HIV enfeksiyonunu teşhis etmek için modern yöntemler. HIV tanısında Combibest testinin kullanılması HIV sonuçlarından neler bekleyebilirsiniz?

ELISA (enzime bağlı immünosorbent tahlili, ELISA) kullanıma sunuldu pratik tıp Geçen yüzyılın 60'larında bir yerde. Onun ilk görevi şuydu: histolojik çalışmalar canlı bir organizmanın hücrelerinin antijenik yapısının araştırılması ve tanımlanmasına indirgenen bilimsel amaçlar için.

ELISA yöntemi, spesifik (AT) ve ilgili antijenlerin (AG), bir enzim kullanılarak tespit edilen bir "antijen-antikor" kompleksi oluşumu ile etkileşimine dayanmaktadır. Bu gerçek, bilim adamlarını, yöntemin, belirli bir enfeksiyona karşı bağışıklık tepkisinde yer alan çeşitli sınıflardaki spesifik immünoglobulinleri tanımlamak için teşhis amaçlı kullanılabileceğini düşünmeye sevk etti. Ve bu, klinik laboratuvar teşhislerinde bir atılımdı!

Yöntem yalnızca 80'lerin başında ve daha sonra esas olarak uzman kurumlarda aktif olarak kullanılmaya başlandı. İlk immünoenzim analizörleri, kan nakli merkezleri ve istasyonları, bulaşıcı hastalıklar ve zührevi hastaneler ile donatılmıştı, çünkü Afrika kıtasında doğan korkunç AIDS ufkumuzda belirdi ve "eski" enfeksiyonlara hemen katıldı, acil teşhis önlemleri ve araştırma gerektirdi. kendisini etkileyen tedavi edici ilaçlar için.

ELISA yönteminin uygulama kapsamı

Enzim immünolojik testinin olanakları gerçekten çok geniştir. Tıbbın tam anlamıyla tüm dallarında kullanılan bu tür araştırmalar olmadan nasıl yapılabileceğini hayal etmek artık zor. Görünüşe göre ELISA onkolojide ne yapabilir? Yapabileceği ortaya çıktı. Ve çok. Analizin belirli türlere özgü belirteçleri bulma yeteneği malign neoplazmlar, temelidir erken teşhis tümör, küçük boyutundan dolayı henüz başka bir şekilde belirlenemediğinde.

Modern klinik laboratuvar teşhisi (CDL), tümör belirteçlerine ek olarak, önemli bir ELISA panelleri cephaneliğine sahiptir ve bunları çeşitli patolojik durumları (bulaşıcı süreçler, hormonal bozukluklar) ve farmasötik ilaçların hastanın vücudu üzerindeki ve bu arada sadece insanlar üzerindeki etkilerini belirlemek için izlenmesi. Şu anda, enzim immünolojik testi veterinerlik hizmetlerinde yaygın olarak kullanılmaktadır, çünkü "küçük kardeşlerimiz" bazen çok acı çektikleri birçok hastalığa karşı da hassastır.

Böylece, ELISA, duyarlılığı ve özgüllüğü nedeniyle damardan alınan kan örneğinden şunları belirleyebilir:

• Hormonal durum (hormonlar tiroid bezi ve adrenal bezler, seks hormonları);
• Viral varlığı ve bakteriyel enfeksiyon(HIV, B ve C, klamidya, sifiliz ve ayrıca patojenik mikroorganizmaların neden olduğu diğer birçok hastalık);
• Başarılı bir şekilde sona eren ve bu patojene karşı bağışıklık tepkisi oluşturma aşamasına geçen bulaşıcı süreci başlatan mikroorganizmaların hayati aktivitesinin izleri. Bu tür izler, yani antikorlar çoğu durumda ömür boyu kanda dolaşarak kişiyi yeniden enfeksiyondan korur.

ELISA'nın özü nedir?

Enzim immünoanaliz yöntemi, yalnızca patojenin varlığının (kalitatif analiz) değil, aynı zamanda hastanın kan serumundaki kantitatif içeriğinin de belirlenmesine olanak tanır.

Viral veya bakteriyel doz, bulaşıcı sürecin seyrini ve sonucunu önemli ölçüde etkiler, bu nedenle niceliksel analiz hastalıkların tanı ve tedavisinde önemli rol oynar. çeşitli formlar ve aşamalar.

Ancak enzim immunoassay çalışmalarını ELISA yöntemi olarak bildiğimizden, birçoğu insan ve hayvanların sağlığı ve yaşamı için doğrudan tehdit oluşturan, gezegenimizde yaşayan bu kadar geniş bir yelpazedeki mikroorganizmaları nasıl kapsayabildiğini düşünmüyoruz bile. Ancak gerçek şu ki, ELISA'nın her biri kendi sorununu çözen ve dolayısıyla hedefe yönelik bir aramaya izin veren birçok seçeneği vardır (rekabetsiz ve rekabetçi - doğrudan ve dolaylı).

Bir sınıftan veya diğerinden immünoglobulinleri tanımlamak için, sorbe edilmiş rekombinant proteinlerin katı fazda yoğunlaştığı kuyucuklarda geleneksel 96 oyuklu bir polistiren panel (plaka) kullanılır. Kan serumu ile kuyucuğa giren antikorlar veya antijenler “tanıdık” bir nesne bulur ve onunla bir kompleks oluşturur (AG - AT), bu, bir enzim konjugatı ile sabitlendiğinde kuyunun renginde bir değişiklik ile kendini gösterir. sonuçları okuyorum.

Enzim immünolojik testi, özel laboratuvarlarda üretilen ve gerekli tüm reaksiyona giren bileşenlerle donatılmış, belirli bir spesifikliğe sahip test sistemleri kullanılarak gerçekleştirilir. Araştırma, yıkama cihazları (“yıkayıcılar”) ve okuma spektrofotometreleri kullanılarak gerçekleştirilebilir; çoğu kısım için el emeği söz konusudur. Laboratuvar asistanını monoton damlatma, yıkama ve diğer rutin görevlerden kurtaran tam otomatik makinelerde çalışmak elbette daha hızlı ve daha kolaydır, ancak tüm laboratuvarlar bu kadar lüksü karşılayamaz ve eski moda şekilde çalışmaya devam edemez. yarı otomatik makineler.

ELISA sonuçlarının yorumlanması doktorun yetkisindedir. laboratuvar teşhisi Bu durumda, hemen hemen tüm immünokimyasal reaksiyonların yanlış pozitif veya yanlış negatif yanıtlar verme doğal özelliği de dikkate alınır.

Video: modern enzim immünolojik testi

Frengi örneğini kullanan ELISA sonuçları

Enzim immünolojik testi tüm formları tespit etmek için uygundur Ayrıca tarama çalışmalarında da kullanılmaktadır. Analizi gerçekleştirmek için venöz kan hasta aç karnına alınır. Çalışmada belirli bir spesifikliğe (AB sınıfları A, M, G) veya toplam antikorlara sahip tabletler kullanılıyor.

Frengide antikorların belirli bir sırayla üretildiği dikkate alındığında ELISA, enfeksiyonun ne zaman oluştuğu ve sürecin hangi aşamada olduğu sorusuna kolaylıkla cevap verebilir ve elde edilen sonuçların yorumlanması şu şekilde sunulabilir:

• IgM bulaşıcı sürecin süresini gösterir (kronik inflamatuar hastalıkların alevlenmesi sırasında ortaya çıkabilir);
• IgA, enfeksiyonun bir aydan daha uzun bir süre önce meydana geldiğini belirtiyor;
• IgG, enfeksiyonun tüm hızıyla devam ettiğini veya tedavinin yakın zamanda yapıldığını gösterir ki bu, anamnez alınarak kolayca belirlenebilir.

Frengi testi yapılırken negatif kuyucuklar (ve negatif kontrol) renksiz kalırken pozitif kuyucuklar (ve pozitif kontrol), test sırasında eklenen kromojenin renk değişimi nedeniyle parlak sarı renk gösterecektir. Ancak renk yoğunluğu her zaman kontrolle örtüşmez, yani biraz daha soluk veya hafif sarımsı olabilir. Bunlar, kural olarak, spektrofotometrede elde edilen kantitatif göstergelerin zorunlu olarak dikkate alınmasıyla yeniden incelemeye tabi olan şüpheli sonuçlardır, ancak genel olarak renk, bağışıklık komplekslerinin (ilişkili Ag'ler ve AT'ler) sayısıyla doğru orantılıdır. .

Enzim immünolojik testlerinin en heyecan verici olanı HIV ELISA'dır.

