Kupljeni so virološke študije o kliniki nalezljivih bolezni bolj pomembnoTo je predvsem posledica rasti specifične gravitacije virusnih okužb, katere klinika ni vedno tipična. Hkrati so hitre in zanesljive metode virološke diagnostike zasnovane za vse nalezljive bolezni, mnogi od njih so delovno-intenzivni, za njihovo ravnanje posebni pogojiEksperimentalne živali, Nutrične medije in usposobljeno osebje. Trenutno za diagnozo virusne okužbe Uporabite 3 glavne vrste raziskav.
1. Mikroskopska študija nalezljivega materiala za identifikacijo virusnega antigena ali patogenih sprememb v tkivih. V diagnostičnih namenih mikroskopski pregled Nalezljiv material iz bolnikov se uporablja z omejenim številom virusnih okužb (steklina, inšpekcija vetra, rumena mrzlica, herpes itd.). Širša aplikacija je prejela metodo, ki temelji na odkrivanju virusnega antigena s fluorescenčnimi protitelesi. Metoda imunofluorescence je lahko zanesljiva le z jasnim izpolnjevanjem vseh tehničnih zahtev.
2. Virološke metode.
3. Serološke študije za določitev rasti protiteles pri dinamiki bolezni. Serološke raziskovalne metode so bolj dostopne v laboratorijskih pogojih.
Za te študije je potrebno vzeti serum v ostrih obdobjih bolezni in v času konkretacije (seznanjeni serumi). Vzorci krvi serološke študije So sterilne brez antikoagulantov in konzervansov.
Glavne faze viroloških študij so izbor virusov, njihova identifikacija, značilnosti osnovnih bioloških lastnosti. Da bi dodelili različne skupine virusov, trenutno ni enotne tehnike. To je predvsem posledica raznolikosti njihovih lastnosti in značilnosti gojenja zunaj telesa gostitelja. BIOSUBSTATS se uporabljajo za raziskave (izpere iz sluznice, krvi in \u200b\u200bnjegovih komponent, hrbtene tekočine, urina in blata, organskih biopsij in tkiv, ali njihovih kosov v obkupu), ki so podvrženi posebni predelavi z naknadnim prehodom materiala. Za raziskovalno gradivo je treba shranjevati pri temperaturah od -20 ° C do -70 ° C. Glede na predhodno diagnozo je obdelava gradiva lastne značilnosti, vendar se v vseh primerih domneva, da pridobi substrat, ki se maksimalno očisti iz nečistoč sluzi, organov organov in tkiv ali fragmentov, bakterij. To se doseže s homogenizacijo gradiva v študiji v posebnem aparatu ali drgnjenje v porcelan malto v hladnem s kremenim steklom (kosov organov in tkiv) z dodatkom sterilne hlajenega (+4 c) 0,9 %
raztopina natrijevega klorida za pridobitev 10-30% suspenzije in naknadno centrifugiranje pri 1500-3000 vrt / min za 10-15 minut. Tako dobljeni supernatant se uporablja za izvajanje nadaljnjih raziskav.
Prej intenzivni razvoj In uvedba metode kulture tkiv in celic v široko zdravnika je bila uporabljena za okužbe eksperimentalne živali ali piščančjih zarodkov. Te metode se uporabljajo tudi zdaj. Odkrivanje virusov, ki uporabljajo živali, je najprimernejše v primerih, ko je mogoče reproducirati tipično sliko v poskusu nalezljiva bolezen ali ločene manifestacije. Tako se lahko patogeni skupine arbovirusov in kosov zaznamo v okužbo v možgane setev miši, gripe - pri okuževanju piščančjega zarodka ali intranazalnega dajanja materiala v študiju, miši v študiju. V viroloških laboratorijih, v zadnjih letih, se je metoda celične kulture in tkiva najpogosteje uporabljena, kar omogoča poudarjanje adenovirusov, herpes virusov, respiratory sinktivitnega virusa, mešanje in druge in v prvih fazah študije, da izvede etiološko diagnozo bolezni. Osnova za to je dobro preučevana citološke značilnosti interakcije večine virusov in celic. Torej, okužba HELA celic, NOR-2 material, ki vsebuje 2.-tipa adenovirus, že na 3. dan vodi do spremembe narave rasti celičnega monolarja in na videz tipičnih celic v obliki grozdja Zaključki, itd, dobro opredeljeni v običajnem lahkem mikroskopu z majhno povečavo.
