Įsigijami virusologiniai tyrimai infekcinių ligų klinikoje svarbesnisJis visų pirma dėl to, kad virusinės gamtos infekcijos svorio augimas, kurio klinika ne visada būdinga. Tuo pačiu metu, greitas ir patikimas virusologinės diagnostikos metodai yra skirti ne visoms infekcinėms ligoms, daugelis jų yra darbo jėgos intensyvumas, reikalingai jų elgesiui specialios sąlygos. \\ TEksperimentiniai gyvūnai, maistinių medžiagų laikmenos ir apmokyti personalą. Šiuo metu diagnozuoti virinės infekcijos. \\ T Naudokite 3 pagrindinius mokslinių tyrimų rūšis.
1. Užkrečiamos medžiagos mikroskopinis tyrimas siekiant nustatyti virusinį antigeną arba patogeninius audinių pokyčius. Diagnostikos tikslais tiesiogiai mikroskopinis tyrimas Infekcinė medžiaga iš pacientų yra naudojama ribotai virusinių infekcijų (pasiutligės, vėjo inspekcija, geltona karštinė, herpes ir kt.). Platesnė programa gavo metodą, pagrįstą viruso antigeno aptikimu su fluorescencinėmis antikūnais. Imunofluorescencijos metodas gali būti patikimas tik aiškiai įvykdant visus techninius reikalavimus.
2. Virologiniai metodai.
3. Serologiniai tyrimai, siekiant nustatyti antikūnų augimą ligos dinamikoje. Serologiniai tyrimų metodai yra prieinami laboratorinėmis sąlygomis.
Šiems tyrimams būtina vartoti serumą staigiu ligos laikotarpiu ir pernagavimo laikotarpiu (suporuoti serumai). Kraujo mėginiai. \\ T serologiniai tyrimai Jie yra sterilūs be antikoaguliantų ir konservantų.
Pagrindiniai virusologinių tyrimų etapai yra virusų pasirinkimas, jų identifikavimas, pagrindinių biologinių savybių charakteristikos. Jei norite skirti įvairias virusų grupes, šiuo metu nėra vienos technikos. Tai visų pirma dėl jų savybių įvairovė ir auginimo savybių už priimančiosios įstaigos. Biosiuntės yra naudojamos moksliniams tyrimams (plaunami iš gleivinės, kraujo ir jo sudedamųjų dalių, stuburo skysčio, šlapimo ir išmatos, organų biopsijų ir audinių, arba jų gabalai, imami į autopsijas), kurie yra specialūs apdorojimui su vėlesniu medžiagos perdavimu. Paimta mokslinių tyrimų medžiaga turi būti laikoma temperatūroje nuo -20 ° C iki -70 ° C temperatūroje. Priklausomai nuo preliminarios diagnozės, medžiagos apdorojimas turi savo charakteristikas, tačiau daroma prielaida, kad gaunamas substratas, kuris maksimaliai išgryninamas iš gleivių, organų ir audinių ar fragmentų organų ar fragmentų, bakterijų. Tai pasiekiama homogenizuojant medžiagą pagal tyrimą specialiame aparate arba trina porceliano skiedinio šalčio su kvarco stiklu (gabalus organų ir audinių) su sterilaus aušinama (+4 c) 0.9 %
natrio chlorido tirpalas gauti 10-30% pakabos ir vėlesnio centrifuguojant 1500-3000 aps./min 10-15 minučių. Taip gautas supernatantas naudojamas tolesniems tyrimams atlikti.
Anksčiau intensyvi plėtra Ir intensyvų ir ląstelių kultūros metodo į plačiąjį gydytoją įvedimas buvo naudojamas eksperimentiniams gyvūnams arba vištienos embrionams. Šie metodai taip pat taikomi šiuo metu. Aptikta virusų, naudojančių gyvūnus yra tinkamiausia tais atvejais, kai galima atkurti tipišką vaizdą eksperimente infekcinė liga arba atskiros apraiškos. Taigi, arbovirusų grupės ir kokos gali būti aptikta užkrečiant į sėjos pelėms smegenis, gripo - užkrečiant vištienos embrionus arba intranazinį medžiagą pagal tyrimą, pelių pagal tyrimą. Virologinėse laboratorijose, pastaraisiais metais ląstelių kultūros ir audinio metodas buvo plačiausiai naudojamas, leidžiantis pabrėžti adenoviruses, herpes virusai, kvėpavimo sincitinis virusas, maišymas ir kt ir pirmųjų etapų tyrimo atlikti etiologinę diagnozę ligos. Dėl šios priežasties pagrindas yra gerai ištirtas daugelio virusų ir ląstelių sąveikos citologinės savybės. Taigi, Hela ląstelių infekcija, Ner-2 medžiaga, kurioje yra antrojo tipo adenoviruso, jau trečią dieną veda į mobiliojo monoliavimo augimo pobūdžio pokyčius ir tipiškų ląstelių išvaizdą vynuogių pavidalu uždarymas ir tt, gerai apibrėžta įprastu šviesos mikroskopu su mažu didinimu.
