Moderné metódy diagnózy infekcie HIV. Použitím testu kombinovaného v diagnóze HIV, ktoré možno očakávať z výsledkov pre HIV

ELISA (imuno-imunimálna analýza, ELISA - Angličtina) vstúpila do života praktickej medicíny niekde v 60. rokoch minulého storočia. Počiatočná úloha bola histologické štúdie na vedecké účely, ktoré boli znížené na vyhľadávanie a identifikáciu antigénnej štruktúry buniek živých organizmov.

Metóda IFA je založená na interakcii špecifických (AT) a príbuzných antigénov (AG) s tvorbou komplexu antigén - protilátky, ktorá sa deteguje pomocou enzýmu. Táto skutočnosť sa stretla s vedcami za myšlienku, že tento spôsob môže byť použitý na diagnostiku na identifikáciu špecifických imunoglobulínov rôznych tried zapojených do imunitnej reakcie na jednu alebo inú infekciu. A bol to prielom v klinickom laboratórnej diagnostike!

Metóda sa začala aktívne používaná len na začiatku 80. rokov a to je hlavne v špecializovaných agentúrach. Prvé analyzátory imunofementov boli vybavené centrámi a stanicami transfúzie krvi, infekčnými a venereologickými nemocnicami, pretože sa narodil v africkom kontinente, ktorý sa objavil na obzore, a okamžite sa pripojil k "starej" infekciám impozantných pomôcok, požadoval okamžité diagnostické opatrenia a Vyhľadávanie terapeutických liekov postihujúcich jeho.

Rozsah metód ELISA

Možnosti imuno-imumulácie analýzy sú skutočne rozsiahle. Teraz je ťažké si predstaviť, ako môžete urobiť bez takýchto štúdií používaných doslova vo všetkých sektoroch medicíny. Zdá sa, že IFA môže urobiť v onkológii? Ukazuje sa, že možno. A veľa. Schopnosť analyzovať markery, charakteristické pre určité druhy malígnych neoplazmov, je základom včasnej detekcie nádoru, keď ešte nie je určená iným spôsobom vďaka svojej malej veľkosti.

Moderná klinická laboratórna diagnostika (CDL), s výnimkou nactieračiek, má významné arzenálne panely pre ELISA a používa ich na diagnózu rôznych patologických stavov (infekčných procesov, hormonálnych porúch) a monitorovanie farmaceutických lekárskych prípravkov s cieľom identifikovať ich vplyv na pacienta a mimochodom, nielen osobou. V súčasnosti je imunoassimenčná analýza široko používaná vo veterinárnej službe, pretože "naši menší bratia" podliehajú aj mnohým chorobám, ktoré niekedy trpia veľmi veľa.

Touto cestou, ELISA, vďaka svojej citlivosti a špecificite, podľa vzorky krvi odobratého z žily, môže určiť:

• Hormonálny stav (hormóny štítnej žľazy a nadobličky, pohlavné hormóny);
• Prítomnosť vírusovej a bakteriálnej infekcie (HIV, B a C, CHLAMYDIA, SEFILIS, A ALEBO AKO MNOHO MOŽNOSTI OPATRÁVANÝCH OPATRENÍCH spôsobené patogénnymi mikroorganizmami);
• Stopy vitálnej aktivity mikroorganizmov, ktorí vzbudili infekčný proces, ktorý bol bezpečne ukončený a prepnutý do stupňa tvorby imunitnej reakcie na tento patogén. Takéto stopy, to znamená, že protilátky, v mnohých prípadoch zostávajú rozoslané v krvi pre život, než ochrana osoby pred re-infekciou.

Aká je podstata IFA?

Imumulmálna metóda umožňuje určiť nielen prítomnosť samotného patogénu (vysoko kvalitná analýza), ale aj jeho kvantitatívny obsah v sére pacienta.

Vírus alebo bakteriálna dávka významne ovplyvňuje priebeh infekčného procesu a jeho výsledok, takže kvantitatívna analýza je priradená nie je poslednou úlohou pri diagnostike a liečbe chorôb v rôznych formách a etapách.

Avšak, poznávanie imunozmenivých štúdií, ako metóda IFA, ani nemyslíme na to, ako sa riadi pokryť taký širokú škálu mikroorganizmov, ktoré obývajú naša planéta, z ktorých mnohí nesú priame ohrozenie zdravia a života človeka a zvierat . A skutočnosťou je, že ELISA má mnoho možností (nekonkurencieschopné a konkurencieschopné - priame a nepriame), z ktorých každý rieši svoju úlohu, a teda umožňuje cieľové vyhľadávanie.

Na identifikáciu imunoglobulínov jednej alebo inej triedy sa použije tradičný 96-jamkový polystyrénový panel (tableta), v jamkách, z ktorých scorbed rekombinantné proteíny sa koncentrujú v tuhej fáze. A protilátka alebo sérum antigénu alebo antigén, ktorý spadol do prehľadnej protilátky, nájsť "známy" objekt a tvoria komplex s ním (AG-AT), ktorý je zverený konjugátu enzýmu, pri čítaní výsledkov sa prejavuje zmena farby jamky.

Imunoassimenčná analýza sa vykonáva na skúšobných systémoch určitej špecifickosti, vyrobené v špeciálnych laboratóriách a vybavené všetkými potrebnými reaktívnymi komponentmi. Štúdie môžu byť vykonané pomocou právomocí práčok ("Voshor") a spektrofotometre na čítanie, kde sa zúčastňuje manuálna práca. Na plných automatických strojoch, nosenie laboratórneho spôsobu z monotónnej instilácie, umývanie a iných rutinných prípadov, samozrejme, pracovať rýchlejšie a pohodlnejšie, ale nie všetky laboratóriá si môžu dovoliť taký luxus a naďalej pracovať na starom spôsobom - na semi- \\ t automatické.

