproteináza |
Autoaktivácia, |
|||
Pepsin A. |
Pepsinogen A. |
aktívny pepsín |
||
Serín |
||||
proteináza |
||||
Tripsín |
Trpsinogén. |
Enterokinát |
||
Tripsín |
||||
Chimotrixín |
Chimothrixinogén |
Tripsín |
TYR, PHE, TRP, MET |
|
ELASTASA |
Proelstaza |
Tripsín |
||
peptidáza |
||||
Karboxypeptidáza A. |
Procarboxypeptic |
Val, leu, ile, ala |
||
Karboxypeptidáza B. |
Procarboxypeptic |
|||
Amonipdidase |
Pro-droga |
Štiepenie N- |
||
terminál |
||||
zvyšky (pre |
||||
výnimka PRO) |
||||
Vo vnútri acynthenanových buniek sa nové omienené proteínové molekuly transportované z endoplazmatického retikulum do zariadenia Golgji, kde sú obklopené proteín-lipidov membránou - solárne granule, ktoré v elektrónkom mikroskope vyzerajú ako veľmi husté teľatá (Obr. 3.3 ).
Obr. 3.3 Elektronické mikrofotografie zimných granúl v acinárnych bunkách pankreasu (podľa G. Parade z Strryer L., Biochémia
"Mier", M., vol. 2, 1985).
Zimné granule obsahujúce chymotrypsinogén sa nahromadenú v hornej časti acinárnych buniek a potom pod pôsobením hormonálneho alebo neuronálneho signálu sa vyhodia do potrubia vedúcej v dvanástniku.
Chymotrygenegén je reprezentovaný jedným polypeptidovým reťazcom 245 aminokyselín. Reťaz je stabilizovaná piatimi disulfidovými mostíkmi. Aktivácia chmemotrypsinogénu sa uskutočňuje pod pôsobením trypsínu, rozdelenie peptidovej väzby medzi arginínom-15 a izoleucín-16.
Súčasne pôsobí aktívna π -hymotripsis na iných molekulách hymmopixinogénu (obr. 3.4).
Obr. 3.4 Schéma ilustrujúca sekvenciu stupňov aktivácie chmemotrypsínu
Ďalej, π -hymotripsis sa podrobí ďalšiemu proteolytickému pôsobeniu chmetrypsínu s výberom dvoch dipeptidov Ser14 -Arg15 a THR147 -ASN148 a tvorba stabilnej formy enzýmu - a-chmemotrypsínu.
Vzhľadom k tomu, Cymotrypsin je jedným z najviac študovaných enzýmov, je vhodné zvážiť jeho štruktúru a mechanizmus účinku podrobnejšie. Molekula a-humpe sa skladá z troch polypeptidových reťazcov spojených dvoma intercelullovými disulfidovými väzbami (obr. 3.5).
Obr. 3,5 a molekula α má dve zachytené disulfidové mosty a tri disulfidové väzby.
Molekulová hmotnosť α -hemotripsyin je asi 25.000 áno. Molekula má kompaktný elipsoidný tvar 51 × 40 × 40 å. Všetky účtované skupiny, s výnimkou troch potrebných na katalýzu, sú na povrchu molekuly.
Rovnováha hydrolýzy reakcie sa posunie takmer úplne smerom k rozdeleniu peptidových väzieb. Avšak, Cymotrypsin je schopný hydrolyzovať pri vysokej rýchlosti ďaleko od každého peptidového pripojenia. Pôsobí selektívne v kontakte, vzdelaní karboxylové skupiny aromatických kyselín a aminokyselín s hydrofóbnymi radikálmi veľká veľkosťNapríklad metionín.
Charakteristickým znakom chmemotrypsínu je jeho schopnosť hydrolyzovať základné pripojenia. V podstate významná časť informácií o mechanizme pôsobenia chmemotrypsu sa získala pri štúdiu hydrolýzy
estery.