Išskirtinė infekcinės ligos etiologinės diagnostikos vertė yra standartizuoti viruso išleidimą iš tyrimo medžiagos, kuri šiame darbo etape reiškia genetiškai grynų linijinių gyvūnų naudojimą, atsižvelgiant į jų fenotipinį (pirmiausia amžiaus- Susijusios) funkcijos. Tai visų pirma dėl to, kad eksperimentiniai gyvūnai įvairių genetinių linijų ir amžiaus įvairaus laipsnio Suvokiama virusams. Taigi, kai intracerebrinė infekcija su pelių neurotropinio įtempimo WSN gripo viruso gyvūnų linijų balb / C, A, CBA ir kilpų jautrumo pasirodė esąs didžiausias, tas pats modelis buvo nustatytas tie paties modelio atvejų intranazo vartojant medžiagą pagal tyrimą. Pagrindinė vertė. \\ T baigtiniai rezultatai Vietos dėl virusų išleidimo turi preliminarų gyvūnų, vištienos embrionų, ląstelių kultūrų ir audinių latentinių virusų objektui. Vištienos embrionai, naudojami laboratorinėje praktikoje gali būti užsikrėtę paukščių leukose virusų, paukščių encefalomielito, infekcinio sinusito, psichocozės, Niukaslio ligos, priežastinių agentų kai kurių bakterinių infekcijų (Paratyphs ir kt), taip pat Mycoplasma. Dar daugiau. Bakteriniai ir ypač virusiniai agentai gali spontaniškai užkrėsti ląstelių kultūrą ir audinius bei patirtį. Jų buvimas žymiai paveikia tyrimo medžiagos vertinimą. Kai kurie mikoplazmo tipai ląstelių kultūroje
Kondicionavimo hemagliutinacija ir hemadsimbracija ir netgi sudaro plokšteles po agaro danga, panaši į susidariusius virusus. Svarbi reikšmė taip pat yra teršia vieno tipo ląstelių kultūrą kitiems, tai dažniausiai dėl Hela ląstelių ir yra stebimas dirbant su įvairių rūšių pasėlių viename kambaryje, su prasta perdirbimo laboratorinių patiekalų ir kitų. ląstelių kultūrų ar infekcijos su gyvūnais bakterijų agentai, nes taisyklė pasireiškia gana aiškiai (pasikeičia monolayer ląstelių augimo pobūdžio, kultūros terpės savybės, vištienos embrionų ar gyvūnų, turinčių tam tikrų simptomų mirties, ir tt) ir jokių ypatingų sunkumų vertinant rezultatus. Tai labiau apsunkina latentinių infekcijos formų klausimu, kur reikia naudoti serologinių ir kitų metodų naudojimą. Į šiuos nurodymus turėtų būti atsižvelgiama į virusologo darbą, ypač atliekant etiologinę diagnozę neaiškių ligos atvejais.
Virologijos tyrimų metodai
virusų biologijos studijų būdai ir jų identifikavimas. Virologija yra plačiai naudojami molekulinės biologijos metodai, kurių pagalba virusinių dalelių molekulinė struktūra sugebėjo nustatyti molekulinę struktūrą, jų įsiskverbimo metodus ir virusų reprodukcijos būdus, pirminę virusinių nukleino rūgščių struktūrą ir baltymai. Virinių nukleino rūgščių ir baltymų aminorūgščių sudedamųjų dalių elementų sekos nustatymo metodai vystosi. Galima susieti nukleino rūgščių funkcijas ir baltymus, koduotus nukleotidų seka ir nustatyti intracelulinių procesų priežastis, kurios vaidina svarbų vaidmenį virusinės infekcijos patogenezėje.
Virologiniai tyrimų metodai taip pat grindžiami imunologiniais procesais (antigeno sąveika su antikūnais), viruso biologinės savybės (gebėjimas hemagliutinacija, hemolizė, fermentinė veikla), viruso sąveikos su šeimininku su šeimininku sąveika ( Cikopatinis poveikis, intracelulinių intarpų formavimas ir kt.).
Diagnozuojant virusines infekcijas, su auginimu, izoliuojančiais ir identifikuojančiais virusais ir audinių ir ląstelių kultūros metodu yra plačiai naudojamas. Naudojant pirminius, antrinius, stabilus išverstų ir diploidinių ląstelių kultūras. Pirminės kultūros gaunamos išsklaidymo audiniu su proteolitiniais fermentais (tripsinu, kolagenaze). Ląstelių šaltinis gali būti audiniai ir organai (dažniau nei inkstų) žmonių ir gyvūnų embrionai. Maistinėje terpėje ląstelių suspensija dedama į vadinamuosius čiužinius, butelius ar petri indus, kur po to, kai pritvirtinate prie laivo paviršiaus, ląstelės pradeda daugintis. Infekcijai virusai paprastai naudoja ląstelių monolijus. Pilama maistinių medžiagų skystis, virusinė pakaba įvedama tam tikrais skiedimais ir po kontakto su ląstelėmis, pridedama šviežia maistinių medžiagų terpė, paprastai be serumo.
