HIV için immün lekeleme. HIV immünoblotlama pozitiftir. I. Jel ve membran hazırlama ve protein elektrotransferi

HIV immünoblot, özel bir nitroselüloz membran üzerine yerleştirilmiş viral proteinlere karşı antikorları tespit eder. Bu, ana proteinlerin küçük bantlar halinde yer aldığı fraksiyonların varlığını tanımlayan son derece hassas bir çalışmadır.

HIV-1 virüs zarfı, molekül ağırlığı 41 kd ile 160 kd (kilodalton) arasında değişen glikoproteinler içerir. Büyük önem immünoblotlama için, molekül ağırlığı 32 kd'den 140 kd'a kadar olan HIV-2 glikoproteinine sahiptir. HIV-1 çekirdek proteinleri ve viral enzimler, p17, p24, p55 proteinleriyle temsil edilir.

HIV-2'nin etken maddesi p16, p25, p56 olarak adlandırılan proteinlerden oluşur. Onu oluşturuyorlar iç kabuk. Genom 6 düzenleyici ve 3 yapısal gen içerir. Çoğunlukla hücre bölünmesi sırasında genetik yanlışlıklar ortaya çıkar ve patojenin çeşitli alt tipleri ortaya çıkar.

Pozitif testler

HIV enfeksiyonunun laboratuvar tanısındaki hataları ortadan kaldırmak için hastaya ek bir test verilir. HIV-1 veya HIV-2'nin 2 veya 3 proteinine karşı antikorlar tespit edilirse sonuçları pozitif olarak entegre edilir.

Immunoblot her şeyi doğruluyor iyi sonuçlar ELISA. Bu durumda, üç ana AIDS geninin (gag, pol ve env) yapısal birimleri olan gp120/160, gp41 veya p24'e karşı antikorlar tespit edilir. ELISA ve PCR sonuçları negatif olan bazı hastalarda immünoblot birkaç pozitif şerit gösterir. Doktor, doğru tanıyı koymak ve HIV enfeksiyonunun erken evresini dışlamak için ek bir p24 testi önermektedir.

Elde edilen sonuçlar şüpheli ise hastadan testi önümüzdeki 3 ay boyunca tekrarlaması istenir. Hemen hemen tüm HIV vakaları, bir Sanofi cihazı olan immünoblotlama sistemi kullanılarak doğrulanır. Çoğu durumda HIV antijenleri, p25, gp110/120 ve gp160 proteinleri tespit edilir, bu da virüs enfeksiyonunu gösterir. Hastalıklardan muzdarip hastalarda yanlış pozitif örnekler kaydediliyor bağ dokusu sahip olmak artan seviye bilirubin, çeşitli viral antijenlerle etkileşime girdiğinde.

Negatif sonuç

AIDS virüsünün proteinlerine karşılık gelen pozitif çizgilerin eksikliği durumunda immünoblot negatif sonuç olarak yorumlanır. Analiz, immün yetmezlik virüsü enfeksiyonunun olmadığını açıkça doğrular veya bir "pencere periyoduna" işaret eder. İmmünoblot negatif sonuç verirse kişi AIDS virüsünün taşıyıcısı değildir.

Çalışma için HIV ile enfekte hastalardan kan serumu örnekleri alındı. -20°C'de dondurularak saklanırlar. Analiz test sistemleri kullanılarak gerçekleştirilir:

Antijen;
Rekombinant-HIV;
Pepto ekran.

Negatif bir sonucun kaydedilmesi, serumda HIV zarf glikoproteinleri gp120, gp160, Sp41'e karşı antikorların bulunmadığını gösterir.

Çoğu zaman hasta, enfekte bir cinsel partneri olan bir hastanın HIV için immünoblot sonucunun negatif olup olamayacağı sorusuyla ilgilenir. Çalışmadan sonra sıklıkla şüpheli bir sonuç elde edilir veya gp120 ve gp160 proteinlerine karşı antikorlar tespit edilir, bu da negatif verilerin tamamen yokluğunu gösterir. Bazen asemptomatik enfeksiyonu olan hastalarda şüpheli bir yanıt kaydedilir.

Yorumlanamayan sonuçlar

Çeşitli HIV antikor testleri kullanılarak yapılan testler bazen negatif sonuç verir ve seropozitiflik kriterlerini karşılamaz. Bir doktorun şüpheli bir sonucun nedenini belirlemesi zordur.

Bazı hastalar HIV enfeksiyonu açısından risk altında değildir. Enfeksiyon farklı bir serotipten kaynaklanıyorsa doktor test sonuçlarını yorumlarken hata yapabilir.