Ako je znázornené, chmetrypsín katalyzuje hydrolýzu peptidu a základných väzieb do dvoch samostatných stupňov. Prvýkrát bol objavený pri štúdiu kinetiky hydrolýzy esterovej väzby N-N-netrophenylacetátu.
Analýza reakcie ukázala, že uvoľňovanie počas hydrolýzy jedného z produktov - N-N-N-NTY-throatonolu sa vyskytuje v dvoch stupňoch: prvý N-nitrophenol sa uvoľní výbušne a potom je už vytvorený
menej nežiaducej rýchlosti.
V všeobecné funkcie Spôsob hydrolýzy N-net-fenylacetátu sa redukuje na tvorbu komplexu enzýmu-substrát, potom je nevyhnutným spojením v substráte rozdelené a NN-Ntrofnenenu sa uvoľní, pričom acetylová skupina substrátu zostáva kovalentne pripojená v aktívnom centre enzýmu. Ďalej voda záchvaty acetyl-enzýmového komplexu tvoria acetátový ión a regenerovaný enzým (obr. 3.6)
Obr. 3.6 Acilitation: Vzdelávací komplexný acetylový enzým ako medziprodukt. Deaktivácia: hydrolýza medziproduktu komplexného acetylového enzýmu.
Rýchla počiatočná fáza uvoľnenia N -nitrophenolu je spojená s tvorbou acyl-enzýmového komplexu znázorneného na obr. 3.6 Ikona
(*). Táto etapa sa nazýva acylácia. Druhá etapa deacillationzodpovedá štádiu stacionárnej reakcie, ktorá je súčasne obmedzená. Komplex acyl-enzýmu sa ukázal, že je tak stabilný, že za určitých podmienok je možné ho prideliť. Po zvýraznení pH 3 čistá forma Tento medziľahlý acyl enzýmový komplex sa podarilo charakterizovať miesto, kde je pripojená acylová skupina na enzým. Ukázalo sa, že acylová skupina je spojená s atómom kyslíka špecifického serínového zvyšku
- Serina-195 (Ser-195). Z tohto dôvodu, že Cymotrypsin patrí do skupiny serínové proteinázy. Tento zvyšok vykazuje neobvykle vysokú reakčnú kapacitu. Môže byť špeciálne označiť
organický fluorofosfát - diizopropylfluorfosfát (obr. 3.7).
Obr. 3.7 Diizopropylfosfát (DPFF) sa inaktivuje chmemotrypsínom tým, že tvorí diizopropylfosforil derivát serín-195.
Zvýšená reaktivita serínu-195 indikuje skutočnosť, že zvyšné 27 serínových zvyškov v chymotrypsíne absolútne neintekujú s diizopropylfluorfosfátom (DPFF). Mimochodom, Hymmipcín nie je jediným enzýmom, ktorý je inhibovaný DPFF. Mnoho ďalších proteolytických enzýmov, ako napr trypsin, elastasa,
trombín, bakteriálny subtilisín tiež špecificky reagovať s DPFF, úplne stráca aktivitu. Rovnako ako v prípade chmeotrypsínu, tieto proteinázy interagujú s DFF vďaka jednému serínu zvyšku. Preto je vhodné hovoriť o existencii celej rodinyserínové proteázy.
V katalyzátnych činoch chmemotrypsínu sa však zúčastňuje nielen bočný radikál Ser-195. Ukázalo sa, že v aktívnom centre enzýmu je bilancia histidínu tiež zohráva dôležitú úlohu - jeho-57. Pre preukázanie jeho účasti na katalýze bola riadená s použitím tzv. Afinný štítok, ktorý sa viaže na chmemotrypsín ako substrát na jednej strane a tvorí kovalentné spojenie so špecifickou skupinou v aktívnom stredisku, na druhej strane.
Tento štítok pre Chymotrypsin je TOSIL-L- Fenylalaninchlórmetylketón, ktorý je znázornený na obr. 3.8.