Daugumos pirminių kultūrų ląstelės gali būti išdėstytos, tokia kultūra vadinama antrine. Tolesniame ląstelių praėjime suformuojasi "Fibroblast" ląstelių populiacija, galinčioti greitai reprodukcijai, dauguma kuris išlaiko pradinę chromosomų rinkinį. Tai yra vadinamosios diploidinės ląstelės. Su serijos auginimu ląstelių, stabilios ląstelių kultūros gaunamos. Ištraukos pasirodo greitai padalintos homogeninės ląstelės su heteroploidine chromosomų rinkiniais. Stabilūs ląstelių linijos gali būti vienos sluoksnio ir pakabos. Vieno sluoksnio pasėliai auga kieto sluoksnio pavidalu ant stiklo paviršiaus, pakabos - kaip suspensijos įvairiuose induose, naudojant maišymo įtaisus. Yra daugiau nei 400 ląstelių linijų, gautų iš 40 skirtingos rūšys Gyvūnai (įskaitant Pirštines, paukščius, roplius, varliagyvius, žuvis, vabzdžius) ir žmogų.
Dirbtinėje maistinių medžiagų laikmenose galima ugdyti atskirų organų ir audinių (organų kultūrų) gabalus. Šie kultūrų tipai išlaiko audinio struktūrą, kuri yra ypač svarbi virusų paskirstymui ir perdavimui, kurie nėra atkuriami nediferencijuotomis audinių kultūromis (pvz., Coronavirusus).
Užsikrėtusių ląstelių kultūrų virusai gali būti aptikta keičiant ląstelių morfologiją, citopatinį poveikį, kuris gali būti specifinio pobūdžio, intarpų atsiradimo, nustatant virusinius antigenus ląstelėje ir kultūros skystyje; nustatantis virusinių palikuonių biologines savybes kultūros skystyje ir virusų titravimas audinių, vištienos embrionų ar jautrių gyvūnų kultūroje; Nustatydama individualias virusines nukleino rūgštis ląstelėse molekulinės hibridizacijos ar nukleino rūgščių grupėmis citochminiu metodu, naudojant fluorescencinį mikroskopiją.
Virusų pasirinkimas yra daug laiko reikalaujantis ir ilgalaikis procesas. Jis atliekamas siekiant nustatyti cirkuliuojančią tarp viruso tipo ar varianto (pavyzdžiui, nustatyti gripo virusą, laukinę arba vakcinos padermę poliomo viruso ir tt); Tais atvejais, kai tai būtina skubių epidemiologinių priemonių; Kai atsiranda naujų tipų arba variantų virusų; Jei reikia, patvirtinti preliminarią diagnozę; Norint nurodyti virusus objektuose aplinkos.. Kai virusas izoliuotas, jie atsižvelgia į galimybes patvarios juos žmogaus organizme, taip pat į mišrios infekcijos atsiradimą, kurį sukelia du ir daugiau virusų. Genetiškai homogeniška virusų populiacija, gauta iš vieno viriono, vadinama virusiniu klonu, o jo gavimo procesas yra klonavimas.
Virusų pasirinkimui naudojamos jautrių laboratorinių gyvūnų infekcijos, vištienos embrionai, tačiau dažniausiai naudojamas audinių kultūra. Viruso buvimą paprastai nustatoma pagal konkrečią ląstelių degeneraciją (citopatinį poveikį), simplito ir SYCITIUSES formavimas, intracelulinių intarpų aptikimas, taip pat specifinis antigenas, aptiktas imunofluorescencijos, hemadsorbcijos, hemagliutinacijos metodais (hemagliutiniais virusais) ) ir tt Šiuos ženklus galima aptikti tik po 2-3 viruso ištraukų.
Norint pabrėžti keletą virusų, pavyzdžiui, gripo virusų, vištienos embrionų naudojimas, kad būtų galima pabrėžti kai kuriuos kokso virusus ir daugybę arbovirusų - naujagimių pelėms. Pasirinktų virusų identifikavimas atliekamas naudojant serologines reakcijas ir kitus metodus.
