Kan ifa ne anlama geliyor. Enzim immünoassay (ELISA). Etkinlik için hazırlık

İmmünolojik kompleksler gibi biyolojik olarak aktif maddelerin içerik seviyesini belirlemek için özel bir laboratuvar çalışması gereklidir. Hematolojik, bulaşıcı veya otoimmün bir hastalıktan şüpheleniliyorsa, uzmanlar ELISA için bir kan testi reçete eder. Makale boyunca, ne olduğunu, buna nasıl hazırlanacağını, ne gösterdiğini ve kendiniz nasıl deşifre edeceğinizi ele alacağız.

Bu ne tür bir çalışma - ELISA için bir kan testi mi? Kısaltma, çeşitli biyolojik olarak aktif maddelerin kantitatif ve kalitatif içeriğinin yanı sıra biyolojik materyaldeki antikorların ve antijenlerin belirlendiği enzim immünoassay anlamına gelir.

Enzim immunoassay'de kullanılanlar:

• Beyin omurilik sıvısı;
• üretranın mukusu, servikal kanal;
• amniyotik sıvı;
• vitreus içeriği.

Enzim immün testi, cinsel yolla bulaşan hastalıkları, bulaşıcı ve onkolojik süreçleri, alerjik reaksiyonları, endokrin ve üreme sistemlerindeki bozuklukları, otoimmün ve immün yetmezlik hastalıklarını teşhis etmek ve ayrıca bazı böbrek geliştirme riskini değerlendirmek için reçete edilir.

Hamilelik sırasında ELISA için bir kan testi, erken teşhis, ilk aşamalardaki gelişim bozuklukları ve dinamiklerinin kontrolü amacıyla reçete edilir. Ek olarak, ELISA analizi, bir çocukta ciddi nörolojik bozuklukların gelişimini tetikleyebilecek antikorların seviyesini kontrol etmenizi sağlar, böylece sadece hamilelik sırasında değil, aynı zamanda doğum sırasında da komplikasyonların gelişmesini önler.

Belirlenen sorunlara önceden müdahale etmeyi ve hem annenin hem de bebeğinin sağlığını önemli ölçüde iyileştirmeyi mümkün kılar.

Kan ELISA'nın faydaları şunları içerir:

• yüksek (% 90'a kadar) hassasiyet derecesi;
• hastalığın evresinin aynı anda belirlenmesi ile erken tanı olasılığı;
• düşük reaktif maliyeti ve sonuç olarak kullanılabilirlik;
• araştırma için minimum malzeme miktarı;
• asgari makbuz koşulları;
• reaktiflerin uzun süreli depolanması olasılığı;
• patolojik sürecin gelişim dinamiklerini kontrol etme yeteneği.

Enzim immünolojik testinin eksileri:

• hastalığın etken maddesini belirlemek imkansızdır, laboratuvarda ona sadece bir bağışıklık tepkisi alırlar.
• yanlış bir sonuç alma olasılığı (çok nadir durumlarda, özellikle gebelik döneminde).

Eğitim

Bu tür kan testinin prensibi, antijenler, yani belirli bir hastalığın gelişmesine neden olan yabancı maddeler girdiğinde insan vücudunda spesifik antikorların oluşumuna dayanır. Etkileşimlerinin bir sonucu olarak, enzim immünoassay uygulanmasında araştırmaya tabi tutulan “antijen-antikor” kompleksleri oluşur.

Bu bağlamda, bu kompleksleri etkilememek ve buna bağlı olarak elde edilen sonuçların güvenilirliğini sağlamak için ELISA için bir kan testi ve diğer biyolojik materyalin hazırlanması gerekmektedir.

Ayrıca önerilen muayeneden 14 gün önce spesifik tedaviye ara verilir ve antibakteriyel, antiviral ilaçların kullanımı durdurulur.

ELISA için kan bir damardan alınır. Kan örneklemesinden hemen önce fiziksel aktivite sınırlandırılmalı, ayrıca sigara ve alkollü içkiler içilmemelidir.

Enzim immün testi yapmak için çeşitli teknikler ve yöntemler vardır: doğrudan ve dolaylı yöntem, rekabetçi ve bloke etme yöntemi.

ELISA'da kanın (diğer herhangi bir biyolojik materyal) incelenmesinin temeli, bağışıklık ve enzimatik olmak üzere iki reaksiyonun uygulanmasından oluşan bir algoritmadır.

İlkinde, patolojik ajanlar, çalışma için alınan biyolojik materyalin hücrelerinin koruyucu elemanlarına bağlanır. Bir antijen-antikor bağışıklık kompleksi oluşur. Şuna benziyor. Antijenler kesinlikle tüm hücrelerin yüzeyinde bulunur.