Obr. 3.8 Štruktúra Tosil-L-fenylalaninchlórmetylketón, ktorá sa používa ako afinný štítok chmemrotrypsínu (R - Tosil Group).
Prítomnosť v molekule štítku bočného reťazca reprezentovaného fenylalanínu poskytuje jej špecifickú interakciu s enzýmom. Reaktívna skupina na štítok - chlórmetylketón interaguje len so zvyškom jeho-57 a alkyluje jeden z atómov dusíka histidínového kruhu. Interakcia takejto afinné štítok s chmemotrypsínom úplne zbavuje jej enzymatickú aktivitu. Existuje niekoľko dôkazov o vysokej špecifickosti interakcie štítku s Cymotrypsínom:
- Po prvé, afinktívny štítok je vysoký stereošpecifický. D-izomérske štítky s chmemotrypsínom neinteragujú;
- Po druhé, konkurenčný inhibítor chimritripsin - p-fenylpropionátu inhibuje proces interakcie medzi značkou s proteínom;
- Po tretie, rýchlosť privádzania chmemotrypsínu pri pridávaní štítku je v rovnakej závislosti od pH ako rýchlosť katalýzy.
Vzor interakcie tosil-L-fenylalaninchlórmetylketónu s jeho 57 je znázornený na obr. 3.9.
Obr. 3,9 alkylácia histidínu-57 v chymotrypsíne pri interakcii s Tosil-L-fenylalaninchlórmetylketónom.
Pre prejav katalytickej aktivity chmemrotpsu, prítomnosť Ser-195 a jeho-57 zostáva v aktívnom stredu enzýmového enzýmu. Ako je znázornené na neskoršie, zvyšok kyseliny asparágovej je tiež umiestnený vedľa týchto zvyškov v molekule chmemotrypsínu - ASP-102. Röntgenová konštrukčná analýza ukázala, že všetky tri zvyšky sú blízko seba a vytvárajú takzvané systém prevodu nabíjaniavzhľadom k tomu, že ASP-102 tvorí vodíkovú väzbu s jeho-57, ktorá je zase pripojená vodíkovou väzbou so Ser195 (obr. 3.10).
Obr. 3.10 Systém prevodu nabíjania v aktívnom stredu chmemotrypsínu v neprítomnosti substrátu (vyfukovanie d.m., Steitz T.A., RTG difrakčné štúdie enzýmov, Ann. Rev. Biochem., 1976, 39, 86-95).
Karboxylát-ión ASP-102 polarizuje imidazolovú skupinu His-57, ktorá zvyšuje svoju schopnosť vykonávať hlavnú väzbu spoločnosti Pronon, a keď substrát interaguje s molekulou himotrypsínu, ASP-102 a jeho-57 prijme protón Ser-195 hydroxylová skupina.
Obr. 3.11 Systém prevodu nabíjania v aktívnom stredu chmemotrypsínu v prítomnosti substrátu. Pri pridávaní substrátu je protónový medziprodukt medziprodukt viazanie na aspartát-102 a histidín-57 (vyfukovanie D.m., Steitz T.A. RTG difrakčné štúdie enzýmov, Ann. Rev. Biochem., 1976, 39, 86-95).
Lokalizácia väzbových miest na mieste substrátu a pravdepodobnej orientácie hydrolyzovaného peptidového kopulácie boli stanovené v dôsledku implementácie rôntgenovej difrakčnej analýzy komplexov chmemotrypsínu s analógmi substrátu. Najmä sa ukázalo najmä v príklade štúdie Cymotrypsin komplexov s analógom nehydrobunkového buniek substrátu - Existencia formyl-L-tryptofánu v hlbokom hydrofóbnom enzýme
vrecko blízko Serina-195, ktoré vo veľkosti zodpovedá bočným radikálom aromatických aminokyselín (obr. 3. 12).
Obr. 3.12 Schematický obraz väzby formyl-L-tryptofánskeho chmemotrypsínu.