Dirbant su virusais, jų titras yra nustatytas. Virusų titravimas paprastai atliekamas audinių kultūroje, nustatant didžiausią viruso turinčio skysčio praskiedimą, kuriame susidaro audinių degeneracija ir formuojami virusiniai antigenai. Jei norite tituoti keletą virusų, galite naudoti plokšteles metodą. Plokštelės arba neigiamos virusų kolonijos yra židiniai, sunaikinti vieno sluoksnio audinio kultūros ląstelių virusu pagal agaro dengimą. Skaičiuojant kolonijas leidžia jums išleisti kiekybinė analizė Infekcinė virusų veikla skaičiavimo norma yra ta, kad viena infekcinė viruso dalis sudaro vieną apnašą. Plokštelės aptinkamos dažant kultūrą su vandentiekio dažais, paprastai neutraliu raudonais; Plokštelės nėra adsorbo dažiklio ir todėl matoma kaip šviesos dėmės dažytų gyvų ląstelių fone. Viruso titras išreiškiamas balinimo vienetų skaičiumi 1 ml..
Virusų valymas ir koncentracija paprastai atliekami diferencialiniu ultracentrifugation, po centrifuguojant koncentracijos gradientus ar tankį. Imunologiniai metodai, jonų mainų chromatografija, imunosorbentai ir tt naudojami virusams valyti.
Laboratorinė diagnostika virusinių infekcijų apima patogeno arba jo sudedamųjų dalių aptikimą klinikinėje medžiagoje; viruso pasirinkimas iš šios medžiagos; Serodiagnostikas. Laboratorinės diagnostikos metodo pasirinkimas kiekvienu konkrečiu atveju priklauso nuo ligos pobūdžio, ligos laikotarpio ir laboratorijos galimybių. Šiuolaikinė diagnozė Virusinės infekcijos grindžiamos aiškiais metodais, kurie leidžia gauti atsakymą kelias valandas po klinikinės medžiagos vartojimo ankstyvieji terminai Po ligos jis apima elektroninį ir imuninį elektronų mikroskopiją, taip pat imunofluorescenciją, molekulinį hibridizacijos metodą, aptikti klasės LGM ir kt. Antikūnus.
Elektroninė mikroskopija virusų dažytos neigiamu kontrastingu leidžia diferencijuoti virusus ir nustatyti jų koncentraciją. Elektronų mikroskopijos naudojimas virusinių infekcijų diagnostinėje yra ribotas tais atvejais, kai virusinių dalelių koncentracija klinikinėje medžiagoje yra pakankamai didelė (10 5 iš 1 ml.ir didesnis). Metodo trūkumas yra nesugebėjimas atskirti vienai taksonomiškam grupei priklausančių virusų. Šis trūkumas pašalinamas naudojant imuninės elektronų mikroskopiją. Šis metodas grindžiamas imuninių kompleksų formavimu, kai pridedant specifinį serumą virusinėms dalelėms, o virusinių dalelių koncentracija atsiranda, o tai leidžia juos identifikuoti. Šis metodas taip pat naudojamas antikūnų aptikimui. Dėl greito diagnostikos tikslais, elektronų mikroskopinis tyrimo audinių ekstraktų, išmatų, skysčių, pagamintų iš pūslelių, paslaptys iš NASOPHARNX yra atliekamas. Elektronų mikroskopija yra plačiai naudojama tiriant viruso morfogenezę, jos gebėjimai plečiami, kai pažymėti antikūnai.
Molekulinės hibridizacijos metodas, pagrįstas virusų nukleino rūgščių identifikavimu leidžia aptikti vieną genų kopijas ir jautrumo laipsnį yra nesvarbus. Reakcija grindžiama DNR arba RNR (zondų) papildomų siūlų hibridizacija ir surišimo struktūrų susidarymu. Pigiausias zondas yra klonuotas rekombinantinis DNR. Probe gamina radioaktyviųjų pirmtakų (paprastai radioaktyviųjų fosforo). Perspektyviai vartojate kolorimetrines reakcijas. Yra keletas molekulinės hibridizacijos variantų: taškas, blot hibridizacija, sumuštinio hibridizacija, hibridizacija in situ ir kt.
LGM klasės antikūnai pasirodo anksčiau nei G klasės antikūnai (3-5 dienai ligos dieną) ir išnyksta per kelias savaites, todėl jų aptikimas rodo tik kenčiančią infekciją. LGM klasės antikūnai aptinka imunofluorescente arba naudojant "Ennuno-Imunimal" analizę naudojant anti-μ-antis (serumas prieš sunkiųjų grandinių LGM).