Nüfusun geniş bir kesimi için bu konuda yapılan analizler belki de diğerlerinden daha ilgi çekicidir, çünkü birçoğunun ortadan kaybolduğunu kesin olarak söylemek hâlâ imkansızdır. sosyal problemler(fuhuş, uyuşturucu bağımlılığı vb.) Ne yazık ki HIV, insan toplumunun yalnızca bu katmanlarını etkilemekle kalmıyor; cinsel ahlaksızlık veya uyuşturucu kullanımıyla ilgili olmayan çeşitli koşullar altında da enfekte olabilirsiniz. Ancak HIV testi yapılması gerekiyorsa böyle bir laboratuvara gittiğinizi çevrenizdeki herkesin bileceğinden korkmamalısınız. Artık HIV ile enfekte kişiler yasalarla korunuyor ve şüpheleri olanlar, tanıtım ve kınama korkusu olmadan sorunu çözebilecekleri anonim ofislere başvurabiliyor.

HIV enfeksiyonunu teşhis etmek için kullanılan enzime bağlı immünosorbent yöntemi, en önemli standart testlerden biridir; Özel durumlarÇünkü konu çok hassas.

HIV ELISA'nın cinsel temastan, kan naklinden, enfeksiyonu düşündüren diğer tıbbi prosedürlerden sonra ve kuluçka döneminin sonunda ("seronegatif pencere") yapılması mantıklıdır, ancak bu sürenin kısa olmadığı akılda tutulmalıdır. kalıcı. 14-30 günde bitebileceği gibi altı aya kadar da sürebilir, yani ortalama değer 45 ile 90 gün arası bir aralık olarak kabul edilir. Açık HIV kanı Diğer enfeksiyonlarla aynı şekilde verilirler - aç karnına damardan. Sonuçlar, laboratuvardaki malzeme birikimine ve iş yüküne bağlı olarak hazır olacaktır (2 ila 10 gün arası), ancak çoğu zaman laboratuvarlar aynı gün veya ertesi gün yanıt verir.

HIV sonuçlarınızdan ne bekleyebilirsiniz?

HIV enfeksiyonu için ELISA, iki virüs türüne karşı antikorları tespit eder: HIV-1 (Rusya'da ve diğer Avrupa ve Asya ülkelerinde daha yaygın) ve HIV-2 (Batı Afrika'da daha yaygın).

HIV ELISA'nın görevi, tüm test sistemlerinde tespit edilen ancak daha sonraki bir dönemde G sınıfı antikorları ve yeni nesil rekombinant test kitlerinde tespit edilen ve antikor bulmayı mümkün kılan A ve M sınıfı antikorları aramaktır. en çok erken aşamalar (kuluçka süresi– “seronegatif pencere”). ELISA'dan aşağıdaki yanıtları bekleyebilirsiniz:

1. Birincil pozitif sonuç: Kan aynı tipte bir test sistemi kullanılarak, ancak mümkünse farklı bir seriden ve başka bir kişi (laboratuvar asistanı) tarafından yeniden test edilmelidir;
2. Tekrarlanan (+) öneri yeni çit birincil analize benzer muayenesi ile hastadan alınan kan;
3. Bir başka olumlu sonuç, oldukça spesifik test kitlerinin (2-3 adet) kullanıldığı referans analizine tabidir;
4. Her iki (veya üç) sistemde de pozitif bir sonuç immünoblotlama için gönderilir (aynı ELISA, ancak bireysel olaraközellikle yüksek spesifikliğe sahip test kitleri için).

HIV enfeksiyonu ile ilgili sonuç yalnızca immünoblotlama temelinde yapılır. Enfekte olan kişiyle tamamen gizlilik içinde bir görüşme yapılır. Rusya'da ve diğer ülkelerde tıbbi sırların ifşa edilmesi cezai yaptırıma tabidir.

Enzim immünoassay yöntemini kullanan klamidya ve sitomegalovirüs testleri de enfeksiyon zamanını, hastalığın evresini ve tedavi önlemlerinin etkinliğini belirlemeyi mümkün kıldıkları için özellikle popülerlik kazanmıştır.

Uygulama sırasında çeşitli sınıflardaki antikorların görünümü de gözlemlenebilir. bulaşıcı bir ajanın neden olduğu patolojik durumun farklı aşamalarında:

• IgM, enfeksiyondan yedi gün sonra bile tespit edilebilir;
• IgA, enfeksiyonun vücutta bir aydan uzun süredir yaşadığını gösterir;
• IgG, klamidya teşhisini doğrular ve tedavinin izlenmesine ve etkinliğinin belirlenmesine yardımcı olur. G sınıfı antikorların hastalığın süresine bakılmaksızın vücutta kaldığı ve dolaştığı unutulmamalıdır, bu nedenle analizi doğru bir şekilde yorumlamak için referans değerlerini (normları) dikkate almanız gerekir. , her CDL için farklıdır: test sisteminin markası ve sette bulunan reaktiflerin özellikleri dikkate alınarak. ELISA sonucunun yanındaki forma normal değerler girilir.

konusuna gelince, burada durum biraz farklı: M sınıfı antikorlar yaklaşık bir buçuk ay sonra ortaya çıkar, yani sonuç (IgM+), birincil enfeksiyon aşamasında veya yeniden aktivasyon sırasında pozitif olur. gizli enfeksiyon ve 4 aydan altı aya kadar bu şekilde kalır.

G AT sınıfının varlığı birincil başlangıcın karakteristiğidir Akut enfeksiyon veya yeniden enfeksiyon. Analizde virüsün var olduğu belirtiliyor ancak bulaşıcı sürecin hangi aşamada olduğuna dair bilgi verilmiyor. Bu arada normal IgG titresinin belirlenmesi de zorluklara neden olur, çünkü bu tamamen şunlara bağlıdır: bağışıklık durumu Belirli kişi Ancak bu, G sınıfı immünoglobülinlerin tanımlanmasıyla belirlenir Antikorların bu davranışı göz önüne alındığında, CMV tanısı konurken, G sınıfı antikorların CMV ile etkileşime girerek onu "nötralize etme" (AT avidity) yeteneğini değerlendirmeye ihtiyaç vardır. ). Açık İlk aşama IgG hastalıkları viral antijenlere çok zayıf bağlanır (düşük avidite) ve ancak o zaman aktivite göstermeye başlar, bu nedenle antikorların aviditesinde bir artıştan söz edebiliriz.

Enzim immünoanalizinin avantajlarından çokça bahsedebiliriz çünkü bu yöntem, yalnızca venöz kan kullanarak birçok teşhis problemini çözmeyi başarmıştır. Araştırma için materyal toplama konusunda uzun beklemelere, endişelere ve sorunlara gerek yok. Ayrıca ELISA test sistemleri geliştirilmeye devam ediyor ve testin %100 güvenilir sonuç vereceği gün çok uzakta değil.

Video: Moskova Devlet Tıp Üniversitesi'nin adını taşıyan eğitim filmi. Sechenov, ELISA'nın temelleri hakkında

RU 2283497 patentinin sahipleri:

Buluş biyoteknoloji ve tıp alanıyla ilgilidir. Birinci ve ikinci tip insan immün yetmezlik virüsüne (HIV), birinci tip grup O'ya karşı antikorların spektrumunu tanımlamak ve birinci tip p24 insan immün yetmezlik virüsüne karşı antijeni tanımlamak için enzim bağlantılı immünosorbent test sistemi, gp41 (env HIV-1 ve HIV-2 grup O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), HIV antijeni 1'e karşı antikorları temsil eden insan immün yetmezlik virüsü antijenlerine dayanan immünosorbent p24 ve saptama reaktifleri, enzim bağlantılı immünosorbent tahlili için plakaların farklı yuvalarına emdirilen yukarıdaki HIV antijenleri ve HIV antikorları ve soğurma için 96 yuvalı polistiren katlanabilir veya ayrılamayan plakalar kullanılır. Buluş, sonuçların değerlendirilmesinde hassasiyetin arttırılmasını, basitleştirilmesini ve subjektifliğin ortadan kaldırılmasını sağlar. 1 maaş dosyalar, 10 tablo, 1 hasta.

Buluş biyoteknoloji ve tıp alanıyla ilgilidir. Kullanım: İnsan immün yetmezlik virüsü proteinleri 1 ve 2, HIV 1 grup O ve HIV 1 p24 antijenine karşı tüm spesifik antikor sınıflarının farklılaştırılmış tespiti.