Yabancı hücreler vücuda girdiğinde, yeni gelen hücrelerin yüzeyindeki antijen verilerini kendi “hafızalarında” depolanan bilgilerle karşılaştıran (yüzeylerinde antikorların bulunduğu) bağışıklık hücreleri tarafından yakalanırlar. Bu veriler arasında tutarsızlık olması durumunda, bir bağışıklık kompleksinin oluşumundan oluşan vücudun koruyucu işlevleri dahil edilir.

Bundan sonra, önceki reaksiyonun sonuçlarını görselleştiren bir enzimatik reaksiyon gerçekleştirilir. İlkesi, maddenin birinden diğerine dönüşümüne dayanır. Malzemenin bağışıklık reaksiyonu sırasında oluşan her bir ELISA türü için, işlenmesi yabancı bir maddenin konsantrasyonunu belirlemek için kullanılan (çözelti boyamasının yoğunluğu ile) belirli bir enzim vardır.

şifre çözme

ELISA için bir kan testi sayesinde, laboratuvar asistanları A, G ve M'yi belirler. ELISA için kan (diğer biyolojik hammaddeler) çalışmasında pozitif bir sonuç, sadece teşhis koymayı değil, aynı zamanda hastalığın evresini de mümkün kılar. , yanı sıra seyrinin doğası (akut veya kronik).

Hastanın vücudunda patolojik bir sürecin varlığında bu immünoglobulinler, hastalığın farklı dönemlerinde oluşur:

• İmmünoglobulinler M, IgM- hastalığın başlangıcından beş gün sonra oluşurlar ve kanda 1.5 ay kalırlar, sonra kaybolurlar. IgM'nin tespiti, vücutta akut bir birincil patolojik sürecin varlığını ve gelişmiş terapötik müdahale ihtiyacını gösterir.
• İmmünoglobulinler G, IgG- enfeksiyondan dört hafta sonra ortaya çıkar, vücuttaki varlıkları birkaç ay boyunca tespit edilebilir. IgG'nin tespiti, anamnezde bir kişinin geçmiş hastalığının varlığını gösterir. İçeriğindeki bir artış da yeniden enfeksiyona işaret edebilir.
• İmmünoglobulinler A, IgA- enfeksiyon anında ortaya çıkar ve vücutta dört haftadır bulunur. İçeriğindeki azalma, iyileşmenin başladığını gösterir. Kişi bir tedavi süreci geçirdikten ve iyileştikten sonra tekrar analizlerde ortaya çıkan görünüm, hastalığın kronik bir forma geçişini gösterir. ELISA sonuçlarında IgA ve IgG'nin aynı anda saptanması vücutta kronik bir sürecin varlığını da gösterir.

Ayrıca analizlerde IgG ve IgM'nin aynı anda bulunmasının kronik sürecin kötüleştiğini ve hastanın tedaviye başlaması gerektiğini gösterdiğini de belirtmek gerekir. Muayene sırasında immünoglobulinlerin hiçbiri tespit edilmediyse, bu, bir immün yanıtın olmadığı anlamına gelir.

ELISA analizi, önemli sayıda çeşitli hastalıkların laboratuvar teşhisi için modern bir tekniktir. Kısaltma, enzim immünoassay anlamına gelir. Tekniğin özü, antikorların titresini (aktivitesini) belirlemektir.

ELISA tekniği bugün önemli ölçüde popülerlik kazanmaktadır. Klinik tıpta çeşitli patolojilerin teşhisi için ve ayrıca çalışılan ortamdaki çeşitli bileşiklerin konsantrasyonunun doğru bir şekilde belirlenmesini gerektiren deneysel çalışmalarda kullanılır.

ELISA tekniğinin prensibi

ELISA, immünolojik bir reaksiyondur. Spesifik antikorların eklenmesine dayanır.
veya antijenleri test ortamına (çoğunlukla test kanı) ve ardından ortaya çıkan antijen-antikor komplekslerinin konsantrasyonunun enzimatik olarak belirlenmesi. Kompleksin konsantrasyonu ile test ortamında analitin seviyesi veya aktivitesi değerlendirilebilir.

Antijen-antikor komplekslerinin konsantrasyonunun belirlenmesi, genellikle kromatografik yöntemle özel ekipman kullanılarak gerçekleştirilir.