Izjemna vrednost za etiološko diagnozo nalezljive bolezni je standardizacijo sproščanja virusa iz gradiva v študiji, ki na tej stopnji dela pomeni uporabo gensko čistih linearnih živali, pri čemer je treba upoštevati njihovo fenotipsko (predvsem starost. Povezane). To je predvsem posledica dejstva, da eksperimentalne živali različnih genetskih linij in starosti različne stopnje Dojemajo virusi. Tako, ko se je intracerebralna okužba z miši nevrotropno sev WSN influenza virus v živalskih progah BALL / C BALL BALL / C, A, CBA in BOONEOUS občutljivost izkazalo, da je največja, je bil isti vzorec ustanovljen v primeru intranazalnega dajanja materiala v študiji. Bistvena vrednost za končni rezultati Dela na sproščanju virusov ima predhodno preučitev živali, piščančjih zarodkov, celičnih kultur in tkiv za predmet latentnih virov. Piščančji zarodki, ki se uporabljajo v laboratorijske prakse, se lahko okužijo z virusi ptičja leukoza, ptičje encefalomilitisom, nalezljivi sinusitis, psihotokoso, atipično kokošjo kubok, vzročno uslužbenci nekaterih bakterijskih okužb (paratiph, itd), kot tudi mikoplazma. Še več. Bakterijska in zlasti virusna sredstva lahko spontano okužijo celične kulture in tkanine in izkušnje v njih. Njihova prisotnost znatno vpliva na oceno gradiva v študiji. Nekatere vrste mikoplazme v celični kulturi
Kondicioniranje hemaglutinacije in hemadsimbracije ter celo oblikujejo plakete pod agarskim premazom, podobnim oblikovanim virusom. Pomemben pomen je tudi onesnaževati celične kulture ene vrste, ki jih drugi, je najpogosteje posledica Hella celic in je opaziti pri delu z različnimi vrstami pridelkov v eni sobi, s slabo predelavo laboratorijskih jedi in drugih. Prisotnost Kontaminacija celičnih kultur ali okužbo z živalmi z bakterijskimi sredstvi, saj se pravilo zelo jasno izraža (sprememba narave rasti monolaških celic, lastnosti kulturnega medija, smrt piščančjega zarodka ali živali z določenimi simptomi, itd.) In ni posebnih težav pri ocenjevanju rezultatov. To je bolj zapleteno z vprašanjem latentnih oblik okužbe, kjer je potrebna uporaba seroloških in drugih metod. Ta navodila je treba upoštevati pri delu virusoda, zlasti pri izvajanju etiološke diagnoze nejasnih primerov bolezni.
Metode viroloških raziskav
metode za proučevanje biologije virusov in njihovo identifikacijo. Virologija je široko uporabljena metoda molekularne biologije, s pomočjo, katere molekularna struktura virusnih delcev je uspelo vzpostaviti molekularno strukturo, metode prodiranja v celico in posebnosti reprodukcije virusov, primarna struktura virusnih nukleinskih kislin in beljakovine. Metode določanja zaporedja elementov sestavnih delov virusnih nukleinskih kislin in beljakovinskih aminokislin se razvijajo. Možno je povezati funkcije nukleinskih kislin in beljakovin, kodiranih z nukleotidnim zaporedjem in vzpostaviti vzroke znotrajceličnih procesov, ki imajo pomembno vlogo v patogenezi virusne okužbe.
Virološke raziskovalne metode temeljijo tudi na imunoloških procesih (interakcija antigena s protitelesa), biološke lastnosti virusa (sposobnost hemolglutinacije, hemolize, encimske aktivnosti), značilnosti interakcije virusa z gostiteljsko celico (narava citopatski učinek, tvorba znotrajceličnih vključkov itd.).
Pri diagnozi virusnih okužb, pri gojenju, izolaciji in identifikaciji virusov, se pogosto uporablja metoda kulture tkiva in celic. Z uporabo osnovnih, sekundarnih, stabilnih prevedenih in diploidnih celičnih kultur. Primarne pridelke dobimo z razprševanjem tkiva z proteolitičnimi encimi (tripsin, kolagenaza). Vir celic je lahko tkanine in organe (pogosteje kot ledvice) človeške in živalske zarodke. Suspenzija celic v hranilni vrednosti je nameščena v tako imenovane vzmetnice, steklenice ali petrijeve jedi, kjer se po pritrditvi na površino plovila začnejo množiti. Za okužbo, virusi običajno uporabljajo monolarje celic. Hranilna tekočina se vlije, v nekaterih razredčitvah uvede virusno suspenzijo in po stiku z celicami dodamo svež hranilni medij, običajno brez seruma.