Öz: kan serumunda (plazma), immünoglobulinlerde ve insan kan ürünlerinde HIV 1 ve 2, HIV 1 grup O ve HIV 1 p24 antijenine karşı tüm sınıflardaki antikorların spektrumunu tanımlamak için enzim bağlantılı bir immünosorban test sisteminin elde edilmesi HIV 1 ve 2, HIV 1 grup O'ya karşı antikor spektrumunu tanımlamak, HIV 1 p24 antijeninin saptanması ve HIV 1 ve 2, HIV 1 grup O ve HIV 1 p24 antijenine karşı antikorlar için pozitif veya şüpheli tarama sonuçlarının doğrulanması.

BULUŞUN AÇIKLAMASI

HIV enfeksiyonunun laboratuvar tanısı üç alana dayanmaktadır: a) HIV ve bileşenlerinin endikasyonu; b) HIV'e karşı antikorların tespiti; c) Bağışıklık sistemindeki değişikliklerin belirlenmesi. Arasında mevcut yöntemler En yaygın laboratuvar teşhisi serolojiktir - virüs antijenlerine karşı antikorların tespiti.

HIV enfeksiyonunda antikorları tespit etmek için esas olarak enzime bağlı immünosorbent tahlili (ELISA) ve immünoblotlama (IB) kullanılır. ELISA, viral antijenlerin hastanın antikorlarının bağlandığı plakalar üzerinde immobilizasyonuna dayanır ve antijen-antikor kompleksi, insan immünoglobülinleri G ve M'ye karşı yaban turpu peroksidazı ile konjuge fare monoklonal antikorları kullanılarak tespit edilir. Yöntem oldukça spesifik ve hassastır ve hastaların %95'inde virüse özgü antikorların saptanmasına olanak sağlar. Vakaların geri kalan %5'i, kan serumunda hala çok az antikor bulunduğunda enfeksiyonun erken evrelerinde veya vücudun şiddetli tükenme nedeniyle artık antikor sentezleyemediği hastalığın terminal evrelerinde ortaya çıkar. bağışıklık sistemi. Yanlış pozitif ELISA sonuçları, özellikle otoimmün ve onkolojik hastalıkları olan hastalarda ve ayrıca Eshptain-Barr virüsünün neden olduğu enfeksiyon vakalarında da mümkündür. Bu durumda antikorların romatoid faktöre çapraz reaksiyonu meydana gelir; Epstein Barr Virüsü veya ana doku uyumluluk kompleksi sınıf 1 ve 2'nin (HLA-4 ve DQW3) proteinlerine benzer olan ve HIV antijenlerine bağlanma yeteneğine sahip antijenik determinantlara. Yanlış pozitif sonuçlar hamile kadınlarda ve yaşlılarda yaygındır. Hemoliz, lipemi ve serumun bakteriyel kontaminasyonu da güvenilmez sonuçlara neden olabilir.

Bu bağlamda, antikor tespit sonuçlarının özgüllüğünü test etmek için bir dizi yöntem önerilmiş ve kullanılmıştır. Bu yöntemlerden en sık kullanılanı “Western Blot” modifikasyonunda “immun blot” reaksiyonudur. Yöntemin özü şu şekildedir: İlk aşamada HIV proteinleri, poliakrilamid jel elektroforezi kullanılarak moleküler ağırlığa göre ayrılır. Daha sonra poliakrilamid jelden yüzeye elektroforetik transfer gerçekleştirilir. nitroselüloz membran. Bu şekilde aktarılan antijenler, dolaylı analiz kullanılarak membran üzerinde tespit edilir: membran, test materyali ile inkübe edilir; içerilen antikorlar nitroselüloz membrana aktarılan HIV antijenlerine bağlanır, daha sonra membran şeritleri konjugat ile inkübe edilir; Bir antijen-antikor kompleksi oluştuğunda, konjugat ona bağlanır; konjugattan yıkandıktan ve substrat ile inkübasyondan sonra, antijen-antikor-konjugat kompleksi oluşumunun meydana geldiği nitroselüloz alanlarında boyama meydana gelir. Çizimde pozitif, zayıf pozitif ve negatif immünoblot sonuçlarının örnekleri gösterilmektedir.

HIV-1 ve HIV-2 ile enfekte kişilerin serumunda aşağıdaki proteinlere (p) ve glikoproteinlere (gp) karşı antikorlar tespit edilmiştir: Tablo A.

Tablo B, DSÖ ve Rusya AIDS Önleme ve Kontrol Merkezi tarafından önerilen immünoblotlama sonuçlarının değerlendirilmesine yönelik kriterleri sunmaktadır.

WHO kriterlerine göre, herhangi iki HIV-1 zarf proteinine karşı antikorların IB yöntemiyle tespit edildiği serumlar pozitif kabul edilir. Zarf proteinlerinden yalnızca biriyle (gp160, gp120, gp41) diğer proteinlerle kombinasyon halinde veya reaksiyon olmadan reaksiyon varsa sonuç şüpheli kabul edilir. Rusya Federasyonu Sağlık Bakanlığı'nın AIDS'in Önlenmesi ve Kontrolü Federal Bilimsel ve Metodoloji Merkezi'ne göre, yalnızca bir membran proteinine karşı antikorların varlığında bile serumları pozitif olarak yorumlamak mümkündür.

p24 antijenine karşı antikorların saptanması serokonversiyonun başlangıç ​​periyodunu gösterebilir, çünkü bu proteine ​​karşı antikorlar ilk önce ortaya çıkar. Env proteinleriyle reaksiyon olmadan gag ve pol proteinleriyle pozitif reaksiyonlar, erken serokonversiyon aşamasını yansıtabilir ve ayrıca HIV-2 enfeksiyonunun veya spesifik olmayan bir reaksiyonun varlığına işaret edebilir.

HIV tanısı için uzman bir yöntem olarak immünoblotlama reaksiyonunun kullanılmasının bir takım önemli dezavantajları vardır:

1. HIV'e karşı antijen ve antikorları aynı anda tespit eden testlerin kullanılması durumunda HIV 1 p24 antijeninin tespitinin doğrulanmasının imkansızlığı, bu da HIV'e karşı antijen ve antikorların eşzamanlı tespiti için tarama testlerinin kullanılmasını uygunsuz (anlamsız) hale getirir ( Rusya Federasyonu Sağlık Bakanlığı'nın 30 Temmuz 2001 tarih ve 292 sayılı Emri: “kan nakil istasyonlarındaki bağışçıları incelemek için, HIV'e karşı antijen ve antikorları aynı anda tespit eden test sistemlerinin kullanılması gerekmektedir”).

2. Yalnızca IgG sınıfına ait antikorların tespiti. 3. ve 4. nesil testler (tespit) kullanılarak elde edilen olumlu sonuçların tam olarak doğrulanması mümkün değildir. IgG antikorları ve IgM).

3. Özellikle “şüpheli” ve “belirsiz” sonuçlar olması durumunda test puanlarının yorumlanmasında öznellik ve Ilk aşamalar serokonversiyon (bu vakalarda nitroselüloz membranlarda tespit edilen bantlar belirsizdir, çıplak gözle zar zor görülebilir ve değerlendirme sırasında farklı kişiler tarafından genellikle anlaşmazlıklar vardır).

4. Otomatikleştirmenin İmkansızlığı nicelik belirleme analiz sonuçları.

5. ELISA'ya kıyasla daha düşük hassasiyet.

6. Kısa raf ömrü (depolama sırasında nitroselüloz membran şeritleri solar ve tartışmalı vakalarda HIV'in saptanıp saptanmadığının objektif bir onayı olamaz).

7. Reaksiyonun kurulması ve saklanması zorluğu (nitroselüloz membran şeritleri çok kırılgandır ve sıklıkla kırılır).

8. Bilgi güvenliği kitlerinin yüksek maliyeti.

Bilinen bir reaktif, HIV dahil aynı patojene karşı antijenlerin ve antikorların eşzamanlı belirlenmesine yönelik bir kittir (DE 4236189 F1, 28.04.1994). Ancak HIV enfeksiyonunun çeşitli aşamalarda teşhis edilmesine olanak tanıyan bir test sistemi açıklanmamıştır.

Mevcut buluşun amacı, eş zamanlı tespit için testler kullanıldığında HIV 1 ve 2, HIV 1 grup O ve HIV 1 p24 antijenine karşı antikorlara yönelik tarama testlerinin pozitif veya şüpheli sonuçlarını doğrulamanın mümkün olduğu bir test sistemi elde etmektir. antijenler ve antikorlar.