Yürütmek için endikasyonlar

ELISA analizi, çeşitli endikasyonlar için gerçekleştirilir, klinik tıpta başlıca olanlar:

• Enfeksiyöz ajana spesifik antikorlar tespit edilirken, klamidya, mikoplazmoz, üreaplazmoz, trichomoniasis içeren ağırlıklı olarak cinsel yolla bulaşan (STI) bulaşıcı patolojinin teşhisi.
• Öncelikle parenteral viral hepatit ve HIV teşhisi sürecinde patolojik sürecin aşamasını belirlemek için çeşitli lokalizasyondaki bulaşıcı hastalıkların teşhisi.
• Endokrin sistem organlarının (endokrin bezleri) çeşitli patolojilerinin teşhisi için hormon konsantrasyonunun belirlenmesi.
• Zehirlenme, böcek veya yılan sokması durumunda vücudun zehirlenme nedenini teşhis etmek için çeşitli bileşiklerin belirlenmesi.

Bu tıbbi endikasyonlarla ELISA kan testi yapılır. Ayrıca, bu teknik, yeni ilaçların, immünoprofilaksi için aşıların geliştirilmesi sırasında çeşitli klinik çalışmalar sırasında deneysel tıpta aktif olarak kullanılmaktadır.

Çalışma nasıl yapılır?

Özel bir laboratuvarda bir ELISA kan testi yapılır. Daha önce, uygulanması için, genellikle kübital venden 5-10 ml'lik bir hacimde venöz kan alınır ve daha sonra laboratuvara gönderilir. Ortalama olarak, analizin sonucu, hastalığın teşhisi konulduktan sonra tedavinin hemen atanması için önemli bir nokta olan ertesi gün alınabilir.

ELISA'ya nasıl hazırlanılır

Enzim immunoassay ile çalışmanın güvenilir sonuçlarını elde etmek için, aşağıdakileri içeren birkaç basit hazırlık önerisini izlemelisiniz:

• Testten bir gün önce yağlı yiyecekler (et, füme et) ve alkol tüketmeyi bırakmalısınız.
• Araştırma materyali sabahları aç karnına alınmalıdır.
• Çalışma gününde, fiziksel ve psiko-duygusal stresten kaçınmak arzu edilir.
• Çalışmadan önce sigara içmemeye çalışmalısınız.

Enzim immün testinin elde edilen yanlış pozitif sonuçlarının çoğu, hazırlık tavsiyelerinin yanlış uygulanmasından kaynaklanmaktadır. Bu, çoğu durumda, kan plazmasındaki trigliserit (yağ) konsantrasyonunda bir artışa yol açan ve ELISA'nın özgüllüğünü azaltan yağlı yiyecekler yemekle ilişkilidir.

Sonuçların deşifre edilmesi

ELISA kullanan antikorlar için kan testinin 2 modifikasyonu vardır - kalitatif ve kantitatif belirleme. saat
antikorların kalitatif olarak belirlenmesi, sonuç pozitif (enfeksiyöz ajanın neden olduğu patolojik bir sürecin olası varlığını gösteren antikorlar tespit edilir) veya negatif (enfeksiyöz bir sürecin yokluğunu gösteren antikor yok) olabilir.

Antikorların yokluğu, her zaman bulaşıcı bir sürecin yokluğunun %100 göstergesi değildir. Bunun nedeni, enfeksiyondan sonra antikorların hemen değil, belirli bir süre boyunca (en az yaklaşık 2 hafta) oluşmasıdır. Bu nedenle enfeksiyonun olmadığını doğrulamak için bir süre sonra ELISA tekrarlanabilir.

Kantitatif ELISA ile antikorların titresi (aktivitesi) ve sınıfları belirlenir. Çoğu durumda, bulaşıcı hastalıkların teşhisi için, enfeksiyondan sonra çeşitli aralıklarla vücutta oluşan IgG sınıfı (immünoglobulinler G) ve IgM (immünoglobulinler M) antikorları belirlenir, bu nedenle analiz sonucunun kodunun çözülmesi olabilir. birkaç anlam:

• IgM aktivitesinde bir artış ve IgG'nin yokluğu, yeni bir enfeksiyonun ve enfeksiyöz sürecin akut seyrinin kanıtıdır.
• IgM ve IgG aktivitesinde bir artış, kronik seyrinde ve uzun süreli enfeksiyonda bulaşıcı sürecin alevlenmesidir.
• IgG'nin yüksek aktivitesi ve IgM'nin yokluğu, uzun süredir devam eden bir enfeksiyonun arka planına karşı bulaşıcı sürecin kronik bir seyridir, bundan sonra altı aydan fazla bir süre geçmiştir (IgG sınıfı antikorların oluşumu için gereken süre).

Genel olarak, her bulaşıcı süreç için ELISA sonuçlarının yorumlanması belirli özelliklere sahiptir. Bulaşıcı bir hastalığın varlığının ve seyrinin aşamasının daha doğru bir şekilde belirlenmesi, bir doktor tarafından gerçekleştirilir.