Celice večine primarnih pridelkov se lahko dajo, takšna kultura se imenuje sekundarna. V nadaljnjem prehodu celic se oblikuje populacija fibroblastnih celic, ki so sposobna hitro razmnoževati, večina ki ohranja izvirni kromosomski komplet. To so tako imenovane diploidne celice. S serijsko gojenjem celic se pridobijo stabilne celične kulture. Prehodi se pojavijo hitro razdeljene homogene celice s heteroplaidnim kompletom kromosomov. Stabilne celične linije so lahko enolest in suspenzija. Enoslojne rastline rastejo v obliki trdnega sloja na površini stekla, suspenzije - kot suspenzije v različnih plovilih z mešalnimi napravami. Obstaja več kot 400 celičnih linij, pridobljenih iz 40 različne vrste Živali (vključno z primatami, pticami, plazilci, dvoživki, ribami, žuželkami) in moškim.
V umetnih hranilnih medijih je možno gojiti koščke posameznih organov in tkiv (organirske kulture). Te vrste kultur obdržijo strukturo tkiva, ki je še posebej pomembna za dodeljevanje in prehod virusov, ki niso reproducirani v nediferenciranih kulturah tkiv (na primer koronavirusi).
Pri okuženih celičnih kulturah se virusi lahko zaznajo s spreminjanjem morfologije celic, citopatskega učinka, ki je lahko določena narava, videz vključkov, z določitvijo virusnih antigenov v celici in v tekočini kulturi; vzpostavitev bioloških lastnosti virusnega potomstva v kulturni tekočini in titraciji virusov v kulturi tkiva, piščančjega zarodka ali na občutljive živali; Z identifikacijo posameznih virusnih nukleinskih kislin v celicah z molekularno hibridizacijo ali grozdi nukleinskih kislin s citochmic metoda z uporabo fluorescenčne mikroskopije.
Izbor virusov je dolgotrajen in dolgoročen proces. Izvaja se, da bi določili kroženje med populacijo tipa ali različice virusa (na primer, da se identificira virus virusa influence, divjega ali cepiva proti virusu, itd.); V primerih, ko je to potrebno za nujne epidemiološke ukrepe; Ko se pojavijo nove vrste ali variante virusov; Po potrebi potrdite predhodno diagnozo; Označiti viruse v predmetih ambient.. Ko je virus izoliran, upoštevajo možnost vztrajnega v človeškem telesu, kot tudi pojav mešane okužbe, ki jo povzročata dva in več virusov. Gensko homogeno populacijo virusa, pridobljenega iz enega viriona, se imenuje virusni klon, proces pridobivanja pa je kloniranje.
Za izbor virusov, okužbe dovzetnih laboratorijskih živali, se uporabljajo piščančji zarodki, vendar se tkivna kultura najpogosteje uporablja. Prisotnost virusa se običajno določi s posebnimi degeneracijami celic (citopatski učinek), tvorba simplastov in sicitov, odkrivanje intracelularnih vključkov, kot tudi poseben antigen, ki ga zazna metode imunofluorescence, hemadsorpcije, hemaglutinacije (v hemaglutiziranju virusov ) itd. Ti znaki se lahko zaznajo šele po 2-3 prehodih virusa.
Da bi poudarili številne viruse, kot so virusi gripe, piščančji zarodki, da bi poudarili nekateri virusi koksa in številne arboviruse - novorojenčke miši. Identifikacija izbranih virusov se izvaja z uporabo seroloških reakcij in drugih metod.
Pri delu z virusi se določi njihov titer. Titracija virusov se običajno izvaja v kulturni kulturi, ki določa največjo razredčenje tekočine, ki vsebuje virus, v kateri se pojavi degeneracija tkiva, in nastanejo virusne antigene. Če želite titrirati številne viruse, lahko uporabite metodo plaž. Plaketi ali negativne kolonije virusov, so žarini, ki jih uničuje virus celic enoslojne kulture tkanine pod agarskim premazom. Štetje kolonij vam omogoča, da porabite kvantitativna analiza Nalezljiva aktivnost virusov po stopnji izračuna je, da en nalezljiv del virusa tvori eno ploščo. Plakete se odkrijejo z obarvanjem kulture z vodovodnimi barvami, ponavadi nevtralna rdeča; Plaketi ne adsorbirajo barvila in zato vidni kot lahkimi točkami na ozadju slikanih živih celic. Titer virusa je izražen s številom belilnih enot v 1 ml..