Serologiniai metodai Virologijos yra pagrįstos klasikinėmis imunologinėmis reakcijomis (žr. Imunologinius tyrimų metodus) : Papildykite privalomas reakcijas, hemagliutinaciją, biologinį neutralizavimą, imunodifuziją, netiesioginį hemagliutinaciją, radialinę hemolizę, imunofluozę, imunoformminę analizę. Daugelio reakcijų mikrometekai buvo sukurti, jie nuolat tobulina. Šie metodai naudojami virusams nustatyti, naudojant žinomų serumų ir serodiagnostikų rinkinį, siekiant nustatyti antikūnų augimą antrajame serume, palyginti su pirmuoju (pirmasis serumas per pirmąsias dienas po ligos, antroji - po 2-3 savaites). Diagnostinė vertė turi ne mažiau kaip keturis kartus didėja antikūnų antrajame serume. Jei LGM klasės antikūnų aptikimas rodo neseniai patyrė infekciją, tada LGC klasės antikūnai yra saugomi keletą metų, o kartais gyvenimas.
Norint nustatyti atskirų virusų ir antikūnų antigenų į juos sudėtinguose mišiniuose be preliminarių valymo baltymų, imunoBloba naudojami. Šis metodas sujungia baltymų frakcionavimą naudojant elektroforezę poliakrilamido gel, po kurio imunino - baltymų vartojimas fermento imunosay metodu. Baltymų atskyrimas sumažina antigeno cheminio grynumo reikalavimus ir leidžia nustatyti atskirus antigenų antikūnų poras. Tokia užduotis yra svarbi, pavyzdžiui, Serodiagnozėje ŽIV infekcijos, kur klaidingos teigiamos reakcijos imuninno- m neigiamos analizės yra dėl antikūnų buvimą ląstelių antigenams, kurie yra dėl nepakankamo gryninimo virusinių baltymų rezultatas. Antikūnų identifikavimas serume pacientams į vidinius ir išorinius virusų antigenus leidžia nustatyti ligos etapą ir analizuojant populiacijas - virusinių baltymų kintamumą. ŽIV infekcijos imunoblotavimas naudojamas kaip patvirtinantis bandymas, kad būtų galima nustatyti individualius virusinius antigenus ir antikūnus. Analizuojant populiacijas, metodas naudojamas virusinių baltymų kintamumui nustatyti. Didesnė metodo vertė yra galimybė analizuoti antigenus, sintezuojamus naudojant rekombinantinę DNR technologiją, jų dydį ir antigeninių veiksnių buvimą.
Vikologiniai tyrimai yra tyrimai, skirti aptikti virusus ir studijuoti jų savybes, taip pat etiologinio bendravimo virusų su tam tikromis ligomis sukūrimas.
Studijų medžiaga yra uždaryta priklausomai nuo išankstinių virusų, esančių paciento kūno ir jų paskirstymo keliuose į išorinę aplinką. Medžiaga sumontuoja į sterilius patiekalus, kuo greičiau pristatoma į laboratoriją ir saugoma tol, kol tyrimas bus užšaldytas arba ledas. Prieš naudojimą virusų atrankos medžiaga yra apdorojama (-i) slopinant užsienio mikroflorą ir patiria didelių dalelių pašalinimą.
Virusų išleidimą atlieka infekcija su viruso turinčiomis medžiagomis laboratorinių gyvūnų, vištienos embrionų, audinių kultūrų. Išleidimo būdo pasirinkimas priklauso nuo numatomo ligos patogeno. Taigi, audinių kultūros (žr) yra naudojami dirbant su virusais, o ne patogeniška laboratoriniams gyvūnams, arba kai audinių kultūra aptinkama anksčiau nei užkrėsta gyvūnais. Vištienos embrionai yra užsikrėtę pabrėžti patogenus, infekcinius garus (amniotinėje ir alonominės ertmėje), (trynių maišelyje), raupai (ant chorionallantinio korpuso).
Iš laboratorinių gyvūnų paryškinti virusai, baltos pelės dažniausiai naudojamos, tada triušiai, žiurkės, jūrų kiaulytės, beždžionės. Dėl arbovirusų, viruso turinčios medžiagos įvedimas galvoje arba pneumatiniams virusams - ant gleivinės membranos kvėpavimo takų. \\ T, raupų virusams, - šaliai ragenos.
Virusų pasirinkimas yra veiksmingiausias ūmaus ligos laikotarpiu. Esminis momentas, kai ligos viruso pobūdis sukuria serumo tyrimus, priimtus iš tos pačios paciento ligos pradžioje ir pernagavimo laikotarpiu. Antrojo serumo antikūnų aptikimas antrajame serume 4 ar daugiau kartų daugiau nei pirmoje vietoje, rodo etiologinį ryšį tarp virusų su šia liga.