ELISA şu anda çoğu bulaşıcı hastalığın teşhisi için tercih edilen yöntemdir. Böyle bir çalışmanın sonuçlarına dayanarak, doktor, müteakip yeterli ve etkili tedaviyi reçete etmek için doğru bir teşhis koyma ve patolojik sürecin seyrinin aşamasını belirleme fırsatına sahiptir.

İnsan immün yetmezlik virüsü enfeksiyonu ciddi bir tanıdır. Teşhisteki hatalar feci sonuçlara yol açabilir. HIV için ELISA analizi en erişilebilir araştırma yöntemidir, ancak her durumda bilgilendirici değildir.

ELISA - enzim immünolojik testi. ELISA yönteminin görevi, biyolojik materyalde immün yetmezlik virüsüne karşı antikorları tespit etmektir. Yöntemi kullanarak, virüslerin kendilerinin değil, yalnızca onların varlığına tepki olarak üretilen antikorların sıvıdaki varlığını izlemek mümkündür. ELISA, STD'lerin tanısında yaygın olarak kullanılmaktadır. Cinsel yolla bulaşan hastalıkları tanımlamaya yardımcı olur.

Birkaç ELISA türü vardır: doğrudan değişken, dolaylı değişken, sandviç yöntemi. Her durumda, teknik, yabancı bir ajanın penetrasyonunun bir göstergesi olarak işlev gören antikorların varlığının belirlenmesine dayanır. Bu "işaretleri" ortaya çıkarmak için biyolojik bileşen enzimlerle işlenir.

ELISA, antikorları %96 - 98 doğrulukla tespit eder, hata ihmal edilebilir. % 2 - 4'tür.

ELISA - HIV teşhisi için bir yöntem

HIV için ELISA analizi, tanının ilk aşamasıdır. İmmün yetmezlik virüsünün antijenleri, p24, p15, p17, p31 proteinleri ve gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160 glikoproteinleridir.

Viral bir proteini tespit etmek için bir damardan kanın bir kısmı alınır. ELISA kan testi için gönderilen bir numune, enzim immünoassay reaktifleri ile işlenir. Serum kandan izole edilir. Çalışma sırasında bulunurlarsa, virüs zaten kanda bulunur.

Kan kesinlikle aç karnına verilir. Analizden 2 gün önce yağlı yiyecekler yemeniz ve alkol almanız önerilmez. 14 gün içinde antiviral ilaçları almayı bırakmalısınız.

Yöntemin avantajları:

• nispeten düşük maliyet;
• reaktiflerin yüksek stabilitesi;
• yüksek hassasiyet;
• kısa teslim süresi;
• insan faktörünün minimum etkisi.

ELISA için modern test sistemleri dünya standartlarına göre üretilmektedir. Bu, yöntemin doğruluğunu artırır.

ELISA her zaman güvenilir sonuçlar vermez. Virüs kana girdikten sonra, gelişmenin gizli (gizli) aşaması başlar. Virüslerin çoğalmaya başlamasına ve antikorların henüz oluşmamasına kadar geçen süreye “seronegatif pencere zamanı” denir. Bu aşamada ELISA yapmak anlamsızdır. Bir enfeksiyon meydana geldiyse, sonuç olacaktır. Virüsün kendini ne kadar çabuk tespit ettiği, vücuda kaç tane tehlikeli hücre girdiğine bağlıdır. Korunmasız cinsel ilişki veya enfekte kan transfüzyonu ile bu süre minimum olacaktır.

HIV için ELISA'nın yüksek güvenilirliği için çalışma üç kez gerçekleştirilir. İnsan immün yetmezlik virüsü için ELISA için son tarihler:

• Muhtemel temastan 6 hafta sonra,
• 3 ayda,
• altı ay sonra.

HIV için 4. nesil ELISA, enfeksiyonun erken evrelerinde en bilgilendirici yöntemdir. İddia edilen enfeksiyondan 1 ay sonra yapılabilir. Test, 3. nesil muadili ile karşılaştırıldığında pahalıdır. Bu nedenle kamu sağlık kurumlarında ek bir tanı yöntemi olarak kullanılmaktadır. Test 3 ücretsiz olarak gerçekleştirilir, sonuçlarına göre net bir cevap vermek mümkün değilse, hasta 4. nesil ELISA'ya gönderilir.

Önemli! Enfeksiyondan hemen sonra, bir kişi bulaşıcı hale gelir. Tanısını henüz bilmese bile başkaları için tehlikelidir!