Hastanın kan serumunun zamanla incelenmesi gerekir. 6 ay içerisinde uyulmadığı takdirde klinik bulgular AIDS ve herhangi bir risk faktörü bulunmadığından hastanın herhangi bir enfeksiyonu olmadığı kaydedildi.

Enfeksiyon riski düşük olan hastalarda şüpheli test sonuçları elde edilir. Bazı durumlarda, belirsiz verilerin ortaya çıkması, kan serumunda bulunan bağışıklık kompleksleri ve otoantikorlardan kaynaklanır.

Bazı hastalarda şüpheli sonuçların ortaya çıkması patolojik süreçlerin gelişmesinden kaynaklanmaktadır:

bulaşıcı hastalıklar;
kanserli tümör;
alerjik reaksiyon.

Hasta klinik kan testinde değişiklikler geliştirir, C-reaktif protein veya ESR'de artış. Acı çeken insanlarda bulaşıcı hastalıklar, sıklıkla HIV'e karşı şüpheli bir immünoblot reaksiyonunu ortaya çıkarır.

Sonuçları belirsiz olan hastalar kan ve biyolojik malzeme bağışı yapamazlar.

Doğrusal yöntem

İmmünoblotlama prensibi şunları içerir:

Yerli viral madde HIV formatının veya Western Blot formatında antijenlerin kullanılması.
HIV proteinlerinin kan serumunda tespit edilen bireysel antikorlarla kombinasyonu.
İnsan Ig'sine etiketli antikorların eklenmesiyle oluşan inkübasyon süreci.
Renkli şeritlerin yorumlanması.

Analiz, doktorun çalışma sonuçlarını zamanında yorumlamasına olanak tanır. Pozitif bir leke, 2ENV+/- GAG+/POL, belirsiz - 1 ENV+/- GAG+/POL olarak çözülür. Negatif bir sonuç, çizgilerin olmadığı anlamına gelir.

Analizi gerçekleştirmek için rekombinant ve lizat immünoblotlar kullanılır. Çalışma spesifiktir ve %99,5'tir.

Hastalar test sonucunun yanlış olarak yorumlanıp yorumlanamayacağını merak ediyorlar. Elde edilen veriler vücudun savunmasının (hamilelik, hemodiyaliz) uyarılması sonucu üretilebilir. Akut retroviral sendromdan şüpheleniliyorsa ve HIV enfeksiyonu olan bir hastayla temas öneriliyorsa, hastanın PCR reaksiyonu için serum bağışlaması önerilir. Tekrarlanan serolojik testler ölçülerek doğrulanır viral yük biyolojik materyalin sunulan görüntüsünde.

Yenidoğanlarda HIV tanısı

Bir çocukta AIDS testi Erken yaş HIV ile enfekte bir anne ile temas kurulduğunda gerçekleştirilir. Serolojik reaksiyonlar 1,5 yıl boyunca pozitif olabilir. Yenidoğanın kan serumundaki antikorlar ELISA, RIF ve immünoblotlama reaksiyonları kullanılarak tespit edilir.

Bir çocuğun yaşamının 9 ayı boyunca, kan serumunda anneye ait antikorların varlığı nedeniyle olumlu bir sonuç ortaya çıkar. p24 antijeninin özgüllüğü yaklaşık %65'tir. Bazı durumlarda, hasta bir çocukta kanda doğuştan düşük globulin düzeyi tanısı konursa antikorları tespit etmek mümkün olmayabilir. Belirlenmiş bir negatif immünoblot sonucu enfeksiyonun bulunmadığını garanti etmez.

Test birkaç aşamada gerçekleştirilir:

Doğumdan 1-2 gün sonra;
1-2 ayda;
altı aylıkken.

Antikorların daha ileri çalışmaları, 2 negatif immünoblot sonucu elde edilene kadar gerçekleştirilir. HIV ile enfekte bir kadından doğan bir çocuğa AIDS tanısı, 2 pozitif PCR sonucuna dayanılarak mümkündür. Kadın emzirmediği takdirde HIV patojeninin yeni doğmuş bebeğe bulaşması mümkün değildir.

Hamilelik testi

Olumlu bir sonuç elde edilirse, anne adayına bağışıklık ve çizgi lekeleme reçete edilir. HIV yöntemi ELISA. Leke doğrulanırsa hastada AIDS var demektir. Bu durumda hamileliğin 14. haftasından itibaren çocuğun enfeksiyon kapmasını önlemek için tedavi reçete edilir.