I. greitas metodas Virusų antigenų aptikimas yra fluorescencinių antikūnų metodas, pagrįstas specialiu antikūnų fiksavimu, paženklintų fluorochromais ant antigeno paviršiaus. Antigenas yra lengvai aptinkamas su luminescenciniu mikroskopu (žr.) Dėl ryškios fluorescencijos adsorbuoti ant antigeno antigeno. Fluorescencinių antikūnų metodas Naršyti iš pacientų, histologinių skyrių nukentėjusių audinių, preparatų iš audinių kultūros. Norint nustatyti elementarius veršelius (virusus), taip pat naudojamas (žr.). Iš kitų morfologinių metodų, tiems, kurie atskleidžia ląstelių viruso intarpus paveiktų organų ir audinių skyriuose. Intarpų aptikimas rodo infekciją ir kai kuriais atvejais prisideda prie virusinės ligos diagnozės. Norėdami aptikti virusų antikūnus pacientų kraujyje ir įvairių virusų yra naudojami tirti antigeninės struktūros virusų. Neutralizavimo reakcija yra naudojama beveik visose virusinės infekcijose. Jis grindžiamas imuninių antikūnų gebėjimu neutralizuoti infekcines virusų savybes, kai mišinys yra įvestas į jautrių gyvūnų organizmą arba audinių kultūrą. Norint nustatyti neutralizavimo indeksą, nuolatinė serumo dozė yra sumaišoma su įvairiais virusų veisimu ir nustatyti antikūnų titrą - įvairūs serumo skiedimai su nuolatine virusų doze. Kontrolė yra gyvūnų (arba audinių kultūrų) užteršimas virusų mišiniu su normaliu serumu arba su druska. Neutralizavimo reakcija yra ne tik antikūnų aptikimui, bet ir nustatyti virusų rūšį ir tipą.
Papildomas privalomas atsakas [pavyzdžiui, Bordean-GENGU reakcija (žr.)] Naudojamas virusų antigenams ir antikūnams nustatyti. Pirmuoju atveju akivaizdžiai žinomas imuninis serumas sąveikauja reakcijoje ir medžiagoje, kurioje yra manoma, kad antigenų buvimas yra prielaida: kraujo serumas, nasochloriziniai plovimai, infekuoto organizmo audinio ekstraktai. Antruoju atveju akivaizdžiai žinomas antigenas (diagnostika) ir serga ar rekonstrukcijos serumui.
RSK naudojamas diagnozuoti ligų, kurias sukelia gripo virusai, raupai, adenovirusai ir arbovirusas.
Į laboratorinė diagnostika Virusinės infekcijos turi tris pagrindinius metodus
1) tiesiogiai tirti medžiagą, skirtą virusų antigenui arba nukleino rūgščių buvimui;
2) viruso izoliacija ir identifikavimas iš klinikinės medžiagos;
Tiesioginiai klinikinės medžiagos diagnostikos metodai
Tiesioginiai metodai yra metodai, leidžiantys aptikti virusą, virusinį antigeną arba virusinę nukleino rūgštį (NK) tiesiai į klinikinę medžiagą, tai yra greičiausia (2-24 val.).
Elektroninė mikroskopija (EM). Su šiuo metodu galite aptikti faktinį virusą.
imuninės elektronų mikroskopija (IEM), kurioje naudojami specifiniai virusų antikūnai. Dėl antikūnų sąveikos su virusais, suformuojami kompleksai, kurie yra lengviau po neigiamų kontrastų.
Imunofluorescencijos reakcija (rifas). Šis metodas grindžiamas antikūnų, susijusių su dažais, naudojimą
Reef metodas yra plačiai naudojamas greitai iššifruoti aštrių kvėpavimo virusinių infekcijų etiologiją analizuojant kvepalų brainus iš viršutinių kvėpavimo takų gleivinės.
Immuno fermentų analizė (ELISA). Imūno imunimal metodai nustatant virusinių antigenų iš esmės yra panašūs į rifą, bet yra pagrįstas antikūnų etiketės fermentų, o ne dažai.
Radioimuninė analizė (RIA). Šis metodas yra pagrįstas antikūnų etiketėmis su radioiIsotrops, kuri užtikrino didelį jautrumą nustatant viruso antigeną.
Molekulinės metodai. Iš pradžių klasikinis virusinio genomo nustatymo metodas buvo laikomas labai konkrečiu NK hibridizacijos metodu, tačiau šiuo metu visai platesnis naudoja virusų genomų pasirinkimą naudojant polimerazę grandininė reakcija (PCR).
Nukleino rūgščių molekulinė hibridizacija. Šis metodas grindžiamas DNR arba RNR papildomų siūlų hibridizavimu su privalomomis struktūromis formuojant ir nustatant juos
PCR grindžiamas natūralaus DNR replikacijos principu. Metodo esmė - pakartoti viruso specifinės DNR sekos sintezės ciklą, naudojant šiluminę stabilią TAQ DNR polimerazę ir dvi specifines sėklas - vadinamieji gruntai.
Šiuo metu citologiniai metodai turi ribotą diagnostinę vertę, tačiau vis dar reikia taikyti keletą infekcijų. Autopsijos, biopsijos, smūgių medžiagos, kurios po tinkamo perdirbimo yra dažytos ir analizuojamos po mikroskopu.