Önerilen teknik çözüm birinci ve ikinci tip O grubu insan immün yetmezlik virüsüne (HIV) karşı antikorların spektrumunu tanımlamak ve birinci grup O'nun insan immün yetmezlik virüsüne karşı p24 antijenini tanımlamak için enzim bağlantılı bir immünosorban test sistemi ile gerçekleştirilir. tip p24, gp41 (env HIV-1 ve HIV-2 grup O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env)'yi temsil eden insan immün yetmezlik virüsü antijenlerine dayanan bir immünosorbent içermesiyle karakterize edilir HIV-2), HIV 1 antijeni p24'e karşı antikorlar ve tespit reaktifleri bulunurken, yukarıda belirtilen HIV antijenleri ve HIV antikorları, enzime bağlı immünosorbent tahlili için plakaların farklı yuvalarına emilir.

Ek olarak, sorpsiyon için enzim immünolojik tahlili için 96 gözlü polistiren katlanabilir veya sökülemez plakalar kullanılır.

Mevcut buluşla elde edilen teknik sonuç, HIV 1 ve 2, HIV 1 grup O ve HIV 1 p24 antijenine karşı antikorlar için pozitif sonuçların doğrulanması olasılığı, yüksek hassasiyet, sonuçların otomatik olarak yorumlanma olasılığı olup, bu da testin subjektifliğini ortadan kaldırır. değerlendirme, testi gerçekleştirme kolaylığı, mevcut maliyet bilgi güvenliği setlerine göre daha azdır.

Bu teknik çözüm bilinenlerden farklıdır:

1. Katı faz taşıyıcısı olarak immünolojik reaksiyonlar için bir plakanın kullanılması.

2. HIV p 24'e karşı antikorların ve bir sorbent olarak bir dizi HIV antijeninin eşzamanlı kullanımı.

Buluş aşağıdaki örnekle açıklanmaktadır.

Geliştirilen "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + AG p24 HIV 1" test sisteminin aktif prensipleri şunlardır:

İmmünosorbent - HIV-1'in yapısal proteinlerine benzer rekombinant antijenler: gp41 (env HIV-1 ve HIV 1 grup O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), HIV-2: gp36 (env) ve polistiren katlanabilir plakanın şeritleri üzerine ayrı ayrı adsorbe edilen HIV 1(p24) antijenine karşı monoklonal fare antikorları.

İmmünosorbent kullanımını hazırlamak için:

1. HIV-1 gp41, E. Coli suşu No. AHIV 103 tarafından üretilen bir proteindir.

2. HIV-1 gp120, E. Coli suşu No. AHIV 109 tarafından üretilen bir proteindir.

3. HIV-1 p24, E. Coli suşu No. AHIV 105 tarafından üretilen bir proteindir.

4. HIV-1 p31, E. Coli suşu No. AHIV 108 tarafından üretilen bir proteindir.

5. HIV-2 p36, E. Coli suşu No. AHIV 106 tarafından üretilen bir proteindir.

Liyofilize veya sıvı Konjugat 1, biyotin ile konjuge edilmiş HIV1 p24 antijenine yönelik bir fare monoklonal antikorudur.

1. Liyofilize veya sıvı Konjugat 2, HIV-1'in yapısal proteinlerine benzer rekombinant antijenlerin bir karışımıdır: gp41 (env HIV-1 ve HIV 1 grup O), gp120 (env), p24 (gag), p31( po1); HIV-2: biyotine konjuge gp36 (env);

2. Yaban turpu peroksidazı ile etiketlenmiş konjugatlar 3, 4 - liyofilize veya sıvı - streptavidin;

Ön çalışmalar sırasında test sisteminin tasarımı seçildi, bileşenlerini hazırlama teknolojisi geliştirildi ve enzim immünolojik test reaksiyonunu yürütme koşulları optimize edildi.

"DS - ELISA - ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + Ag p24 HIV 1" test sisteminde ELISA yapılırken, p24'e emdirilmiş antikorlarla plakanın oyuklarına 25 ul konjugat-1 eklenir ve 25 ul Sorbe edilmiş antijenlerin bulunduğu kuyucuklara konjugat-1 eklenir, 25 µl konjugat-2. Reaksiyon şeması aşağıda gösterilmiştir. Daha sonra her kuyucuğa 25 ul test numunesi eklenir. Aynı zamanda, antijenli kuyucuklarda renk turuncudan pembeye, antikorlu kuyucuklarda ise yeşilden griye değişir. Karışım, bir çalkalayıcı üzerinde 37°C'de 45 dakika (veya bir termostatta 37°C'de 1 saat) inkübe edilir. Daha sonra yıkamadan, p24 antijenini belirlemek için plakanın kuyucuklarına 50 µl konjugat-3 ve antikorları belirlemek için kuyucuklara 50 µl konjugat-4 ekleyin. Bir çalkalayıcı üzerinde 37°C'de 20 dakika (veya bir termostatta 37°C'de 30 dakika) inkübasyondan sonra plaka yıkanır ve bir substrat karışımı ile geliştirilir. Toplam reaksiyon süresi 1 saat 25 dakika (veya 1 saat 50 dakika). Test örneğinde bulunan p24 antijeni, p24'e yönelik monoklonal antikorlara bağlanır ve spesifik antikorlar, plaka üzerinde rekombinant antijenlerle bir kompleks oluşturur. Ortaya çıkan anti-p24 ile p24'ün bağışıklık kompleksi, anti-p24-biyotin konjugatları, ardından streptavidin-peroksidaz ile tespit edilir ve At-HIV ile Ag-HIV immün kompleksleri, bir Ag-biyotin konjugatı, ardından streptavidin- ile tespit edilir. peroksidaz.

Reaksiyonun kurulum şeması.

Sonuçlar, cihaz "hava yoluyla" yapılandırıldığında 450/620-680 nm olmak üzere iki dalga boyunda spektrofotometrik olarak dikkate alınır. 450 nm'lik bir dalga boyundaki sonuçları dikkate alalım.

K-'li kuyucuklardaki ortalama optik yoğunluk (OD) değerleri 0,2'den fazla değilse, K+'lı kuyucuklarda - 1,0'dan az değilse, analiz sonuçları dikkate alınır. OP kritik. formülle hesaplanır:

OP kritik. gp41 = ortalama. Anlam OP K-(gp41)+0.15

OP kritik. gp120 = ortalama. Anlam OP K-(gp120)+0.15

OP kritik. p24 = ortalama. Anlam OP K-(р24)+0.15

OP kritik. p31 = ortalama. Anlam OP K-(р31)+0.15

OP kritik. gp36 = ortalama. Anlam OP K-(gp36)+0.15

OP kritik. Ag p24 = ort. Anlam OP k- (Ag p24)+0,04

burada 0,15 ve 0,04, imalatçıda istatistiksel işlemlerle belirlenen katsayılardır. Test sisteminin geliştirilmesi sırasında aşağıdakiler kullanıldı:

1. Sağlıklı donörlerden alınan kan serumu örnekleri (n=610).

2. Çeşitli hastalardan alınan kan serumu örnekleri bulaşıcı hastalıklar HIV ile ilişkili olmayan (akut solunum yolu enfeksiyonları, zatürre, bademcik iltihabı, herpetik ve sitomegalovirüs enfeksiyonu, frengi, klamidya, viral hepatit A, B ve C (n=224)).

3. Çeşitli hastalardan alınan kan serumu örnekleri bulaşıcı Olmayan Hastalıklar- yaralanmalar, hastalıklar kardiyovasküler sistemin, onkoloji (n=35).

4. Gebe kadınlardan alınan kan serumu örnekleri (n=40).

5. ELISA'da seropozitif olan ve immünoblotta doğrulanan kan serumu örnekleri (n=428).

6. HIV 1.2 antikorları ve p24 antijeninin eş zamanlı tespiti için enzim immünolojik test sistemlerinde pozitif sonuç veren ve immünoblot ile belirsiz sonuç veren serum numuneleri (n=123).

7. HIV 1,2'ye karşı antikor içeren ve içermeyen, enzim immünolojik test sistemleri ve Rusya Federasyonu Sağlık Bakanlığı tarafından tescilli immünoblot ile test edilen serumlardan oluşan dahili panel (n=21).

8. Standart "HIV 1 ANTİJEN STANDARDI", "BIO RAD", Fransa, kat. No. 72217, viral lizattan elde edilen bir antijendir.

9. İşletmenin iç standardı. Viral lizattan elde edilen ve "HIV 1 ANTIGEN STANDARD" şirketi "BIO RAD", Fransa, kat. 72217 numara.