Bir uzman hamilelik sırasında kan serumu testi yaparken hata yapabilir mi, hastalar ilgili hekime sorarlar. Güvenilirliği konusundaki şüpheleri ortadan kaldırmak için PCR ve ELISA testlerinin kopyalarını hamile kadına vermekle yükümlüdür.

Bazen immünoblotlama yapılırken sorunlar ortaya çıkar, ancak ELISA, blot ve PCR pozitifse HIV enfeksiyonu tanısı nihayet doğrulanır. Alma olasılığı yanlış pozitif analiz Hamilelik sırasında büyüktür. ELISA (+) ve immünoblot (-) ise kadından kan serumunu tekrar alması istenir.

Hamile kadının değişim kartı çalışmanın sonucunu gösteriyor. Onunla pozitif değer Bir kadının, AIDS virüsünü kendisine bulaştırmamak için doğumdan sonra çocuğunu beslemesi yasaktır. Nihai sonuçlar laboratuvar, klinik ve epidemiyolojik çalışmalara dayanarak yapılır. Ancak şifreleri çözüldükten sonra hastaya HIV enfeksiyonu teşhisi konur.

Temas halinde

Adı AIDS Vyacheslav Zalmanovich Tarantul

İmmünoblotlama - ek bir dolaylı yöntem

ELISA'ya ek olarak, bazı durumlarda HIV enfeksiyonunu test etmek için "immünoblotlama" veya "immün blotlama" (bazen "Western blot" da denir) adı verilen bir prosedür kullanılır. WHO tavsiyelerine göre, HIV enfeksiyonunun tanısında ELISA sonuçlarını doğrulaması gereken ek bir uzman yöntemi olarak immünoblotlama kullanılmaktadır. Tipik olarak bu yöntem, daha karmaşık ve pahalı olmasına rağmen daha hassas ve spesifik olduğu düşünüldüğü için pozitif ELISA sonucunu iki kez kontrol eder. Ancak hasta hakkında nihai kararı imzalamadan önce doktorun teşhisin doğruluğundan tamamen emin olması gerekir. Dolayısıyla karmaşıklık ve yüksek maliyet sorunu burada belirleyici olamaz.

Hem amacı hem de uygulama yöntemi açısından, iyi bilinen "kurutucuya koy" ifadesi immünoblotlama için çok uygundur. İmmünoblotlama birleştirir bağlantılı immünosorbent tahlili(ELISA), bir jel içindeki viral proteinlerin ön elektroforetik ayrılması ve bunların bir nitroselüloz membrana ("kurutma kağıdı") aktarılmasıyla gerçekleşir. İmmünoblot prosedürü birkaç aşamadan oluşur (Şekil 27). İlk olarak, daha önce saflaştırılan ve bileşen bileşenlerine yok edilen HIV, elektroforeze tabi tutulur ve virüsün içerdiği tüm antijenler, moleküler ağırlığa göre ayrılır. Daha sonra, kurutma yöntemi kullanılarak (fazla mürekkebin bir kurutma kağıdı üzerine sıkılmasına benzer), antijenler jelden nitroselüloz veya naylon filtre şeridine aktarılır; bu şerit artık HIV'e özgü, gözle görülemeyen bir protein spektrumu içerir. . Daha sonra test materyali (serum, hastanın kan plazması vb.) şeride uygulanır ve eğer numune spesifik antikorlar içeriyorsa, kendilerine tam olarak karşılık gelen antijen protein şeritlerine bağlanır. Sonraki manipülasyonların bir sonucu olarak (ELISA'ya benzer şekilde), bu etkileşimin sonucu görselleştirilir - görünür hale getirilir. Sonuçta şeridin belirli alanlarında bantların varlığı, antikorların varlığını kesin olarak doğrular. belirli antijenler HIV.

İmmünoblotlama çoğunlukla HIV enfeksiyonunun tanısını doğrulamak için kullanılır. DSÖ, herhangi iki HIV zarf proteinine karşı antikorların immünoblotlama yoluyla tespit edildiği pozitif serumları dikkate almaktadır. Bu önerilere göre, zarf proteinlerinden yalnızca biriyle (gp160, gp120, gp41) kombinasyon halinde veya diğer proteinlerle reaksiyon olmadan reaksiyon varsa, sonuç şüpheli kabul edilir ve bir kit kullanılarak yeniden test yapılması önerilir. farklı serilerden veya farklı bir şirketten. Güvenli tarafta olmak gerekirse