Čiščenje in koncentracija virusov se običajno izvaja z diferencialnim ultracentrifugiranjem, sledi centrifugiranje v koncentracijskih gradientih ali gostoti. Imunološke metode, kromatografija ionske izmenjave, imunosorbenti itd. Uporabljajo se za čiščenje virusov.
Laboratorijska diagnostika virusnih okužb vključuje odkrivanje patogena ali njegovih sestavnih delov v kliničnem snovi; izbor virusa iz tega materiala; Serodiagnostik. Izbira laboratorijske diagnostične metode v vsakem posameznem primeru je odvisna od narave bolezni, obdobja bolezni in možnosti laboratorija. Sodobna diagnoza Virusne okužbe temeljijo na izrecnih metodah, ki vam omogočajo, da prejmete odgovor nekaj ur po kliničnem materialu zgodnji roki Po bolezni, vključuje elektronsko in imunsko elektronsko mikroskopijo, kot tudi imunofluorescence, molekularno hibridization metodo, odkrivanje protiteles razreda LGM et al.
Elektronska mikroskopija virusov, ki jih pogleda negativni kontrast, omogoča razlikovanje virusov in določanje njihove koncentracije. Uporaba elektronske mikroskopije pri diagnozi virusnih okužb je omejena na tiste primere, ko je koncentracija virusnih delcev v kliničnem snovi dovolj visoka (10 5 v 1 ml.in višje). Pomanjkljivost metode je nezmožnost razlikovanja virusov, ki pripadajo eni taksonomski skupini. Ta pomanjkljivost se izloča z uporabo imunske elektronske mikroskopije. Metoda temelji na tvorbi imunskega kompleksa pri dodajanju posebnih serumov v virusne delce, medtem ko se koncentracija virusnih delcev pojavi, kar vam omogoča, da jih identificirate. Metoda se uporablja tudi za odkrivanje protiteles. Zaradi hitre diagnostike, elektronske mikroskopske študije ekstraktov tkiva, iztrebkov, tekočin iz veziklov, se izvedejo skrivnosti iz Nazofaringa. Elektronska mikroskopija se široko uporablja za preučevanje morfogeneze virusa, njene zmogljivosti se razširijo, ko označena protitelesa.
Postopek molekularne hibridizacije, ki temelji na identifikaciji nukleinskih kislin, specifičnih za virus, omogoča odkrivanje posameznih kopij genov in stopnja občutljivosti je nepomembna. Reakcija temelji na hibridizaciji dopolnilnih preje DNK ali RNA (sonde) in tvorbo veznih struktur. Najcenejša sonda je klonirana rekombinantna DNA. Sonda je izdelana z radioaktivnimi predhodnimi sestavinami (običajno radioaktivni fosfor). Perktivno uporabite kolorimetrične reakcije. Obstaja več variant molekularne hibridizacije: točka, blot hibridizacija, sendvič hibridizacija, hibridizacija in-situ itd.
Protitelesa razreda LGM se pojavijo prej kot protitelesa razreda G (na 3-5-dnevu bolezni) in izginejo v nekaj tednih, zato njihova odkritost kaže samo na okužbo. Protitelesa razreda LGM zaznamujejo imunofluorescence ali z uporabo ennuno-imunimalne analize z uporabo anti-μ-antiserumov (serum proti težkih verigah LGM).
Serološke metode v virologiji temeljijo na klasičnih imunoloških reakcijah (glej imunološke raziskovalne metode) : Dopolnitev vezavnih reakcij, hemaglutinacije, biološka nevtralizacija, imunoDiffusion, posredna hemaglutinacija, radialna hemoliza, imunofluorescenca, imunoformmalna analiza. Razvita so bile mikromete številnih reakcij, ki jih nenehno izboljšujejo. Te metode se uporabljajo za identifikacijo virusov z uporabo znanih serumov in za serodiagnostike, da bi določili rast protiteles v drugem serumu v primerjavi s prvim (prvi serum prve dni po bolezni, drugi - po 2-3 tednov). Diagnostična vrednost nima nič manj kot štirikratna povečanja protiteles v drugem serumu. Če odkrivanje protiteles razreda LGM označuje nedavno utrpelo okužbo, se za več let ohranjene protitelesa razreda LGC in včasih življenja.