10. İnsan bağışıklık yetersizliği virüsü tip 1'e (HIV 1) karşı antikorlar içeren standart serum paneli - OSO 42-28-212-93-02P, "Medical and Biological Union", Novosibirsk.

11. İnsan bağışıklık yetersizliği virüsü tip 2'ye (HIV 2) karşı antikorlar içeren serumların standart paneli - OSO-42-28-216-02P, "Medical and Biological Union", Novosibirsk.

12. İnsan immün yetmezlik virüsü tip 1 ve 2'ye (HIV 1, 2) karşı antikorlar içermeyen standart serum paneli - OSO-42-28-214-94-02P, "Medical and Biological Union", Novosibirsk.

Test sisteminin p24 antijenini tespit etme hassasiyeti, "HIV I ANTİJEN STANDARDI", "BIO RAD" ve kuruluşun Dahili Standardı kullanılarak değerlendirildi. Dahili Standart kullanılarak, seyreltici olarak HIV antikorları 1, 2 içermeyen normal donör plazması ile 40 pg/ml'den 5 pg/ml'ye kadar 4 seri 2 kat seyreltme hazırlandı. Duyarlılık kriteri olarak saptanabilen en küçük antijen miktarı alındı. Elde edilen veriler Tablo 1'de sunulmaktadır.

Spesifik antikorların saptanmasında test sisteminin hassasiyetini değerlendirmek için insan immün yetmezlik virüsüne (HIV 1, 2) karşı antikorlar içeren standart numune panelleri kullanıldı (OSO 42-28-212-93-02P s.012, OSO 42- 28-216-02P (HIV 2) s.003).

Elde edilen veriler tablo 3, 4'te sunulmaktadır.

"DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1" test sisteminin tanısal etkinliği "Jenskrin-HIV-Ag/At" (Bio-Rad), "DIA-HIV" test sistemleriyle karşılaştırıldı 1/2" (Diaprof-Med), "Vironostika HIV Uni-form II Ag/At" (Biomerioux), "Rekombinant-HIV1,2 DSM" (MBS), "Amercard Anti-HIV-1,2 K" (Amercard) ), "HIV-1, HIV-2-ELISA-Avicenna" (Avicenna). Bu amaçla dahili panelden alınan serum numuneleri belirlenen tüm testlerde test edilmiştir. Tablo 5'te sunulan sonuçlar, "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1"in yüksek tanısal etkinliğini göstermektedir.

"DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" test sisteminin duyarlılık çalışmaları, immünoblotlamayla HIV pozitif olduğu doğrulanan hastaların kan serumlarıyla da gerçekleştirildi. Bu tür serumların toplam 428 örneği test edildi. Farklı HIV proteinlerine ve p24 antijenine karşı antikorların saptanması için çeşitli seçenekler elde edilmiştir. Sonuçlar Tablo 6'da sunulmaktadır.

HIV 1 pozitif örnekleri test ederken serumların %3'ü şunu gösterdi: olumlu tepki gp36 (HIV env 2) ile. OP/OPcrit. bu örneklerde 2,0'ı aşmadı. HIV 1 (gp41) ve HIV 2'nin (gp36) dış kabuk proteinlerinin çapraz reaktivitesine ilişkin verilerimiz literatür verileriyle örtüşmektedir.

Sonuçların yorumlanması

"DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1"de HIV pozitif serumların ve standart ve dahili panellerden alınan numunelerin testinin analizi, bu testin sonuçlarını yorumlamak için kriterler geliştirmemize olanak sağladı. Önerilen kriterler Tablo 7'de verilmiştir.

Bu kriterlere göre HIV pozitif serum örneklerinin tamamının (n=428) “DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV1” testinde pozitif olduğu belirlendi. HIV 1'e karşı antikor içeren standart panelin 16 örneğinden 14'ünün pozitif, 2'sinin ise belirsiz olduğu belirlendi. HIV 2'ye karşı antikorlar içeren standart panelden alınan 8 örneğin tamamının pozitif olduğu belirlendi. HIV 1'e karşı antikor içeren iç paneldeki 10 örnekten 7'sinin pozitif, 3'ünün ise belirsiz olduğu belirlendi.

Antikorları ve eş zamanlı olarak antikorları tespit eden enzim bağlantılı immünosorbent test sistemlerinde pozitif sonuç veren hastaların kan serumları ile "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" test sisteminin duyarlılık çalışmaları da yapıldı. p24 antijeni ve immünoblotta belirsiz. Bu tür toplam 123 numune test edildi. Veriler Tablo 8'de sunulmaktadır.

“DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1”de belirsiz immünoblot sonucu (n=123) olan serumlar test edilirken 72 örnek (%58,5) pozitif sonuç gösterdi. Bunlardan 26 serum (%21,1) yalnızca p24 için pozitifti, 20'si (%16,3) - yalnızca antikorlar için, 16'sı (%13) - proteinlerden birine karşı antikorlarla p24 için, 10'u (%8,1) - p24 üzerinde iki veya daha fazla proteine ​​karşı antikorlar. Bu nedenle, yalnızca antikorlar için test yapılması (p24 tespit edilmeden), 30 örneğin (%24,4) pozitif olarak tanımlanmasını sağlayacaktır. Testte p24 antijeninin saptanması, ilave 42 numunenin (%34,1) pozitif olarak tanımlanmasına olanak sağladı.

Test sisteminin özgüllüğünü değerlendirmek için HIV 1, 2'ye (n=20) karşı antikor içermeyen standart bir serum paneli kullanıldı; sağlıklı donörlerden alınan kan serumu örnekleri (n=610), HIV ile ilişkili olmayan çeşitli enfeksiyon hastalıkları olan hastalardan alınan kan serumu örnekleri (n=224); çeşitli bulaşıcı olmayan hastalıkları (travma, kardiyovasküler sistem hastalıkları, onkoloji) olan hastalardan alınan kan serumu örnekleri (n=35); hamile kadınlardan alınan kan serumu örnekleri (n=40). Toplam 929 örnek test edildi. Sağlıklı donörlerin kan serumlarından alınan bir örnek yanlış pozitif sonuç gösterdi; gp41 ve p24'e karşı antikorlar tespit edildi. Sağlıklı donörlerden alınan 7 kan serumu örneği ve HIV ile ilişkili olmayan bulaşıcı hastalıkları olan hastalardan alınan 2 kan serumu örneği, p24 için yanlış pozitif sonuç gösterdi.

Test sisteminin özgüllüğünü değerlendirmek için standart bir negatif örnek paneli kullanıldı (OSO 42-28-214-94-02p, s. 009). Spesifiklik %100 idi.

Böylece yapılan çalışmalar, normal donörlerden ve çeşitli bulaşıcı ve somatik hastalıkları olan hastalardan alınan kan serumu örneklerini incelerken “DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1” test sisteminin özgüllüğünün %99 olduğunu göstermiştir. .

Elde edilen veriler, geliştirilen "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1" test sisteminin yüksek teşhis etkinliğini göstermektedir. Test sistemi, antikorları tespit eden test sistemleriyle veya antikorları ve HIV1 p24 antijenini aynı anda tespit eden test sistemleriyle pozitif bir tarama sonucunu doğrulamak amacıyla HIV tip 1 ve 2'nin ayrı ayrı proteinlerine ve HIV1 p24 antijenine karşı antikorları tespit etmek için kullanılabilir. Test sistemi, pozitif sonuçları doğrulamanın yanı sıra HIV antikorlarının ve p24 antijeninin dinamiklerini incelemek için alternatif bir immünoblot testi olarak kullanılabilir. Farklı aşamalar enfeksiyonlar.

TESTİN AVANTAJLARI

1. Tablet formatında doğrulayıcı enzim immünolojik testi

2. HIV 1, 2 antikor spektrumu ve HIV 1 p24 antijeninin belirlenmesini birleştiren doğrulayıcı test

3. Tüm Ig sınıflarına ait antikorların tespiti

4. p24'ü tespit etme hassasiyeti en az 5 pg/ml'dir

5. İmmünoblotlamaya kıyasla belirsiz sonuçları azaltır

6. Analiz süresi - 1 saat 25 dakika (immunoblot - 3 ila 20 saat arası)

7. Tüm bileşenlerin ve örneklerin eklenmesinin görsel değerlendirmesi.

1. Birinci ve ikinci tip insan immün yetmezlik virüsüne (HIV), birinci tip grup O'ya karşı antikorların spektrumunu tanımlamak ve birinci tip insan immün yetmezlik virüsüne karşı p24 antijenini tanımlamak için enzim bağlantılı bir immünosorban test sistemi p24, gp41 (env HIV-1 ve HIV-2 grup O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV)'i temsil eden, insan immün yetmezlik virüsü antijenlerine dayanan bir immünosorbent içermesiyle karakterize edilir -2), HIV 1 antijeni p24'e karşı antikorlar ve tespit reaktifleri bulunurken, yukarıda bahsedilen HIV antijenleri ve HIV antikorları, enzime bağlı immünosorbent tahlili için plakaların farklı yuvalarına emilir.