Pirinç. 27. İmmünoblotlamanın yapılabilmesi için ilk aşamada kan serumunda bulunan proteinler bir jel içerisinde moleküler ağırlıklarına ve yüklerine göre ayrılır. Elektrik alanı(jel elektroforezi kullanılarak). Daha sonra jelin üzerine bir nitroselüloz veya naylon membran yerleştirilir ve "blotlanır" (bu, kurutmadır). Bu, malzemenin jelden membrana tamamen aktarılmasını sağlayan özel bir bölmede gerçekleştirilir. Sonuç olarak, jel üzerinde bulunan protein düzeninin modeli membran (leke) üzerinde yeniden üretilir ve bu daha sonra kolaylıkla manipüle edilebilir. Başlangıçta, membran istenen antijene karşı antikorlarla muamele edilir ve bağlanmamış materyalin yıkanmasından sonra, antikorlara spesifik olarak bağlanan radyoaktif olarak etiketlenmiş bir konjugat eklenir (ELISA'da olduğu gibi). Ortaya çıkan antijen-antikor etiketli konjugat kompleksinin konumu, X-ışını filmi kullanılarak otoradyografi kullanılarak belirlenir. Belirtiler ortaya çıktıktan sonra kanda antijen olup olmadığı belli olur ve sonuç şüpheli kaldıktan sonra altı ay takip önerilir (araştırma üç ayda bir devam eder).

Şu anda, Rusya Federasyonu'nda, HIV enfeksiyonunun teşhisinde kullanılmak üzere, aralarında hem Rus hem de yabancı olan beş test sisteminin kullanılması tavsiye edilmektedir.

Anesteziyoloji ve Reanimatoloji kitabından yazar Marina Aleksandrovna Kolesnikova

Vücudumuzun Tuhaflıkları kitabından. Eğlenceli anatomi kaydeden Stephen Juan

İlk Yardım Kılavuzu kitabından kaydeden Nikolay Berg

Sigarayı %100 nasıl bırakabilirsiniz veya Kendinizi sevin ve hayatınızı değiştirin kitabından kaydeden David Kipnis

Kitaptan Kılavuzun tamamı hemşirelik yazar Elena Yurievna Khramova

Dizin kitabından acil Bakım yazar Elena Yurievna Khramova

Sezaryen kitabından: Güvenli bir çıkış mı yoksa geleceğe yönelik bir tehdit mi? kaydeden Michelle Oden

kaydeden Gary Griffin

Kitaptan Erkek penisinin boyutu nasıl artırılır kaydeden Gary Griffin

Düztabanlık kitabından. En çok etkili yöntemler tedavi yazar Alexandra Vasilyeva

Güzellik ve Kadın Sağlığı kitabından yazar Vladislav Gennadievich Liflyandsky

Yoga ve Cinsel Uygulamalar kitabından kaydeden Nick Douglas"MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2" reaktif seti, HIV-1 ve/veya HIV-1 grup O ve/veya HIV-2'nin bireysel proteinlerine (antijenlerine) karşı antikorların tespitini doğrulamak için tasarlanmıştır. serum veya plazma insan kanı immünoblotlama yöntemi ile.

Ayırt edici özellikleri:

“MPBA - Blot - HIV-1, HIV-2” reaktif seti, HIV 1'in saflaştırılmış lizat viral proteinlerini ve HIV-2'nin antijenik determinantı gp36 olan bir peptidi içerir;
Tek şeritte HIV-1, HIV-1 grup O, HIV 2'ye karşı antikorların tespitini sağlar;
Testlerin hazırlanması ve yürütülmesi için basit prosedür;
Dahili reaksiyon kalite kontrolü*
Maksimum analiz hızı (3 saat);
Test numunesinin küçük hacmi - 20 µl;
Gerektirmez ek ekipman Araştırma için;
Setin kalitesi Rus ve uluslararası standart numunelerin kullanılmasıyla garanti edilmektedir**

* İç kalite kontrolü aşağıdakilerin varlığıyla sağlanır:

dahili kontrol şeritleri, bir serum veya plazma örneğinin eklenmesi üzerinde kontrol sağlar;
kontrol negatif serum (K-);
şeritte tespit edilen bantların tanımlanmasına olanak sağlayan kontrol pozitif serum (K+);
Reaktif kitinin hassasiyetinin kontrolünü sağlayan zayıf pozitif serumu (K+cl) kontrol edin.