Za identifikacijo posameznih antigenov virusov in protiteles jim v kompleksnih mešanicah brez predhodnih čistilnih beljakovin se uporabljajo imunoblotike. Metoda združuje frakcioniranje beljakovin z uporabo elektroforeze v poliakrilamidnem gelu, ki mu sledi imuno-dajanje beljakovin z metodo encimskega imunoasay. Ločitev beljakovin zmanjšuje zahteve za kemično čistost antigena in vam omogoča, da prepoznate posamezne pare antigena - protitelesa. Takšna naloga je pomembna, na primer, v serodiagnozi okužbe z virusom HIV, kjer so napačne pozitivne reakcije imunsko-immimenzionalne analize posledica prisotnosti protiteles do celičnih antigenov, ki so prisotni zaradi nezadostnega čiščenja virusnih beljakovin. Identifikacija protiteles v serumskih bolnikih do notranjih in zunanjih antigenov virusov omogoča določitev faze bolezni, in pri analizi populacij - variabilnost virusnih beljakovin. Imunobrotina za okužbo s HIV se uporablja kot potrditveni preskus za identifikacijo posameznih virusnih antigenov in protiteles. Pri analizi populacij se metoda uporablja za določanje variabilnosti virusnih beljakovin. Večja vrednost metode je možnost analiziranja antigenov sintetiziranih z uporabo tehnologije rekombinantne DNA, vzpostavitve njihove velikosti in prisotnosti antigenskih determinant.
Virološke študije so študije, namenjene poudarjanju virusov in preučevanju njihovih lastnosti, pa tudi vzpostavitev etiološke komunikacije virusov z določenimi boleznimi.
Študijski material je zaprt, odvisno od kraja predhodnih virusov v telesu bolnika in na poti njihovega dodelitve v zunanje okolje. Material je sestavljen v sterilne jedi, kolikor je to mogoče, je dostavljen v laboratorij in je shranjen, dokler študija ni zamrznjena ali na ledu. Pred uporabo se material za izbor virusov predeluje (-i), da prepreči tujo mikrofloro in je izpostavljen odstranitvi velikih delcev.
Sprostitev virusov se izvaja z okužbo z materialom, ki vsebuje virus, laboratorijskih živali, piščančjih zarodkov, tkivnih kultur. Izbira metode izpusta je odvisna od predvidenega patogena bolezni. Tako se tkivne kulture (glej) uporabljajo pri delu z virusi, ne patogeni za laboratorijske živali, ali ko je tkivna kultura odkrita prej kot pri okužbo z živalmi. Piščančji zarodki so okuženi, da označijo patogene, nalezljive pare (v amortični in alantični votlini), (v rumenjaki vrečki), majhno kogi (na chorionals lupini).
Iz laboratorijskih živali, da bi poudarili viruse, se najpogosteje uporabljajo bele miši, nato pa kunci, podgane, morski prašički, opice. Za arboviruse, uvedbo materiala, ki vsebuje virus, v glavo ali, za pnevmatske viruse - na sluznici dihal, za viruse majhnih kos, - na rubriko.
Izbor virusov je najbolj učinkovito v akutnemu obdobju bolezni. Bistveni trenutek pri vzpostavitvi virusne narave bolezni je rezultat serumskih študij, ki so bili ponovno sprejeti od istega pacienta na začetku bolezni in med obdobjem konkonvizacije. Odkrivanje protiteles do izbranih virusov v drugem serumu v titru 4 ali večkrat več kot v prvem, označuje etiološko povezavo med virusi s to boleznijo.