2. İstem 1'e göre enzim bağışıklık tahlili test sistemi olup, bu sistemin özelliği, emme için enzim bağışıklık tahlili için 96-yuvalı polistiren çökebilir ya da ayrılamaz plakaların kullanılmasıdır.

Tedaviye erken başlanması büyük ölçüde belirleyici olabileceğinden, HIV enfeksiyonunun zamanında teşhisi son derece önemli bir önlem haline gelir. Daha fazla gelişme Hastalığı önler ve hastanın ömrünü uzatır. İÇİNDE son yıllar Bu durumun tespit edilmesinde önemli ilerleme kaydedildi korkunç hastalık: Eski test sistemleri yerini daha gelişmişlerine bırakıyor, sınav yöntemleri daha erişilebilir hale geliyor ve doğrulukları önemli ölçüde artıyor.

Bu yazıda, bilgisi bu sorunun zamanında tedavisi ve hastanın normal yaşam kalitesinin sürdürülmesi için yararlı olan HIV enfeksiyonunun teşhisine yönelik modern yöntemlerden bahsedeceğiz.

HIV tanı yöntemleri

Rusya'da HIV enfeksiyonunu teşhis etmek için iki seviye içeren standart bir prosedür yürütülmektedir:

• ELISA test sistemi (tarama analizi);
• immünoblotlama (IB).

Tanı için başka yöntemler de kullanılabilir:

• hızlı testler.

ELISA test sistemleri

Teşhisin ilk aşamasında, HIV enfeksiyonunu tespit etmek için laboratuvarlarda oluşturulan ve enfeksiyona yanıt olarak vücutta üretilen spesifik antikorları yakalayan HIV proteinlerine dayanan bir tarama testi (ELISA) kullanılır. Test sisteminin reaktifleri (enzimleri) ile etkileşime girdikten sonra göstergenin rengi değişir. Daha sonra bu renk değişiklikleri, yapılan analizin sonucunu belirleyen özel ekipmanlar kullanılarak işlenir.

Bu tür ELISA testleri, HIV enfeksiyonunun ortaya çıkmasından sonraki birkaç hafta içinde sonuçları gösterebilir. Bu test virüsün varlığını belirlemez ancak ona karşı antikor üretimini tespit eder. Bazen insan vücudunda HIV'e karşı antikor üretimi enfeksiyondan 2 hafta sonra başlar, ancak çoğu insanda bu antikorlar daha uzun süre üretilir. Daha sonra 3-6 hafta sonra.

Farklı hassasiyetlere sahip dört nesil ELISA testi vardır. Son yıllarda sentetik peptidlere veya rekombinant proteinlere dayanan ve daha yüksek özgüllük ve doğruluğa sahip olan üçüncü ve dördüncü nesil test sistemleri giderek daha fazla kullanılmaktadır. HIV enfeksiyonunu teşhis etmek, HIV yaygınlığını izlemek ve bağışlanan kanı test ederken güvenliği sağlamak için kullanılabilirler. Nesil III ve IV ELISA test sistemlerinin doğruluğu %93-99'dur (ülkelerde üretilen testler daha hassastır) Batı Avrupa – 99%).

ELISA testinin yapılabilmesi için hastanın damarından 5 ml kan alınır. Son öğün ile analiz arasında en az 8 saat geçmelidir (genellikle sabahları aç karnına yapılır). Böyle bir testin, şüphelenilen enfeksiyondan en geç 3 hafta sonra (örneğin, yeni bir cinsel partnerle korunmasız cinsel ilişkiden sonra) yapılması önerilir.

ELISA testi sonuçları 2-10 gün içinde elde edilir:

• Negatif sonuç: HIV enfeksiyonunun olmadığını gösterir ve bir uzmana başvurmayı gerektirmez;
• Yanlış negatif sonuç: enfeksiyonun erken evrelerinde (3 haftaya kadar), AIDS'in sonraki evrelerinde bağışıklık sisteminin ciddi şekilde baskılanması ve yanlış kan hazırlığı ile gözlemlenebilir;
• Yanlış pozitif sonuç: Bazı hastalıklarda ve kanın uygunsuz hazırlanması durumunda görülebilir;
• Olumlu sonuç: HIV enfeksiyonunu gösterir, IB yapılmasını ve hastanın AIDS merkezindeki bir uzmana başvurmasını gerektirir.

ELISA testi neden yanlış pozitif sonuçlar verebilir?

Yanlış pozitif HIV ELISA testi sonuçları, kanın yanlış işlenmesi nedeniyle veya aşağıdaki durum ve hastalıklara sahip hastalarda ortaya çıkabilir:

• multipil myeloma;
• Epstein-Barr virüsünün neden olduğu bulaşıcı hastalıklar;
• sonrasındaki durum;
• otoimmün hastalıklar;
• hamileliğin arka planına karşı;
• aşılama sonrası durum.

Yukarıda açıklanan nedenlerden dolayı kanda, üretimi HIV enfeksiyonu tarafından tetiklenmeyen, spesifik olmayan çapraz reaksiyona giren antikorlar mevcut olabilir.

Son yıllarda, daha hassas peptit ve rekombinant proteinler içeren (bunlar in vitro genetik mühendisliği kullanılarak sentezlenir) nesil III ve IV test sistemlerinin kullanılması nedeniyle yanlış pozitif sonuçların sıklığı önemli ölçüde azalmıştır. Bu tür ELISA testlerinin kullanıma sunulmasından sonra yanlış pozitif sonuçların sıklığı önemli ölçüde azaldı ve yaklaşık %0,02-0,5 oldu.

Yanlış pozitif sonuç, kişinin HIV ile enfekte olduğu anlamına gelmez. Bu gibi durumlarda, DSÖ başka bir ELISA testinin (mutlaka IV nesil) yapılmasını önermektedir.

Hastanın kanı “tekrar” işaretiyle bir referans veya tahkim laboratuvarına gönderilir ve IV nesil ELISA test sistemi kullanılarak test edilir. Yeni analizin sonucu negatif ise ilk sonuç hatalı (yanlış pozitif) kabul edilir ve IS yapılmaz. İkinci testte sonuç pozitif veya şüpheli çıkarsa, HIV enfeksiyonunu doğrulamak veya çürütmek için hastanın 4-6 hafta sonra IB yaptırması gerekir.

Bağışıklık lekeleme

HIV enfeksiyonunun kesin tanısı ancak pozitif immünoblotlama (IB) sonucu elde edildikten sonra yapılabilir. Bunu gerçekleştirmek için üzerine viral proteinlerin uygulandığı bir nitroselüloz şeridi kullanılır.

IB için kan örneklemesi damardan yapılır. Daha sonra özel bir işleme tabi tutulur ve serumundaki proteinler özel bir jel içerisinde yüklerine ve molekül ağırlıklarına göre ayrılır (özel ekipman üzerinde manipülasyon etkisi altında gerçekleştirilir). Elektrik alanı). Kan serumu jeline bir nitroselüloz şeridi uygulanır ve özel bir odada lekeleme ("lekeleme") gerçekleştirilir. Şerit işlenir ve kullanılan malzemeler HIV'e karşı antikor içeriyorsa IB üzerindeki antijenik bantlara bağlanarak çizgiler halinde görünürler.

Aşağıdaki durumlarda IB pozitif kabul edilir:

• Amerikan CDC kriterlerine göre - şerit üzerinde iki veya üç satır gp41, p24, gp120/gp160 vardır;
• Amerikan FDA kriterlerine göre şeritte iki p24, p31 çizgisi ve bir gp41 veya gp120/gp160 çizgisi bulunur.

Vakaların %99,9'unda pozitif IB sonucu HIV enfeksiyonunu gösterir.

Hiçbir çizgi yoksa IB negatiftir.

IB, gr160, gr120 ve gr41 ile hatları tanımlarken şüphelidir. Bu sonuç şu durumlarda ortaya çıkabilir:

• onkolojik hastalıklar;
• gebelik;
• sık kan nakli.

Bu gibi durumlarda başka bir firmanın kiti kullanılarak çalışmanın tekrarlanması tavsiye edilir. İlave IB'den sonra sonuç şüpheli kalırsa, altı ay süreyle gözlem gereklidir (IB her 3 ayda bir yapılır).