**Kalite güvencesi:

MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2 reaktif kitinin özellikleri, rastgele bir donör örneğinden, HIV enfeksiyonu tanısı alan hastalardan, ticari serokonversiyon panellerinden, standart panellerden ve "potansiyel olarak müdahale eden" numunelerden alınan numunelerin test edilmesiyle belirlendi. belirlenmesi” bileşenleri.

Reaktif seti, HIV 1,2 ve HIV-1 antijenine karşı antikorlar içermeyen standart panel serumlarını incelerken hatalı pozitif sonuçlar vermez (“AT (-) HIV Standardı”, No. FSR 2007/00953, 25.10.2007 tarihli) ). Özgüllük - %100.

Tanısal özgüllük, önceden HIV-1 ve HIV-2 enfeksiyonunun olmadığı doğrulanmış çeşitli kan merkezlerinden ve kliniklerden 200 donörden oluşan rastgele bir örnek üzerinde çalışılarak belirlendi. Rastgele bir bağışçı örneğini incelerken özgüllük %100'dü;

Reaktif kitinin özgüllüğü, hamile kadınlardan, hastanede yatan hastalardan, hepatit C ve E hastalarından ve "potansiyel olarak müdahale eden" bileşenlere sahip numunelerden alınan serum veya plazma numuneleri dahil olmak üzere 250 numunenin test edilmesiyle belirlendi. Bu numuneler için MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2 kiti kullanıldığında hiçbir yanlış pozitif sonuç tespit edilmedi.

Tanısal duyarlılık aşağıdakiler kullanılarak belirlendi:
- farklı HIV-1 alt tiplerini içeren farklı bölgelerden Boston Biomedica, Inc HIV-1 panelinden (WWRB 301) alınan plazma numuneleri: grup M (alt tipler A, B, C, D, E, F) ve grup O; reaktif kitinin hassasiyeti %100'dü;

Reaktif kitinin duyarlılığı, uluslararası serokonversiyon panelleri Boston Biomedica, Inc (SeraCare Life Sciences), kat. numara. PRB 903, PRB 904, PRB 909, PRB 912, PRB 916, PRB 917, PRB 918, PRB 919, PRB 921, PRB 923, PRB 924, PRB 927, PRB 928, PRB 932, PRB 940.

Reaktif seti, HIV-1'e karşı antikorlar içeren standart bir panelin serumunda HIV-1'e karşı antikorları tespit eder ("AT (+) HIV-1 Standardı", No. FSR 2007/00953, 25 Ekim 2007 tarihli), HIV-2'ye karşı antikorlar içeren standart panel serumlarında HIV-2 ("AT (+) HIV-2 Standardı", No. FSR 2007/00953, 25 Ekim 2007). Hassasiyet - %100.

13 Temmuz 2011 tarih ve FSR 2010/07958 numaralı kayıt sertifikası (geçerlilik sınırsız)

Birleştirmek:

İmmünosorbent. Nitroselüloz membran şeritleri beyaz bireysel HIV-1 proteinleri (gp160, gp120, p66, p55, p51, gp41, p31, p24, p17) elektrotransfer ile üzerlerine emdirilir ve gp36 proteininin bir analoğu olan sentetik bir HIV-2 peptidi ile şeride uygulanır ve anti-insan IgG ( dahili kontrol) - 18 parça;
K- - kontrol negatif serum. HIV-1,2, HCV, HIV antijeni, HBsAg'ye karşı antikorlar içermeyen insan kan serumu, 56°C'de ısıtılarak etkisiz hale getirilir; şeffaf açık sarı sıvı - 1 test tüpü (0,08 ml). Koruyucu maddeler içerir: timerosal ve sodyum azid;
K+ - kontrol pozitif serum. HBsAg, HIV antijeni, HCV'ye karşı antikorlar içermeyen, HIV-1,2'ye karşı antikorlar (titrasyon 1:10000'den az olmayan) içeren insan kanı serumu, 56°C'de ısıtılarak etkisiz hale getirilir; şeffaf açık sarı sıvı - 1 test tüpü (0,08 ml) Koruyucu maddeler içerir: timerosal ve sodyum azid;
K+sl - zayıf pozitif serumu kontrol eder. HBsAg, HIV antijeni, HCV'ye karşı antikorlar içermeyen, HIV-1,2'ye karşı antikorlar (titrasyon 1:200'den fazla olmayan) içeren insan kan serumu, 56°C'de ısıtılarak etkisiz hale getirilir; şeffaf açık sarı sıvı - 1 test tüpü (0,08 ml). Koruyucu maddeler içerir: timerosal ve sodyum azid;
RPOKk (x10) - numuneleri ve konjugatı seyreltmek için çözüm. Konsantre - Önceden işlenmiş normal keçi serumu içeren Tris tamponu; opak gri sıvı - 1 şişe (10 ml). Koruyucu içerir: timerosal;
PRk (x20) - yıkama solüsyonu. Konsantre - Tween-20 içeren Tris tamponu; şeffaf renksiz sıvı - 1 şişe (70 ml). Koruyucu içerir: timerosal;
Konjuge. Alkalin fosfataza konjuge edilmiş keçi anti-insan IgG antikorları; berrak renksiz sıvı - 1 test tüpü (0,06 mi);
Substrat (renklendirme çözeltisi). 5-bromo-4-floro-indolil fosfat (BCIP) ve nitromavi tetrazolyum (NBT) çözeltisi; şeffaf açık sarı sıvı - 1 şişe (50 mi);
İmmünoblotlama için toz. Az yağlı süt tozu- amorf beyaz veya açık sarı toz - 5 paket x 1g;
Reaksiyonu ayarlamak için kapaklı tablet - 2 adet;
Plastik cımbız - 1 adet.