Zgodaj I. hitra metoda Odkrivanje virusnih antigenov je metoda fluorescenčnih protiteles, ki temeljijo na posebni pritrditvi protiteles, označenih s fluorokromi na površini antigena. Antigen se zlahka zazna z luminescenčno mikroskopijo (glej) zaradi svetle fluorescence adsorbirane na antigenu antigena. Metoda fluorescenčnih protiteles raziskuje madeže, vzete od bolnikov, histoloških odsekov prizadetih tkiv, pripravki iz tkivne kulture. Za zaznavanje osnovnih telet (virionov), ki se uporabljajo tudi (glej). Od drugih morfoloških metod, tiste, ki razkrivajo intracelularni virus vključkov v oddelkih prizadetih organov in tkiv se uporabljajo. Odkrivanje vključkov označuje okužbo in v nekaterih primerih prispeva k diagnozi virusne bolezni. Za odkrivanje protiteles virusov v krvi bolnikov in različnih virusov se uporabljajo za preučevanje antigenske strukture virusov. Reakcija nevtralizacije se uporablja v skoraj vseh virusnih okužbah. Temelji na zmožnosti imunskih protiteles, da nevtralizirajo nalezljive lastnosti virusov, ko se zmes uvede v organizem dovzetnih živali ali v kulturi tkiv. Za določitev nevtralizacijskega indeksa se trajni odmerek seruma pomeša z različnimi vzrejo virusov in določi titer protiteles - različne razredčitve seruma s trajnim odmerkom virusov. Nadzor je onesnaženje živali (ali tkivnih kultur) z mešanico virusov z normalnim serumom ali z sALINE.. Reakcija nevtralizacije ni samo za odkrivanje protiteles, ampak tudi za določitev vrst in vrste virusov.
Dopolnitev zavezujočega odziva [na primer, Bordean-Gengu reakcija (glej)] se uporablja za identifikacijo virusnih antigenov in protiteles. V prvem primeru, očitno znani imunski serum medsebojno vpliva na reakcijo in material, v katerem se predpostavlja prisotnost antigenov: krvni serum, nazoklorični pranje, ekstrakti tkanin okuženega organizma. V drugem primeru, očitno znani antigen (diagnoza) in bolni ali rekonstrukcijski serum.
RSK se uporablja za diagnosticiranje bolezni, ki jih povzročajo virusi gripe, majhnih koz, adenovirusov in arbovirusa.
V laboratorijska diagnostika Virusne okužbe imajo tri glavne pristope
1) neposredno študij materiala za prisotnost virusnega antigena ali nukleinskih kislin;
2) izolacija in identifikacija virusa iz kliničnega materiala;
Neposredne metode za diagnosticiranje kliničnega materiala
Neposredne metode so metode, ki vam omogočajo odkrivanje virusa, virusnega antigena ali virusne nukleinske kisline (NK) neposredno v kliničnem snovi, to je najhitrejši (2-24 h).
Elektronska mikroskopija (EM). S to metodo lahko zaznate dejanski virus.
imunska elektronska mikroskopija (IEM), v kateri se uporabljajo posebna protitelesa za viruse. Zaradi interakcije protiteles z virusi se oblikujejo kompleksi, ki so lažje po negativnih kontrastih.
Imunofluorescenčna reakcija (greben). Metoda temelji na uporabi protiteles, povezanih z barvilom
Metoda grebena se pogosto uporablja za hitro dešifriranje etiologije ostrih respiratornih virusnih okužb pri analiziranju dišavnih rok iz sluznice zgornjega dihalnega trakta.
Analiza imuno encim (ELISA). Imuno-imunimalne metode za določanje virusnih antigenov načeloma so podobni grebenu, vendar temeljijo na etiketi protiteles z encimi in ne barvila.
Radioimunska analiza (RIA). Metoda temelji na nalepki protiteles z radioizotrops, ki zagotavljajo visoko občutljivost pri določanju virusnega antigena.
Molekularne metode. Prvotno klasična metoda za identifikacijo virusnega genoma se je štela za zelo specifično metodo hibridizacije NK, vendar trenutno vse širše uporablja izbor virusnih genomov z uporabo polimeraze verižna reakcija (PCR).
Molekularna hibridizacija nukleinskih kislin. Metoda temelji na hibridizaciji dopolnilnih preje DNK ali RNA z tvorbo veznih struktur in na njihovo identifikacijo
PCR temelji na načelu naravne replikacije DNK. Bistvo metode je ponovitev sinteznih ciklov (ojačanje) specifične DNA zaporedja virusa s pomočjo toplotnega stabilnega TAQ DNA polimeraze in dveh posebnih semen - tako imenovanih primerov.
Citološke metode imajo trenutno omejeno diagnostično vrednost, vendar je treba v številnih okužbah še treba uporabiti. Preučijo se materiale za obdukcijo, biopsijo, poteze, ki so po ustrezni obdelavi pobarvane in analizirane pod mikroskopom.