Polimeraz zincirleme reaksiyonu

PCR testi virüsün RNA'sını tespit edebilir. Duyarlılığı oldukça yüksektir ve enfeksiyondan sonraki 10 gün içinde HIV enfeksiyonunun tespit edilmesine olanak sağlar. Bazı durumlarda PCR, yüksek duyarlılığı diğer enfeksiyonlara karşı antikorlara da yanıt verebileceğinden yanlış pozitif sonuçlar verebilir.

Bu teşhis tekniği pahalıdır ve özel ekipman ve yüksek nitelikli uzmanlar gerektirir. Bu nedenler popülasyona yönelik kitlesel testlerin yapılmasını mümkün kılmamaktadır.

PCR aşağıdaki durumlarda kullanılır:

• HIV ile enfekte annelerden doğan yenidoğanlarda HIV'i tespit etmek;
• HIV'i “pencere döneminde” veya şüpheli IB durumunda tespit etmek;
• kandaki HIV konsantrasyonunu kontrol etmek;
• donör kanının incelenmesi için.

PCR testi tek başına HIV tanısı koymaz ancak tartışmalı durumların çözümüne yönelik ek bir tanı yöntemi olarak gerçekleştirilir.

Ekspres yöntemler

HIV teşhisindeki yeniliklerden biri de sonuçları 10-15 dakika içinde değerlendirilebilen hızlı testlerdir. En etkili ve doğru sonuçlar, kılcal akış prensibine dayanan immünokromatografik testler kullanılarak elde edilir. Üzerine kan veya diğer test sıvılarının (tükürük, idrar) uygulandığı özel şeritlerdir. HIV'e karşı antikorlar mevcutsa, 10-15 dakika sonra testte renkli ve kontrol şeridi belirir - pozitif sonuç. Sonuç negatifse yalnızca kontrol şeridi görünür.

ELISA testlerinde olduğu gibi hızlı testlerin sonuçlarının IB analizi ile doğrulanması gerekir. Ancak bundan sonra HIV enfeksiyonu tanısı konulabilir.

Hızlı ev test kitleri mevcuttur. OraSure Technologies1 testi (ABD) FDA onaylıdır, reçetesiz satılır ve HIV'i tespit etmek için kullanılabilir. Testin ardından sonuç pozitifse, tanının doğrulanması için hastanın uzman bir merkezde muayene edilmesi önerilir.

Evde kullanıma yönelik diğer testler henüz FDA tarafından onaylanmamıştır ve sonuçları oldukça şüpheli olabilir.

Hızlı testlerin doğruluğu IV. nesil ELISA testlerinden daha düşük olmasına rağmen, popülasyonun ek testleri için yaygın olarak kullanılmaktadırlar.

Herhangi bir klinikte, merkezi bölge hastanesinde veya özel AIDS merkezlerinde HIV enfeksiyonunu tespit etmek için test yaptırabilirsiniz. Rusya topraklarında kesinlikle gizli veya isimsiz olarak gerçekleştirilirler. Her hasta testten önce veya sonra tıbbi veya psikolojik danışmanlık almayı bekleyebilir. Yalnızca ticari amaçlı HIV testleri için ödeme yapmanız gerekecek tıbbi kurumlar, ve devlet klinikleri ve hastanelerde ücretsiz olarak yapılmaktadır.

HIV'e nasıl yakalanabileceğinizi ve enfekte olma olasılıkları hakkında hangi efsanelerin bulunduğunu okuyun.

Bugün dünyada en yaygın virüs, retrovirüslerin alt familyasından bir virüs olan AIDS'tir; bunlara lentivirüsler veya “yavaş” da denir. Nitekim insan vücudunda nispeten uzun bir süre, yaklaşık 10 yıl sonra faaliyet göstermeye başlarlar.

Birinci ve ikinci tipte immün yetmezlikler vardır. Ancak birinci tip virüsün yayılımından rahatlıkla bahsedebiliriz. Virüs kana karışıp bağışıklıktan sorumlu hücreye katıldığında hızla çoğalmaya başlıyor. Tanınmasından sorumlu olan CD4 molekülü sinsi düşmanı tanımlarken, tüm vücuda bulaşmayı başarıyor. Dolayısıyla teşhis ne kadar erken konursa hastanın zamanında tedavi görme ve daha uzun yaşama şansı da o kadar artıyor.

Bir kişinin kendine AIDS testi yaptırmak için bir nedeni varsa, bu hemen yapılmalıdır. Çoğu zaman, bu tür bir teşhisin temeli, kandaki immün yetmezliğe karşı antikorların belirlenmesidir - virüsün varlığına tepki olarak ortaya çıkan proteinler ve olası zamandan itibaren 1,5 ila 6 ay arasında oluşmaya başlarlar. enfeksiyon. Buna göre bu dönemden sonra teşhis yapılması daha tavsiye edilir.

Antikorların miktarı, enzime bağlı immünosorbent tahlili (ELISA) adı verilen bir analiz kullanılarak belirlenir. Bu yöntem güvenilirdir, nispeten doğrudur ve oldukça hassastır, bu rakamlar %99,5'in üzerindedir. İlaç pazarı ELISA için bir dizi teşhis test kiti sunmaktadır: CombiBest HIV, Anti-HIV 1 2, CombiBest anti-HIV, CombiBest anti-HIV 1 2, CombiBest anti-HIV 1 2 d 0172. Bu test sistemleri üçüncü gruba aittir. nesil. Bu reaktiflerin dezavantajı: Hastalığı her zaman tespit edememeleridir. erken tarihler. Kişi zaten bir virüs taşıyıcısıdır, partnerler için potansiyel olarak tehlikelidir, ancak kanda henüz antikorlar mevcut değildir.

Kitler temel olarak 12*8 veya 192 anti-HIV testini yürütmek için bir dizi testle donatılmıştır. Bunları kendi başınıza kullanmanız önerilmez. İlaçların açıklaması, asıl amaçlarının her iki AIDS türüne karşı antikor miktarını tespit etmek olduğunu göstermektedir. Ayrıca tüm sınıfların AIDS'e karşı antikorlarını da belirler. Antikor yoksa hastalık teşhis edilmemiş demektir.

Dördüncü nesil testler, antikorlara ek olarak AIDS antijenlerini de “görür”; enfeksiyonu üçüncü nesil yöntemlere göre daha erken tespit edebilirler. Karşılaştırma için: HIV antijeni 5. günden itibaren kanda bulunur ve ilk antikorlar en geç bir ay sonra ortaya çıkar. CombiBest HIV 1, 2 AG/AT (set 1) ve CombiBest HIV 1, 2 AG/AT (set 2) 4. nesil testlere aittir. Bu reaktiflerden oluşan bir set kullanılarak tip 1, 2 ve p24 antijenine karşı antikorlar, insan kan serumu veya plazması incelenerek tespit edilir. Birçok ülke Antijen/Antikor olarak da adlandırılan, AGAT olarak kısaltılan 4. nesil ELISA testini kullanmaktadır.

Test anonim olarak gerçekleştirilir.

Tanım

Hazırlık

Belirteçler

Sonuçların yorumlanması

Tanım

Belirleme yöntemi Enzime bağlı immünosorbent tahlili (ELISA).

İncelenen materyal Kan serumu

Ev ziyareti mevcut

HIV tip 1 ve 2'ye karşı antikorların ve HIV p24 antijeninin kombine tespiti, kalitatif test.

Dikkat. Olumlu ve şüpheli tepkiler olması durumunda sonuçların açıklanma süresi 10 iş gününe kadar uzatılabilir. AIDS'e (edinilmiş immün yetmezlik sendromu) neden olan HIV (insan immün yetmezlik virüsü), retrovirüsler ailesine aittir. Kirlenmiş iğne ve şırıngaların kullanılmasıyla kişiden kişiye bulaşır. intravenöz uygulama hem heteroseksüel hem de eşcinsel cinsel temaslar sırasında uyuşturucu veya tedavi edici prosedürler. Virüsün bulaşması, enfekte kan ve ürünlerinin transfüzyonu, organların veya seminal sıvının bağışlanması yoluyla ve tıbbi çalışanlar arasında kontamine iğneler veya aletlerden kaynaklanan yaralanmalar yoluyla gerçekleşebilir. HIV enfeksiyonu, enfekte bir anneden çocuğa bulaşma yoluyla (dikey yol) mümkündür, ancak antiretroviral tedaviyi kullanan modern önleme yöntemleri, tüm tavsiyelere uyulduğu takdirde bu riski en aza indirebilir.