Kan bir damardan alınır. Daha sonra çalışma talimatlara göre devam eder:

numune, elektroforetik ayırma için bir jel içine yerleştirilir, bu da virüse duyarlı spesifik proteinlerin elde edilmesini sağlar;
işlenmiş jele nitroselüloz kağıt uygulanır;
Hazırlanan numune kurutma aparatına yerleştirilir.

Belirli enzimleri tanımlamak için kağıdın uygun şekilde hazırlanması gerekir. laboratuvar araştırması. Bunu yapmak için üzerine antikorlar ve etiketli bir radyoaktif konjugat uygulanır. Çalışmanın sonucu görsel olarak değerlendirilerek oluşturulan enzim zincirleri incelenir.

Sonuçların kodunun çözülmesi

Manipülasyondan sonra kağıt üzerinde çizgiler kalıyor. Konjugasyonun meydana geldiği, yani uygulanan ilacın virüs proteini ile reaksiyona girdiği yerde bulunurlar. Bu şekilde proteinin kısımlarını tespit edebilirsiniz:

HIV-1'in çekirdeğinden – p17, p24, p55;
patojen HIV-2 – p16, p26, p56.

İmmünoblotlama sonuçları, 3 HIV-1 veya HIV-2 proteininden 2'sinin tespit edilmesi durumunda pozitif kabul edilir. Western blot (çalışmanın ikinci adı) sıklıkla doğrulamak için kullanıldığından pozitif ELISA ardından reaksiyon belirli proteinler açısından kontrol edilir: gp120/160, gp41 veya p24. Bunlar üç ana AIDS geninin (gag, pol ve env) bir parçasıdır. İlk tanı sırasında sadece p25, gp110/120 ve gp160 proteinleri için test yapılır; pozitif sonuç verirse p24 için test yapılır. Proteinin bu kısmı virüsün erken aşamada tespit edilmesini sağlar.

Olumlu bir sonuç, daha karmaşık teşhisler aramanın bir nedenidir. Yalnızca 3 durumda yanlıştır:

olan hastalarda yüksek seviye bilirubin;
viral antijenlerle temas halinde;
bağ dokusu patolojileri için.

Hastada AIDS proteinlerine karşılık gelen çizgiler yoksa sonuç negatif olarak değerlendirilir. Bu, kişinin HIV ile enfekte olmadığı veya pencere döneminde olduğu anlamına gelir. İkincisi, virüsün vücuda girmiş olabileceği ancak henüz vücutta gelişmediği anlamına gelir. Teşhis doğruluğunu arttırmak için test sistemleri kullanılır:

Rekombinant-HIV;
Antijen;
Pepto ekran.

Bunları kontrol ettikten sonra, örnekte gp120, gp160, Sp4 proteinleri bulunmazsa sonuç negatif kabul edilir.

Başka bir yorumlama seçeneği daha var - tarafsız veya şüpheli bir sonuç. HIV ile enfekte bir partnerle cinsel temasta bulunanlarda ortaya çıkar. Kanlarında gp120 ve gp160 proteinlerine karşı antikorlar bulunur. Ayrıca enfeksiyon asemptomatik olduğunda, yani hareketsiz durumda olduğunda, lekeleme sırasında şüpheli bir cevap verilir.