ELISA sırasında HIV antijenlerine karşı antikorlar tespit edilirse, ek çalışmalar gereklidir. Bunlara ait. Bu yöntemin güvenilirliği %80'dir. PCR yardımı ile kan, meni ve vajinal akıntı incelenir. Biyolojik sıvı tıbbi bir reaktörde bölünür, ardından enzim işlemine tabi tutulur. Sonuç olarak, sıvı bir ortamdaki HIV hücrelerinin konsantrasyonu hakkında veriler elde edilir. Büyük hata (%20) nedeniyle, pozitif bir sonuçla ek olarak immün lekeleme yapılır.

Bir sonraki tanı adımı, Combo testidir (veya immün lekeleme). Bu oldukça hassas bir çalışmadır (%98 güvenirlik) ve 6. ayda ELISA sonuçları yetersizse yapılmalıdır.

ELISA sonuçlarının yorumlanması

Şifre çözme süresi 24 ila 48 saat arasındadır. Acil olarak bilgi alınması gerekiyorsa (cerrahi müdahale gerekli), 2 saat içinde deşifre işlemi gerçekleştirilir. İl sağlık istasyonları her zaman gerekli reaktiflere sahip değildir. Numune dolaşım yerinde alınır, ardından bölge merkezine aktarılır. Bu gibi durumlarda, sonuç 1-2 hafta içinde öğrenilebilir.

Bir enzim immün testinin sonucu, pozitif veya negatif olabilir; Başka seçenek yok.

Birincil ve tekrarlanan ELISA sırasında sonuç pozitif olsa bile, hasta HIV ile enfekte olarak tanınamaz. Olası hata. Yanlış pozitif sonucun nedenleri:

• kronik hastalıklar;
• uzun süreli bulaşıcı hastalıklar;
• gebelik.

Bu nedenle, analizin sonucu ek çalışmalarla netleştirilmelidir.

HIV için immünoblotlama sırasında (reaktif), bir kişinin HIV ile enfekte olduğu düşünülürse, bu onun sağlıklı olduğu anlamına gelir.

Virüsün hücreleri sonunda reçete edilen ilaçlara uyum sağlar. Kontrol etmek için ELISA testi periyodik olarak tekrarlanır.

Bazen immünoblotlama yanlış bir negatif sonuç gösterir. Son derece nadir immün yetmezlik virüsü 6 ay (veya daha fazla). Bu, kan dolaşımına az miktarda virüs hücresi girmişse mümkündür. Toplam vaka sayısının% 0,5'inde enfeksiyon ancak bir yıl sonra teşhis edilebilir. %99,5'inde enfeksiyondan sonraki altı ay içinde bir ELISA güvenilir bir sonuç verecektir.

Yüksek hassasiyetli çalışmalarda bile hala %2'lik bir hata payı vardır. İnsan faktörünü unutmamalıyız. Hata olasılığını ortadan kaldırmak için 2 farklı kurumda test yapılabilir.

Genetik, moleküler biyoloji, kimya gibi ilgili bilimlerin gelişmesi ve teknolojik ilerlemenin büyümesi ile modern tıp, çok çeşitli insan hastalıklarını teşhis etmek için yenilikçi yöntemlere sahiptir. Sonuçların yüksek doğruluğu ve uygulama güvenliği ile karakterize edilirler. Sağlık sorunlarını tespit etmenin bu tür bir yolu enzim immün testidir. Son on yılda geniş bir popülarite kazanmış ve hastanın dış semptomların başlangıcından önce bile hastalıkları tespit etmesi için oldukça etkili, güvenilir ve güvenli bir yöntem olarak ün kazanmıştır. Bu tür bir teşhisin ne olduğunu, çalışma prensibinin ne olduğunu erişilebilir bir şekilde açıklayacağız, avantajları not edeceğiz, böyle bir analizin maliyetini yönlendireceğiz.

Vücudun patojenik floraya tepkisi

Enzim immunoassay sayesinde laboratuvar teknisyenlerinin çeşitli hastalıkları nasıl teşhis ettiğini anlamak için enfeksiyon sırasında vücutta meydana gelen fizyolojik süreci anlamak gerekir. Patojenik bir mikroorganizma kan dolaşımına girdiğinde, insan bağışıklık sistemi belirli maddelerin - antikorların salınımı şeklinde koruyucu bir reaksiyon gösterir. Hücreyle temasa geçerek vücudun bir parçası mı yoksa dışarıdan mı verildiğini analiz ederler. Bağışıklık sistemi hücrenin yabancı olduğunu tespit ederse, patojenle savaşmak için antikor sayısı artmaya başlar.