Dėl sėkmingo viruso išleidimo klinikinė medžiaga Turi būti imtasi pagal numatomos ligos patogenezę ir kuo anksčiau.
Paprastai imtis:
- kvėpavimo takų infekcijose - nosofaluose;
- su enterovirus infekcijos - plovimo ir išmatos (iš naujo, enteroviruses);
- su odos ir gleivinės pažeidimais - cinko, burbuliukų turinys (herpes, vėjaraupiai);
- bandymo infekcijos - plovimo (tymų, raudonukės);
- su arbivirtinėmis infekcijomis - krauju, stuburo skysčiu.
Ląstelių kultūros, laboratoriniai gyvūnai, viščiukų embrionai naudojami virusams išlaisvinti. Procesas yra ilgas, kartais reikalaujant, kad virusas būtų aptinkamas ir identifikuojamas su vienu ar keliais metodais - neutralizavimo reakcijoje (pH), rif, IFA arba PCR.
Serodiagnostikas
Serologinė diagnostika, pagrįsta antigeno reakcija - antikūno reakcija gali būti naudojama tiek abiem, tiek atliekami vaidmenį nustatant virusinės infekcijos etiologiją, net jei neigiami rezultatai Viruso paskirstymas.
RSK yra viena iš tradicinių serologinių reakcijų ir naudojama daugeliui virusinių infekcijų diagnozuoti. Reakcijoje dalyvauja dvi sistemos: paciento + standartinių virusų ir raudonųjų kraujo kūnelių serumo antikūnai + antikūnai su jais, taip pat į pensiją. Pagal antikūnus ir virusą šis kompleksas jungia ėriukų eritrocitų papildymą ir lizę (teigiama reakcija). Su neigiama RSK, papildymas prisideda prie raudonųjų kraujo kūnelių lizės. Metodo trūkumas yra nepakankamai didelis jautrumas ir reagentų standartizavimo sunkumas. AIF metodas ir ELISA naudojama serumo antikūnams nustatyti.
Studijos diagnozuojant ligų su virusiniu prigimtimi. Būtina nustatyti virusą, studijuoti savo biologiją ir gebėjimą daryti įtaką gyvūnų ir žmogaus ląstelių. Taigi tampa įmanoma suprasti patogenezę virusinės ligos Ir, atitinkamai, pasirinkti gydymo tvarką.
Kas yra diagnozė?
Gyvose ląstelėse. Norėdami jį ištirti, būtina auginti eksperimentinės įstaigos lygiu arba už tai medicinos praktikos ir mikrobiologijos kaip visuma, virusologiniai tyrimų metodai yra atliekami, kurie turi šiuos pagrindinius metodus:
- tiesiai;
- netiesioginė;
- serologinė.
Medžiaga gali būti ištirta tiesiai dėl nukleino rūgščių, virusinio antigeno arba, pavyzdžiui, izoliuoti ir nustatyti virusą nuo klinikinės medžiagos.
Be gebėjimo sukurti etiologiją ligos, stebint terapinį poveikį, virusologiniai tyrimų metodai atlieka didelį vaidmenį kovos su epidemijos renginiuose. Dėl izoliacijos ir naudoti vištienos embrionus, laboratorinius gyvūnus ar ląstelių kultūras.
Kaip ištirti?
Greičiausias yra tiesioginis metodas. Tai leidžia jums aptikti virusą, antigeną arba NC (nukleino rūgštis) pačioje klinikinėje medžiagoje. Tai užtrunka nuo dviejų valandų iki dienos.
- Em - elektronų mikroskopija. Aptinka virusą tiesiai.
- Iem yra imuninio elektronų mikroskopija. Naudoja konkrečius antikūnus virusams.
- Reef - imunofluorescencijos reakcija. Naudokite antikūnus, susijusius su dažais. Tokie virusologiniai tyrimo metodai yra plačiai naudojami kaip greitas iššifravimas Arvi etiologijos (ūminės kvėpavimo virusinės infekcijos), kai paspaudus šaškius iš gleivinės viršutinių kvėpavimo takų.
- ELISA yra imunologinė analizė - virusinių antigenų apibrėžimas, panašus į rifą, bet pagal antikūnų fermentų mišinį.
- RIA - radioimuninė analizė. Naudoja antikūnų etiketę su radioizotindais, kad būtų užtikrintas didelis jautrumas nustatant virusinį antigeną.
- Molekulinė - Hibridizacija NC arba izoliuoti viruso genomus naudojant PCR (polimerazės grandinės reakcija).
- Citologija - tai retai taikoma, bet su tam tikromis infekcijomis, šie virusologiniai tyrimo metodai yra labai veiksmingi. Tiriamos biopsijos, autopsijos ir smūgių medžiagos, perdirbtos norint dažyti ir analizuoti po mikroskopu.