Bir virüsün bir hücre ile etkileşimi süreci bir dizi aşamayı içerir: virüsün hücreye bağlanması, zarftan salınması, sitoplazmaya nüfuz etmesi, viral RNA kullanılarak DNA sentezi, viral DNA'nın genomuna entegrasyonu. konakçı hücre. Bundan sonra enfeksiyonun gizli aşaması başlar. Bu durumda proviral DNA, aktivite göstermeden ve konakçı hücrenin yaşamını etkilemeden bir süre var olabilir. Viral proteinlerin ekspresyonu olmamasına rağmen virüse karşı bağışıklık tepkisi yoktur. Vücudun bağışıklık tepkisini karakterize eden HIV'e karşı antikorlar, viral DNA'nın aktivasyonundan ve virüsün aktif üremesinin başlamasından sonra ortaya çıkar. Gizli dönemin süresi, organizmanın bireysel genetik özellikleri de dahil olmak üzere bir dizi faktöre bağlıdır.

HIV'e karşı antikorlar enfeksiyondan sonraki ikinci haftadan itibaren ortaya çıkabilir; içerikleri 2-4 hafta içinde artar ve uzun yıllar kalır. Enfekte kişilerin %90-95'inde enfeksiyondan sonraki ilk üç ayda, %5-9'unda - üç ila altı ay arasında, %0,5-1'inde - daha sonraki bir tarihte ortaya çıkarlar.

Enfeksiyonun ilk haftalarında, hatta virüse karşı antikorların ortaya çıkmasından önce (yani serokonversiyondan önce), serum veya plazma numunelerinde p24 kapsid proteini de dahil olmak üzere HIV antijenlerinin varlığı tespit edilebilir. Daha sonra serokonversiyondan sonra genellikle tespit edilemez hale gelir.

HIV Ag/Ab Combo testini (Architect, Abbott) içeren 4. nesil kombine test sistemleri, hem HIV tip 1 ve 2'ye karşı antikorları hem de HIV p24 antijenini tespit ederek enfeksiyonun erken tespitine olanak sağlar. INVITRO laboratuvarında HIV enfeksiyonunu tespit etmek için kullanılan tarama testinin özel özellikleri arasında çalışmanın yüksek özgüllüğü (> %99,5); Test, serokonversiyon periyoduna özgü antikorlara %100 duyarlıdır ve testin p24 antijenine duyarlılığı yaklaşık 18 pg/ml'dir.

HIV için laboratuvar muayenesi yapma prosedürü, Rusya Federasyonu Sağlık Bakanlığı'nın emirleri ile sıkı bir şekilde düzenlenmektedir ve enzime bağlı immünosorbent tahlili (ELISA) kullanılarak HIV'e karşı antikorların varlığına ilişkin bir tarama (seçim) çalışması aşamasını içermektedir. kullanım için onaylanmış yöntemler ve şehir AIDS merkezi laboratuvarında doğrulama (doğrulama) aşaması daha ayrıntılı bir çalışmadır. En iyi tarama ELISA sistemlerinin bile %100 özgüllüğü garanti etmediği, yani hastanın kan serumunun özelliklerine bağlı olarak belirli olmayan, yanlış pozitif sonuçlar elde etme olasılığının mevcut olduğu unutulmamalıdır. Bu nedenle tarama ELISA incelemesinin pozitif sonucu, doğrulama testlerinde doğrulanamayabilir, sonrasında hastaya negatif veya belirsiz bir sonuç verilecektir. Doğrulayıcı çalışmanın sonucu belirsizse testin 2-3 hafta sonra zaman içinde tekrarlanması gerekir.

HIV ile enfekte annelerden doğan çocuklarda HIV enfeksiyonunun laboratuvar tanısı kendine has özelliklere sahiptir. Annenin HIV'e karşı antikorları (IgG sınıfı), doğum anından itibaren 18 aya kadar kanlarında dolaşabilir. Yenidoğanlarda HIV'e karşı antikorların bulunmaması, virüsün plasenta bariyerini geçmediği anlamına gelmez. HIV ile enfekte annelerin çocukları doğumdan sonraki 36 ay içinde laboratuvar tanı muayenesine tabi tutulur.

Hazırlık

Özel bir hazırlık gerekmez. Son yemekten en geç 4 saat sonra kan alınması tavsiye edilir. İLE Genel öneriler Araştırmaya hazırlanmak için okuyabilirsiniz. Olası enfeksiyondan en geç iki hafta sonra HIV'e karşı antijen ve antikorları tespit etmek için bir test yapılması, olası enfeksiyon durumunda üç ve altı hafta sonra tekrarlanması tavsiye edilir. olumsuz sonuç. INVITRO LLC'de araştırma başvuruları pasaport veya onun yerine geçen bir belge kullanılarak doldurulur (göç kartı, ikamet yerindeki geçici kayıt, askeri personel kimliği, pasaport kaybı durumunda pasaport bürosundan alınan sertifika, otel). Sunulan belge mutlaka Rusya Federasyonu'na geçici veya kalıcı kayıt hakkında bilgi ve bir fotoğraf içermelidir. Pasaportun yokluğunda (bunun yerine geçen bir belge), hastanın biyomateryal bağışı için isimsiz bir başvuru doldurma hakkı vardır. İsimsiz bir muayene, başvuru ve müşteriden alınan biyomateryal numunesi sırasında, yalnızca hastanın ve siparişi veren sağlık personelinin bildiği bir numara atanır. ! İsimsiz olarak yapılan çalışmaların sonuçları hastaneye yatırılma, mesleki muayeneler için sunulamaz ve ORUIB'e kaydedilmeye tabi değildir.

Kullanım endikasyonları

• Arttırmak Lenf düğümleri ikiden fazla alan.
• Lenfopeni ile lökopeni.
• Gece terlemeleri.
• Nedeni bilinmeyen ani kilo kaybı.
• Nedeni bilinmeyen üç haftadan uzun süren ishal.
• Nedeni bilinmeyen ateş.
• Hamilelik planlaması.
• Ameliyat öncesi hazırlık, hastaneye yatış.
• Aşağıdaki enfeksiyonların veya bunların kombinasyonlarının tespiti: tüberküloz, belirgin toksoplazmoz, sıklıkla tekrarlayan herpes virüsü enfeksiyonu kandidiyaz iç organlar, mikoplazmalar, pnömosistis veya legionella pnömonisinin neden olduğu tekrarlanan nevralji herpes zoster.
• Genç yaşta Kaposi sarkomu.
• Gündelik cinsel temaslar.

Sonuçların yorumlanması

Araştırma sonuçlarının yorumlanması, ilgilenen hekim için bilgi içerir ve bir teşhis değildir. Bu bölümdeki bilgiler kendi kendine teşhis veya kendi kendine tedavi için kullanılmamalıdır. Doktor sonuçları kullanarak doğru tanıyı koyar. bu anket ve diğer kaynaklardan gerekli bilgiler: tıbbi geçmiş, diğer muayenelerin sonuçları vb.

Bağımsız Laboratuvar INVITRO'daki ölçüm birimleri: niteliksel test. Sonuçların sunulma şekli: HIV 1 ve 2'ye karşı antikorların ve p24 antijeninin yokluğunda cevap "negatif"tir. Tarama enzimine bağlı immünosorbent testinde HIV'e veya bir antijene karşı antikorlar tespit edilirse, immünoblotlama yoluyla onay için şehrin AIDS merkezine bir serum örneği gönderilir; bu, pozitif ve belirsiz sonuçları doğrular.

Olumlu sonuç:

1. HIV enfeksiyonu;
2. tekrarlanan veya ek çalışmalar gerektiren yanlış pozitif sonuç *);
3. Çalışma, HIV ile enfekte annelerden doğan 18 aydan küçük çocuklar için bilgilendirici değildir.

* HIV 1 ve 2 ve HIV antijeni 1 ve 2'ye (HIV Ag/Ab Combo, Abbott) yönelik antikor tarama testi sisteminin özgüllüğü, reaktif üreticisi tarafından sağlanan tahminlere göre, hem genel popülasyonda hem de HIV'de yaklaşık %99,6'dır. potansiyel etkileşimleri olan hastaları gruplandırın (enfeksiyonlar HBV, HCV, Rubella, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E.coli, Chl.trach., vb.), otoimmün patolojiler(romatoid artrit, antinükleer antikorların varlığı dahil), hamilelik, artan seviye IgG, IgM, monoklonal gamopatiler, hemodiyaliz, çoklu kan transfüzyonları).