Antikorlar farklı tiplerdedir, kendi özelliklerine sahiptir. Bazı maddeler doğrudan enfeksiyon döneminde ortaya çıkar, diğerleri insan vücudunda yaşam boyunca kalır ve onlar sayesinde belirli bir hastalığa karşı güçlü bir bağışıklık geliştirilir. Protein yapıları aşağıdaki tiplere ayrılır: A, D, E, M, G. Tıpta antikorlara immünoglobulinler denir. Bu nedenle, bu maddelerin göstergelerini Latin harfleri Ig ile belirtmek gelenekseldir.

Tıp bilgisine dayalıdır. Laboratuvarda bulunan özel antijenler yardımıyla biyolojik materyalde belirli antikorların varlığını veya yokluğunu belirlemek mümkündür. Böyle bir analizin sonuçlarına dayanarak, doktor teşhis koyabilir, ayrıca sadece patolojinin varlığını değil, aynı zamanda kökeninin reçetesini de belirleyebilir ve hasta için tehlike seviyesini belirleyebilir. Enzim immünoassay'de, M ve G gruplarının antikorlarının varlığı en sık incelenir.

IFA nedir?

Aslında, enzim immunoassay, modern toplumun bir yeniliği değildir. 80'lerde icat edildi. Ancak bu tür çalışmalar hantal pahalı ekipman gerektiriyordu. Bu nedenle, bu yöntem yalnızca özel olarak donatılmış bilimsel laboratuvarlarda kullanıldı: hücre ve dokuları yazmak için kullanıldı. Ancak o zamanlar teşhis tıbbında geniş bir dağıtım almadı, teknik olarak zor ve kullanımı son derece maliyetliydi. Sadece teknolojinin gelişmesi ve biyopolimer malzemelerin icadı ile ELISA geliştirildi. Bundan sonra yöntem popülerleşmeye ve tıp çevrelerinde güven kazanmaya başladı.

Yukarıda bahsedildiği gibi, bu yöntem biyomateryalde - kan, amniyotik sıvı, camsı cisim veya beyin omurilik sıvısı - belirli immünoglobulin gruplarının saptanmasını içerir.

Yüzeye antijen uygulanmadan yapılan çalışmalar ve özel kuyucuklarda reaksiyonu içeren enzime bağlı immünosorbent testi vardır. İkinci yöntem daha fazla hassasiyet ve güvenilirliğe sahiptir, bu nedenle insan hastalıklarını tespit etmek için tıbbi laboratuvarlarda analiz bu şekilde yapılır.

Enzim immunoassay aşamaları

Şüphelenilen hastalığa bağlı olarak, kimyasal reaksiyon sırasında bir enfeksiyon varlığında patojenik flora ile temas edecek olan enzim immünoassay kitinden gerekli antijen kullanılır. Bu işleme bir bağışıklık tepkisi yürütmek denir.

Ardından, çalışmanın sonucunu görsel olarak belirlemek için ELISA'nın enzimatik bir aşaması gerçekleştirilir. Malzemenin özel reaktifler yardımıyla lekelenmesini içerir. Bu çalışmada kullanılan enzimler alkalin fosfataz, peroksidaz ve avidindir. Kimyasal reaksiyonların gerçekleştirilme sürecinde ortaya çıkan renge bağlı olarak, enzim immünoassay sonucu belirlenir.

kolorimetri nedir?

Teşhisin enzimatik aşamasının analizi, "kolorimetri" adı verilen bir yöntem kullanılarak gerçekleştirilir. Gerçek şu ki, sadece malzemenin rengi değil, aynı zamanda kimyasal reaksiyonlardan kaynaklanan renk yoğunluğu da enfeksiyon hakkında bilgi verir. Patojenik bir mikroorganizmanın konsantrasyonunu belirleyen bu göstergedir. Manuel tanı yöntemi eski moda bir şekilde kullanılıyorsa, belirtilen göstergeleri belirlemek için özel bir kalibrasyon grafiği oluşturulur.

Günümüzde modern laboratuvarlarda manuel yöntem nadiren kullanılmaktadır. ELISA'nın analizi için özel bir aparat kullanılır - sadece çalışmanın parametrelerinin manuel olarak ayarlandığı bir kolorimetre ve ardından çizim dahil tüm işler cihaz tarafından otomatik olarak gerçekleştirilir.

ELISA yöntemleri

Doğrudan ve dolaylı enzim immünoassay yöntemleri vardır. İlk tür, yalnızca 3 yürütme aşamasına sahip olduğundan daha az zaman alır. Öncelikle özel kuyucuklara yerleştirilen test materyalinin antijenlerine spesifik antikorlar eklenir. Fazlalık daha sonra çıkarılır ve testin enzimatik aşaması gerçekleştirilir, böylece sonuç elde edilir.