Kokia yra mokslinių tyrimų reikšmė?
Sėkmingam virusų paskirstymui klinikinė medžiaga yra priimta pagal patogenezę ir kuo anksčiau. Dažnai šis procesas reikalauja kelių ištraukų prieš taikant tam tikrus virusologinius tyrimo metodus.
Mikrobiologijos studijos mikroskopinės būtybės. Ir jo teritorija yra ne tik medicina. Tai yra pagrindinis mokslas Žemdirbystė, veterinarijos erdvė ir techninė pramonė, geologija.
Bet tikrai viskas yra sukurta asmeniui ir jos plėtrai šioje gražioje planetoje. Todėl labai svarbu nustatyti pavojų laiką ir neutralizuoti jį. Virusai skiriasi nuo bakterijų. Tai yra struktūros, įeinančios į kūną ir sukelia naujos kartos formavimąsi. Jie yra panašūs į kristalus ir yra siekiama valdyti jų reprodukcijos procesą, nors jie patys nevalgo, ne auga ir nesuteikia mainų produktų.
Virusas gali sukelti sunkią ligą nuo bet kokio gyvo organizmo, kuriame jis gavo. Be to, jis gali vystytis. Štai kodėl mikrobiologijos virusologiniai tyrimo metodai turėtų vystytis ir tobulėti, nes kelia grėsmę apskritai gali būti žmogaus civilizacija.
Medžiagos. \\ T
Norint nustatyti ir nustatyti medicinos virusus, kaip taisyklė, imtis:
- nasooplotmer plovimas (kvėpavimo takų infekcijos);
- nuplaukite ir išmatos ( enterovirus infekcijos);
- svarstyklės, burbuliukų turinys (odos pažeidimai, gleivinės, kaip herpes, vėjaraupiai);
- plaunamos (bandymo infekcijos, pavyzdžiui, žievės, raudonukės);
- kraujo, stuburo skystis (arbovirus infekcijos).
Fazė. \\ T
Visi virusologinio tyrimo metodo etapai apima:
- medžiagos tvora;
- pasirinkimas, bandymų sistemos gavimas, nustatantis jo gyvybingumą;
- bandymo sistemos infekcija;
- viruso indikacija;
- viruso tipo apibrėžimas.
Iš esmės patogeniniai virusai išsiskiria audinių ir tipiškų specifiškumo buvimu. Paimkite, pavyzdžiui, polivirusas, kuris yra atkuriamas tik primatuose (jų ląstelėse). Atitinkamai pabrėžti tam tikrą virusą naudokite tam tikrą audinių kultūrą. Jei kalbame apie nežinomą patogeną, patartina vienu metu užkrėsti tris ir geresnes keturias ląstelių kultūras.
Taigi vienas iš jų yra jautrus. Siekiant nustatyti užkrėstų kultūrų viruso buvimą, pažvelgti į konkrečių ląstelių degeneracijos, intracelulinių intarpenų kūrimą, konkretaus antigeno, teigiamų hemagliutinacijos ir hemadsorbcijos reakcijų kūrimą.
Visi virusologiniai tyrimų metodai (tiesioginiai ir netiesioginiai, serologiniai) turi būti atrenkami kaip tinkamiausia tam tikram numatomo infekcijos atveju.
Netiesioginiai metodai yra pagrįsti viruso paskirstymu ir identifikavimu. Jie yra intensyvūs darbui, ilgai, bet tikslūs.
Serodiagnostikas
Pagal tokią diagnostiką reiškia metodą, pagrįstą antigeno antikūno reakcija. Dažniausiai naudojami poros serumai, paimti su intervalais per kelias savaites. Jei antikūnų titras padidėjimas 4 ir daugiau kartų, reakcija laikoma teigiama. Norėdami nustatyti tipišką viruso ypatumus, naudojama viruso reakcija. Norėdami nustatyti likvidavimo grupę, turite gauti papildomą privalomą atsakymą.
Plačiai naudojamas Įvairios galimybės Imunooperment analizė, hemagliutinacijos, pasyvaus hemagliutinacijos reakcija, atvirkštinis pasyvus hemagliutinacija, rifas. Atgal į genetinę inžineriją, buvo sukurtas monokloninių antikūnų gavimo būdas. Galima įveikti siaurą monoklonų specifiškumą su keliais monokloniniais antikūnais įvairiems viruso veiksniams. Taigi padidėjo tyrimo specifika ir jautrumas su antigenų apibrėžimu.
Kai kurios funkcijos
Šiandien buvo sukurtos daug skirtingų bandymų sistemų, skirtų imunologinei infekcijų diagnostikai, atsiradusiems dėl gyvo organizmo viruso.
Taigi virusų metodai yra virusų paskirstymo metodai, jų savybių studijavimas ir jų etiologinio ryšio su tam tikromis ligomis sukūrimas.