Je to prítomnosť tohto hlbokého vrecka, že špecificita chmemotrypsínu je spôsobená aminokyselinami s aromatickým alebo iným hydrofóbnym bočným reťazcom veľkej veľkosti. Keď rôntgenová konštrukčná analýza komplexov chymotrypsínu s analógmi polypeptidových substrátov zistili veľké množstvo Vodíkové väzby medzi hlavnými reťazcami enzýmu a substrátom, ktoré sú tiež umiestnené, ako v antisizálnych β-skladových vrstvách.
Katalytický účinok mechanizmu chmemrotpsu
Intenzívne a komplexné X-ray konštrukčné a biochemické štúdie Hymotrypsin nechal prísť na určitý záver v porovnaní s mechanizmom jeho katalytického pôsobenia. Ako už bolo uvedené, jeho-57 a Ser-195 sa priamo podieľajú na rozdelení peptidového pripojenia substrátu. Hydrolýza tejto súvislosti začína skutočnosťou, že kyslík OH-skupina Ser-195 útoky uhlíka karbonylovú skupinu
hydrolyzovaný substrát peptidov. Výsledkom je, že spojenie medzi atómami C a O v karbonylovej skupine sa stáva jedným a atómom o získavaní negatívny poplatok. Zároveň sú usporiadané štyri rôzne atómy spojené s karbonyl karbonylovou skupinou ako tetrahedron. Vzdelávania tohto tetrahedral medziproduktová zlúčeninaukázalo sa, že je to možné v dôsledku výskytu vodíkových väzieb medzi negatívne nabitým atómom kyslíka (tzv. Oxiiano) a dvoma NH skupinami primárneho reťazca enzýmu (obr. 3.13).
Obr. 3.13 Tetrahedral Medziprodukt v reakciach deactility a deactility. Stabilita medziproduktu poskytuje vodíkové väzby tvorené NHgroups primárneho reťazca enzýmu.
Tento kúsok chmetrypsínu sa nazýva oxiianionová dutina. V mechanizme tvorby uvedeného medziľahlého spojenia je prevod protónov z Ser-195 na His-57 hlavnou úlohou.
Obr. 3.14 Prvá etapa hydrolýzy peptidového chmemotrypsínu - acylácia. Vytvorí sa tetrahedral medziprodukt. Potom sa amínová zložka substrátu rýchlo oddelí od enzýmu a samotný enzým sa zmení na medziprodukt - acyl enzým.
Prenos protónov je oveľa jednoduchší vďaka prítomnosti systému prenosu nabíjania. Zvyšok ASP-102 striktne sa zameriava na polohu imidazolu hystidínu-57 a čiastočne neutralizuje sa na tento krúžok. Protón spojený s párom jeho-ASP potom prechádza do atómu dusíka hydrolyzovanej peptidovej väzby, ktorý je v dôsledku toho praskne. V tomto štádiu je amínová zložka substrátu spojená vodíkovou väzbou s jeho-57 a kyslou zložkou - esenciálna (kovalentná väzba) so SER-195, čím sa ukončí etapa acylácie. Pod acyláciou chmemotrypsínu je teda vytvorená medziproduktová tetrahedral zlúčenina (1) a v dôsledku toho sa amínová zložka substrátu (2) rýchlo oddelí od enzýmu. Samotný enzým sa zmení na medziprodukt katalýzy - acyl-enzým (3) (obr. 3.14).
Obr. 3.15 Druhý stupeň hydrolýzy peptidového chmemotrypsínu - deaktizácie. Acyl-enzým sa hydrolyzuje vodou. DeAktilárny je v podstate reakcia, inverzná acylácia, ale voda sa vzťahuje amínová zložka substrátu.
V ďalšom stupni - deacylačná amínová zložka difunduje z enzýmu a jeho miesto v aktívnom centre zaberá vodu.
V podstate je deacylácia proces spätného acylácie. Spočiatku sa systém nabíjania nabíjania zoberie protón z vody.