Za uspešno izdajo virusa klinični material Je treba sprejeti v skladu s patogenezo predvidene bolezni in čim prej.
Značilno je, da:
- v respiratornih okužbah - nazofalne plavuti;
- z enterovirusnimi okužbami - pranje in iztrebkom (re-, enterovirusi);
- s lezijami kože in sluznic - cink, vsebina mehurčkov (herpes, norice);
- med preskusnimi okužbami - pranje (ošpic, rdečka);
- z arbovirusnimi okužbami - kri, hrbtena tekočina.
Celične kulture, laboratorijske živali, piščanci zarodki se uporabljajo za sprostitev virusov. Postopek je dolg, včasih zahteva več prehodov, preden je virus zaznan in identificiran z enim ali več metodami - v nevtralizacijski reakciji (PH), greben, IFA ali PCR.
Serodiagnostic
Serološka diagnostika, ki temelji na reakciji antigena-protitelesa, se lahko uporabi za določitev tako oboje, in igra vlogo pri določanju etiologije virusne okužbe tudi, ko negativni rezultati Dodelitev virusov.
RSK je ena od tradicionalnih seroloških reakcij in se uporablja za diagnosticiranje številnih virusnih okužb. Dva sistema sta vpletena v reakcijo: protitelesa serumskih protiteles bolnika + standardnih virusov in rdečih krvnih celic + protiteles, kot tudi upokojeni dopolnilo. V skladu s protitelesa in virusom ta kompleks veže dopolnilo in lizo jagnječje eritrocitov ne pride do (pozitivna reakcija). Z negativnim RSK, dopolnilo prispeva k lizo rdečih krvnih celic. Pomanjkljivost metode je njena nezadostno visoka občutljivost in težava standardizacije reagentov. Metoda AIF kot tudi ELISA se uporablja za določanje serumskih protiteles.
Študije za diagnosticiranje bolezni z virusno naravo. Treba je identificirati virus, študirati svojo biologijo in zmožnost vplivanja na živalske in človeške celice. Tako je mogoče razumeti patogenezo virusne bolezni In s tem izberite postopek za zdravljenje.
Kaj je diagnoza?
V živih celicah. Če ga želite raziskati, je treba gojiti na ravni eksperimentalnega telesa ali za to v medicinski praksi in mikrobiologijo kot celote, se izvajajo virološke raziskovalne metode, ki imajo naslednje glavne pristope:
- naravnost;
- posredna;
- serološki.
Material se lahko preuči neposredno na prisotnosti nukleinskih kislin, virusnega antigena ali, na primer izolirati in identificirati virus iz kliničnega materiala.
Poleg sposobnosti vzpostavitve etiologije bolezni, spremljanje terapevtskega učinka, so virološke raziskovalne metode igrajo veliko vlogo pri antiepidemičnih dogodkih. Za izolacijo in uporabo piščančjega zarodka, laboratorijskih živali ali celičnih kultur.
Kako raziskati?
Najhitrejša je neposredna metoda. Omogoča vam odkrivanje virusa, antigena ali NC (nukleinske kisline) v kliničnem snovi. Potreben je čas od dveh ur pred dnevom.
- Electronska mikroskopija. Neposredno zazna virus.
- IEM je imunska elektronska mikroskopija. Za viruse uporablja posebna protitelesa.
- Reaf - imunofluorescenčna reakcija. Uporabite protitelesa, povezana z barvilom. Takšne virološke raziskovalne metode se pogosto uporabljajo kot hitra dešifriranje etiologije Arvija (akutne respiratorne virusne okužbe), pri tapniranju dama iz sluznice zgornjega dihalnega trakta.
- ELISA je imunskoasimenzionalna analiza - opredelitev virusnih antigenov, podobno kot greben, vendar temelji na mešanici encimov protitelesja.
- RIA - Radioimunska analiza. Uporablja nalepko protiteles z radioizotrops, da se zagotovi visoko občutljivost pri določanju virusnega antigena.
- Molekularna - hibridizacija NC ali izoliramo genome virusa z uporabo PCR (verižna reakcija polimeraze).
- Citologija - redko se uporablja, vendar z nekaterimi okužbami so te virološke raziskovalne metode zelo učinkovite. Raziskani so materiali za biopsijo, obdukcijo in potezah, ki se obdelujejo, da bi se barvili in analizirali pod mikroskopom.