Şüpheli bir sonucun iyice kontrol edilmesi önemlidir. Bu amaçla, kan serumunun dinamik bir çalışması, yani altı ay boyunca immünoblotlama ve ELISA yöntemleri kullanılarak düzenli kontroller kullanılır. Ayrıca atandı ek sınavlar, çünkü kanda otoantikorların ve bağışıklık komplekslerinin varlığı şunlara bağlı olabilir:

bulaşıcı hastalıklar;
kanserli tümörlerin varlığı;
alerjiler.

Tanım

Belirleme yöntemiİmmünoblot.

İncelenen materyal Kan serumu

Ev ziyareti mevcut

Antinükleer antikorlar, ribonükleik asitlere ve bunlarla ilişkili proteinlere bağlanan bir otoantikor ailesidir. Yaygın bağ dokusu hastalıkları olan hastaların %90'ından fazlasında görülürler ve sıklıkla aşağıdaki durumlarda da gözlenirler: otoimmün hastalıklar karaciğer ve bir dizi başka durum. Bugüne kadar bu otoantikor ailesinin yaklaşık 200 çeşidi karakterize edilmiştir, ancak bunların hepsi klinik uygulamada kullanılamamaktadır.

Antinükleer antikorların immünoblotu, tek bir testte 15 ana antinükleer antikor tipini aynı anda incelemenize olanak tanır; ayırıcı tanı Başlıca sistemik romatizmal hastalıklar. İmmünoblot ile tespit edilen her tip otoantikor genellikle karakteristik özelliklere sahip hastalarda gözlenir. klinik tablo bu nedenle, otoantikor spektrumu yalnızca hastalığın teşhis edilmesine değil, aynı zamanda belirli klinik belirtilerin gelişme riskinin belirlenmesine de olanak tanır.

İkinci aşamada antinükleer antikorların immünoblotunun kullanılması tavsiye edilir. serolojik inceleme en olumlu sonuç hastanın serumunda antinükleer antikorların varlığını gösteren diğer testler. Bu tür testler, antinükleer antikorların belirlenmesini (ELISA taraması), Hep2 hücrelerinde (ANF) antinükleer faktörün (ANF) saptanmasını, antinükleer antikorların ve ekstrakte edilebilir nükleer antijene (ENA) karşı antikorların belirlenmesini içerir.

Sistemik romatizmal hastalıkların tanısında antinükleer antikorların immünoblotlama yöntemi, yüksek klinik özgüllük ile karakterize edilir. Ancak antinükleer antikorların özgüllüğü, yüksek ANF () titrelerinde bile her zaman belirlenemez, çünkü bir dizi antinükleer antikor antijeni hala karakterize edilmemiş durumdadır. Bu durumda negatif immünoblot sonucu sistemik romatizmal hastalıkların tanısını dışlamaz. Bir dizi antinükleer antikor, miyozite özgü otoantikorlardan oluşan bir panel olan immünoblot () ve skleroderma için otoantikorlardan oluşan bir panel olan immünoblot () kullanılarak tespit edilebilir.

Edebiyat

Lapin S.V. Totolyan A.A. Otoimmün hastalıkların immünolojik laboratuvar teşhisi / Yayınevi "Man", St. Petersburg - 2010. 272 s.
Nasonov E.L., Alexandrova E.N. Modern standartlar laboratuvar teşhisi romatizmal hastalıklar. Klinik kılavuzlar/ BHM, M - 2006.
Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Organa Özgü Otoimmün Hastalıklarda Otoantikorlar: Tanısal Bir Referans/PABST, Dresden – 2011. 300 s.
Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Sistemik Otoimmün Hastalıklarda Otoantikorlar: Tanısal Bir Referans/PABST, Dresden – 2007. 300 s.
Gershvin ME, Meroni PL, Shoenfeld Y. Autoantibodies 2nd ed./ Elsevier Science – 2006. 862 s.
Shoenfeld Y., Cervera R, Gershvin ME Otoimmün Hastalıklarda Tanı Kriterleri / Humana Press – 2008. 598 s.
Reaktif kiti için talimatlar.

Hazırlık

Son yemeğinizden sonra 4 saat beklemeniz tercih edilir; zorunlu bir gereklilik yoktur.

Kullanım endikasyonları

Test aşağıdaki durumların tanısı ve ayırıcı tanısı için endikedir:

sistemik lupus eritematoz;
subakut kutanöz lupus ve diğer kutanöz lupus türleri;
karışık bağ dokusu hastalığı;
Sjögren sendromu ve ilişkili hastalıklar;
yaygın ve lokalize skleroderma, CREST sendromu;
inflamatuar miyopatiler (polimiyozit ve dermatomiyozit);
juvenil kronik artrit;
otoimmün hepatit;
primer biliyer siroz ve sklerozan kolanjit;
kullanım Bu test Yüksek titrelerde antinükleer faktör, antinükleer antikorlar, ekstrakte edilebilir nükleer antijene karşı antikorlar, DNA'ya karşı antikorlar, nükleozomlara karşı antikorlar ve antifosfolipid antikorları tespit edildiğinde endikedir.