Dolaylı yöntem, doğrudan tanı yönteminden daha yüksek bir duyarlılığa sahip olduğu için çok daha sık kullanılır. İkili bir çalışma kullanır. Yani antijen önce etiketlenmemiş antikora, ardından etiketli antikora bağlanır. Böyle bir işlem daha fazla zaman alır, ancak sonuç en doğrudur.

Reaktif kitleri

Enzim immunoassay kitleri, farklı üreticiler tarafından çeşitli konfigürasyonlarda üretilir. Rusya'da "Soyuz mediko-biyolojik" şirketi tanınmaktadır. Bu üretici, bu şekilde analiz edilebilecek enlemlerimizde yaygın olan hemen hemen tüm enfeksiyonların ELISA çalışmaları için reaktif kitleri üretmektedir. Reaktiflerin kendilerine ek olarak, kitler güvenlik, kolaylık ve analiz hızı sağlayan ek malzemeler içerir. Ek olarak, kimyasal maddeler farklı renklerde renklendirilir, bu da bir laboratuvar asistanı tarafından reaktif seçiminde hata olasılığını azaltır.

Kimyasal ve biyolojik kitler, popülasyon için enzim immün testinin dağıtımını ve kullanılabilirliğini doğrudan etkileyen nispi kullanılabilirlik açısından farklılık gösterir.

Teşhis yönteminin avantajları

Kuşkusuz, enzim immünoassay'in diğer tanı yöntemlerine göre bir takım avantajları vardır:

1. Yardımı ile, testin yüksek hassasiyetini gösteren hafif bir patojenik organizma varlığı bile belirlenebilir.
2. Başarılı bir tedavi şansını önemli ölçüde artıran, hastalığı en erken aşamalarda tespit etme yeteneği.
3. Biyolojik materyal almanın basitliği ve rahatlığı. Bu tür analizler hem özel laboratuvarlarda hem de halka açık laboratuvarlarda gerçekleştirilir. Gerekirse hemşire hastadan materyali evde alabilir.
4. Analiz için çok az miktarda biyomateryal gereklidir.
5. Hızlı sonuçlar. Modern tıbbi ekipman, bir gün içinde analiz yapmanızı sağlar.
6. Gizli asemptomatik enfeksiyon formlarını tespit etme yeteneği.
7. Araştırmanın mevcudiyeti.
8. Gerekirse bu yöntemle toplu anketler yapmak mümkündür.
9. Hasta için kesinlikle güvenli bir şekilde ELISA ile tekrar tekrar analiz yapmak mümkün olduğundan, hastalığın seyrini ve öngörülen tedavinin etkinliğini izlemek mümkündür.
10. İnsan faktörünü ortadan kaldıran ve sonuçların güvenilirliğini artıran analiz aşamalarının otomasyonu.
11. ELISA için reaktifler uzun süre saklanır - yaklaşık bir yıl.
12. Analiz, ortam sıcaklığı dalgalandığında mümkündür.

M grubu immünoglobulinler

Grup M antikorları, yabancı bir antijenin saptanmasından hemen sonra bağışıklık sistemi tarafından üretilir. Bu nedenle, enzime bağlı immünosorbent tahlili, biyomateryalde bu tür maddelerin tespiti ile sona erdiyse, bu, hastalığın seyrinin akut bir aşamasını, bir birincil enfeksiyonu gösterir. Grup M immünoglobulinler, enfeksiyon tipine bağlı olarak vücutta bir aya kadar kalabilir. Sonra sayıları tamamen yok olana kadar azalır.

G Grubu immünoglobulinler

Grup M immünoglobulinlerin yerini G tipi protein yapıları alır Bu maddeler, çoğu durumda hastalığa karşı ömür boyu kalıcı bir bağışıklık sağlar. Test materyalinde IgG'nin protein yapısının belirlenmesi, organizmanın daha önce patojenle karşılaştığını ve yeniden enfeksiyona karşı koruyucu bir reaksiyona sahip olduğunu gösterir.

Teşhis için endikasyonlar

Çeşitli bulaşıcı hastalıkları, hormonal durumları belirlemek için enzime bağlı bir immünosorbent tahlili kullanılır ve alerji testleri yapılır. Yani:

• tiroid hormonlarının seviyesini belirlemek;
• üreme hormonal panelinin göstergeleri;
• tümör belirteçleri;
• sitomegalovirüs, hepatit, toksoplazma, kızamıkçık, kızamık, tüberküloz, klamidya, frengi, mikoplazma, üreplazma, kandida, giardia ve hatta HIV gibi bulaşıcı hastalıkların patojenlerini tespit etmek;
• otoimmün hastalıkları teşhis eder. Özellikle, enzim immün testi sıklıkla tiroid hormonlarını incelemek için kullanılır: TSH, TG, T3 ve T4.