Kakšen je pomen raziskav?
Za uspešno dodeljevanje virusov se klinični material sprejme v skladu s patogenezo in čim prej. Pogosto ta proces zahteva več prehodov pred uporabo nekaterih viroloških raziskovalnih metod.
Mikrobiološke študije mikroskopska bitja. In njeno območje ni samo zdravilo. To je temeljna znanost za kmetijstvo, veterinarska, vesoljska in tehnična industrija, geologija.
Vsekakor pa je vse ustvarjeno za osebo in njen razvoj na tem čudovitem planetu. Zato je zelo pomembno, da se v času odkrije nevarnost in nevtralizira. Virusi se razlikujejo od bakterij. To so strukture, ki vstopajo v telo in povzročajo oblikovanje nove generacije. Podobno so kristali in so namenjeni upravljanju procesa njihove razmnoževanja, čeprav sami ne jedo, ne rastejo in ne dodelijo izmenskih izdelkov.
Virus lahko povzroči hudo bolezen od vseh živih organizmov, v katerem je dobil. Poleg tega se lahko razvije. Zato bi se morale razvijati in izboljševati virološke raziskovalne metode v mikrobiologiji, saj lahko ogrožajo človeško civilizacijo na splošno.
Materials.
Za odkrivanje in identifikacijo virusov v medicini praviloma sprejmejo:
- nASOOPLOTMER Pranje (okužbe dihal);
- pranje in iztrebkov ( enterovirus infekcije);
- lestvice, vsebina mehurčkov (lezije kože, sluznice, kot herpes, norice);
- pranje (testiranje okužb, kot je Cortex, rdečka);
- krva, hrbtena tekočina (okužbe arbovirus).
Faza
Vse faze metode virološke raziskave vključujejo:
- materialna ograja;
- izbira, prejemanje preskusnega sistema, ki določa njeno sposobnost preživetja;
- okužba preskusnega sistema;
- indikacija virusa;
- opredelitev vrste virusa.
V bistvu se patogeni virusi odlikujejo prisotnost tkiva in tipične specifičnosti. Vzemite, na primer, poliovirus, ki se reproducira le v primatih (v svojih celicah). Zato je treba poudariti določeno virusno uporabo določene tkivne kulture. Če govorimo o neznanem patogenu, bo priporočljivo istočasno okužiti tri in boljše štiri celične kulture.
Tako je eden od njih občutljiv. Da bi ugotovili prisotnost virusa v okuženih kulturah, si oglejte razvoj specifičnih celic degeneracija, intraceličnih vključkov, odkrivanje določenega antigena, pozitivne hemaglutinacije in hemadsorpcijske reakcije.
Vse virološke raziskovalne metode (neposredne in posredne, serološke) morajo biti izbrane kot najbolj primerne za določen primer predvidene okužbe.
Posredne metode temeljijo na dodelitvi in \u200b\u200bidentifikaciji virusa. So delovno intenzivne, dolge, vendar točne.
Serodiagnostic
V taki diagnostiki pomenijo metodo, ki temelji na reakciji protitelesa protitelesa antigena. Najpogosteje se uporabljajo serumi serumskih serumov, posnetih v nekaj tednih. Če povečanje titra protiteles v štirih in več časih, se reakcija šteje za pozitivno. Za določitev tipične specifičnosti virusa se uporablja virusna reakcija. Za določitev skupine likvidacije morate pridobiti zavezujoči odziv.
Za široko uporabo različne možnosti Analiza imunoperja, reakcija zaviranja hemaglutinacije, pasivna hemaglutinacija, inverzna pasivna hemaglutinacija, greben. Nazaj v genski inženiring, je bila razvita metoda za pridobitev monoklonskih protiteles. Možno je premagati ozko specifičnost monokonov z več monoklonskimi protitelesi na različne determinante virusa. Tako se je povečala specifičnost in občutljivost študije z opredelitvijo antigenov.
Nekatere funkcije
Danes je bilo ustvarjenih veliko različnih preskusnih sistemov za imunološko diagnostiko okužb, ki so nastale zaradi virusa v živem organizmu.
Tako so metode viroloških raziskovalnih metod za dodeljevanje virusov, preučevanje njihovih lastnosti in vzpostavitev njihove etiološke povezave z določenimi boleznimi.