Sonuçların yorumlanması

Araştırma sonuçlarının yorumlanması, ilgilenen hekim için bilgi içerir ve bir teşhis değildir. Bu bölümdeki bilgiler kendi kendine teşhis veya kendi kendine tedavi için kullanılmamalıdır. Doktor sonuçları kullanarak doğru tanıyı koyar. bu anket ve diğer kaynaklardan gerekli bilgiler: tıbbi geçmiş, diğer muayenelerin sonuçları vb.

Ölçü birimleri: niteliksel test, sonuç "tespit edildi" veya "tespit edilmedi" şeklinde sunulur.

Herhangi bir antikor türünün varlığını karakterize eden bir bant tespit edildiğinde, bandın renk yoğunluğu ayrıca tanımlanan antikor türlerinin her biri için artıların (“çaprazlar”) sayısıyla tanımlanır. Pozitiflik derecesindeki bir artış dolaylı olarak otoantikorların içeriğini ve afinitesini yansıtır.

Referans değerleri: Sm, RNP/Sm, SS-A (60 kDa), SS-A (52 kDa), SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, CENP-B, dsDNA, Histone, Nükleozoma karşı antikorlar , Kaburga P, AMA-M2, Jo-1 tespit edilmedi.

Otoantikor belirlemenin sonucu, karşılık gelen her antijen için "çaprazlamalar" halinde sunulur. Seropozitiflik derecesindeki artış dolaylı olarak otoantikorların içeriğini ve afinitesini yansıtır. Seropozitiflik değerlendirme sonucuna ilişkin seçenekler aşağıda verilmiştir:

Hiçbir antikor tespit edilmedi.
+/- - sınırda sonuç;
+ – belirli bir antijene karşı düşük otoantikor içeriği;
++ – belirli bir antijene karşı otoantikorların ortalama içeriği;
+++ – yüksek içerik Belirli bir antijene karşı otoantikorlar.

Antinükleer antikorların tespiti ile ilişkili ana hastalıklar:

Antijen	Anlam
Sm (Smith)	Sistemik lupus eritematozus için spesifik bir belirteç (Amerikan Romatoloji Koleji, ACR'nin SLE için 10. kriterine dahildir)
SS-A (Ro52)	Çeşitli otoimmün hastalıklarda, daha sıklıkla sistemik lupus eritematozus ve kutanöz formlarında, sistemik olarak görülür. romatizmal hastalıklar, romatoid artrit, otoimmün karaciğer hastalıkları vb.
SS-A (Ro60)	Sistemik lupus eritematozus, lupus eritematozus'un kutanöz formları, sistemik lupus eritematozusta ışığa duyarlılık, yüksek konjenital lupus eritematozus riski ve fetal kalp hasarı. Sjögren sendromunun ana serolojik göstergesi. Genellikle SS-A (Ro52) antijenine karşı antikorlarla birlikte belirtilir.
SS-B	Sjögren sendromu, sistemik lupus eritematozus.
PCNA	Sistemik lupus eritematozus, lupus nefriti riski.
Ribozomlar (Ribo P)	Sistemik lupus eritematozus, merkezi sinir sistemine zarar verme riski.
Nükleozomlar	Sistemik lupus eritematozus, yüksek lupus glomerülonefrit riski.
Çift sarmallı DNA	Sistemik lupus eritematozusun spesifik bir belirteci (SLE için 10. ACR kriterine dahildir), yüksek lupus nefriti riski.
snRNP/Sm	Karışık bağ dokusu hastalığı, düşük böbrek hasarı riski olan sistemik lupus eritematozus, skleroderma.
Histonlar	Sistemik lupus eritematozus, ilaca bağlı lupus, skleroderma.
Scl-70	Deride ve iç organlarda yaygın hasara neden olan sistemik skleroz.
PM-Scl	Polimiyozitin eşlik ettiği skleroderma.
CENP-B	Sklerodaktili, telanjiektazi, deri altı kalsifikasyonları, Raynaud sendromu, özofajit ile birlikte CREST sendromu.
Jo-1	Antisentetaz sendromu şeklinde polimiyozit.
AMA-M2	Primer biliyer siroz, Sjögren sendromu.