Teşhis amaçlarına ek olarak, araştırma tıbbi faaliyetlerinde enzim immünoassay yöntemi kullanılmaktadır.

Malzeme nasıl toplanır?

Çoğu durumda, analiz için venöz kan örneklemesi önerilir. Malzemenin çalışma için işlenmesinden ve hazırlanmasından sonra, kan serumu veya plazmanın enzime bağlı bir immünosorban tahlili gerçekleştirilir.

Hormon panelinin incelenmesi özel dikkat gerektirir, çünkü bu durumda malzeme numunesinin özelliklerini dikkate almak son derece önemlidir. Örneğin, bir kadının üreme sistemindeki hormonların çoğunun teşhisi, adet döngüsünün belirli günlerinde venöz kan alınmasını gerektirir. Bir dizi başka hormon dış faktörlerden etkilenir: mevsimsellik, günün saati, hastanın psikolojik durumu ve çok daha fazlası. Belirli faktörleri hesaba katmadan, hastalığın alevlenmesine veya yanlış reçete edilen tedaviye yol açacak yanlış bir sonuç alabilirsiniz.

Bazı, daha sıklıkla komplike vakalarda, analiz için hamile bir kadının beyin omurilik sıvısı, vitreus sıvısı veya amniyotik sıvısı gerekebilir. Bu biyolojik materyallerin toplanmasına yönelik prosedürler belirli bir risk taşır, kontrendikasyonları ve iyileşme süresi vardır. Bu nedenle, böyle bir enzim immün testi sadece bir doktorun ifadesine göre ve profesyonel gözetimi altında yapılmalıdır. Bu durumda kod çözme özel tıbbi bilgi gerektirir ve biraz zaman alabilir.

Analiz için hazırlık

Enzim immunoassay, dış faktörler çalışmanın sonuçlarını etkilediğinden, tüm önerilere bağlı kalarak yapılmalıdır. Örneğin, sabahları aç karnına (sabah 11'den önce) venöz kan bağışı yapmak önemlidir. Malzemenin önerilen örneklemesinden 2 hafta önce, özellikle hormonal olanlar olmak üzere herhangi bir ilaç almayı bırakmanız gerekir. Çalışmadan birkaç gün önce, alkol ve yağlı yiyeceklerden uzak durmalı, ayrıca fiziksel aktivite, endişe ve stresi dışlamalısınız.

Sonuçların deşifre edilmesi

Enzim immün testinin sonuçlarının deşifre edilmesi, yukarıda açıklanan (IgG ve IgM) protein yapılarının (antikorlar) özellikleri hakkında özel bilgi gerektirir. Bu veriler doğrultusunda araştırma göstergeleri analiz edilir. Tablo, analiz sırasında elde edilebilecek seçenekleri açıklamaktadır:

Sunulan tabloyu analiz ederek, çoğu durumda tanıyı doğrulamak için ek çalışmaların gerekli olacağı sonucuna varabiliriz. Enzim immunoassay tek başına kesin bir cevap veremez. Bu durumda normun net sınırları yoktur: G grubunun tespit edilen proteinleri, yalnızca vücudun önceden belirlenen patojen tarafından enfekte olduğunu gösterir. Ancak aynı sonuç, akut fazın varlığını da gösterebilir - doğru tanıyı koymak için birçok faktörü ve göstergeyi karşılaştırmak önemlidir.

Risk faktörleri

ELISA %90 doğrudur. Bununla birlikte, teşhis sonucunun bozulmasını etkileyen risk faktörleri vardır: ekipman arızası, uygun olmayan malzeme örneklemesi, depolama ve nakliye ve diğer dış faktörlerin ihmali.

analiz maliyeti

Teşhis çalışmasının maliyeti geniş bir yelpazeye sahiptir ve analiz tipine ve belirlenen antijene bağlıdır, çünkü bu faktörlere dayalı olarak reaktif kitlerinin maliyeti hesaplanır ve analizin karmaşıklığı belirlenir. Ancak çoğu durumda, enzim immunoassay birçok hasta için mevcuttur. Fiyatı 300 ruble. 2000 r'ye kadar.

ELISA, geniş bir hastalık listesini teşhis etmek için uygun fiyatlı, hızlı ve oldukça etkili bir yöntemdir. Ancak yalnızca kalifiye bir sağlık çalışanı, sonuçları deşifre etme ve teşhis koyma hakkına sahiptir.