Interpretácia výsledkov IFA je v právomoci lekára laboratórnej diagnostiky a je nevyhnutne zohľadnené a neodporúča takmer všetky imunochemické reakcie, aby poskytli falošne pozitívne alebo falošne negatívne odpovede.

Video: Moderná iMunačná analýza

IFA vedie k príkladu syfilisu

Immuno enzýmová analýza je vhodná na identifikáciu všetkých foriemOkrem toho sa používa v skríningovom výskume. Na analýzu sa používa venózna krv pacienta, pričom sa používa prázdny žalúdok. Papier používa tablety so špecifickou špecifickosťou (v triedach A, M, g) alebo celkových protilátok.

Vzhľadom na skutočnosť, že pri syfilise sa vyrába v špecifickej sekvencii, ELFA môže ľahko odpovedať na otázku, keď sa infekcia vyskytla a v ktorej štádiu je proces, a dekódovanie získaných výsledkov sa môže prezentovať v nasledujúcom tvare:

• IGM označuje trvanie infekčného procesu (môže sa objaviť pri zhoršovaní chronických zápalových ochorení);
• IgA uvádza, že infekcia sa stala viac ako pred mesiacom;
• IgG naznačuje, že infekcia je v plnom prúde alebo na nedávno liečbu, ktorá sa ľahko zistí pri zbere anamnézy.

Pri analýze syfilisu, jamky s negatívnou odozvou (a negatívnou kontrolou) zostanú bezfarebné, zatiaľ čo pozitívny výsledok (ako aj pozitívna kontrola) poskytne jasné žlté farbenie v dôsledku zmien vo farbe chrómogénu pridaného počas štúdie. Avšak, intenzita farby sa vždy nezhoduje s ovládaním, to znamená, že to môže byť trochu bledší alebo mierne žltkastý. Ide o pochybné výsledky, ktoré sú spravidla podliehajú opätovnému preskúmaniu povinným s prihliadnutím na kvantitatívne ukazovatele získané na spektrofotometri, ale vo všeobecnosti je farba v priamom proporcionálnej závislosti od počtu imunitných komplexov ( súvisiace AG a AT).

Najviac vzrušujúce analýzy imunobasay - IFA na HIV

Analýza, možno viac ako iné, je zaujímavé v širokej škále ľudí, pretože ešte nie je s istotou tvrdiť, že mnohé sociálne problémy zmizli (prostitúcia, drogová závislosť atď.). Bohužiaľ, HIV ovplyvňuje nielen tieto vrstvy ľudskej spoločnosti, je možné infikovať za rôznych okolností, ktoré nesúvisia so sexualizmom alebo príjmom liekov. Ale ak je to potreba pre prieskumy HIV vznikla, nemalo by sa báť, že všetci sa dozvedeli o návšteve takéhoto laboratória. Teraz sú ľudia infikovaní HIV chránení zákonom a pochybnosti môžu kontaktovať anonymné kancelárie, kde môžete problém vyriešiť bez strachu z publicity a odsúdenia.

Imumulová metóda použitá na diagnostiku infekcie HIV sa týka primárnych štandardných štúdií, ktoré však vyžadujú osobitné podmienky, pretože téma je veľmi jemná.

IFA na HIV dáva zmysel po sexuálnom kontakte, transfúzie krvi, iné lekárske manipulácie zahŕňajúce infekciu, a na konci inkubačnej doby ("séronegatívne okno"), ale treba mať na pamäti, že toto časové obdobie nie je konštantné. Môže ukončiť 14-30 dní a môže pokračovať až do šiestich mesiacov, takže interval od 45 do 90 dní je prijatá priemernou hodnotou. Pre HIV sa krv odovzdá rovnakým spôsobom ako iné infekcie - z Viedne na prázdny žalúdok. Výsledky budú pripravené v závislosti od akumulácie materiálu v laboratóriu a jeho pracovnom zaťažení (od 2 do 10 dní), hoci najčastejšie laboratórium poskytuje odpoveď v ten istý deň alebo nasledujúci.

Čo možno očakávať z výsledkov HIV?

IFA na infekcii HIV definuje protilátky proti dvom odrodám vírusu: HIV-1 (častejšie v Rusku a ďalších krajinách Európy a Ázie) a HIV-2 (sa vyskytujú častejšie na území západnej Afriky).

Úlohou IFA HIV je vyhľadávanie v triede G, ktoré sú zistené vo všetkých testovacích systémoch, ale v neskoršom období, a v triedach A a M, zistené na rekombinantných testoch novej generácie, čo vám umožní nájsť protilátky v Najskoršie stupne (inkubačné obdobie - "séronegatívne okno"). Z iFA môžete očakávať nasledujúce možnosti odpovede:

1. Primárny pozitívny výsledok: Krv sa podlieha presunu na skúšobnom systéme rovnakého typu, ale ak je to možné, ďalšia séria a iná osoba (laboratórny asistent);
2. Opakované (+) znamená nový príjem krvi u pacienta so štúdiou, ako je primárna analýza;
3. Ďalší pozitívny výsledok podlieha referenčnej analýze, ktorá využíva vysoko špecifické testovacie súpravy (2-3 ks);
4. Pozitívny výsledok v systémoch (alebo troch) systémov je odoslaný na imunoblotovanie (rovnaké ELISA, ale vyrobené individuálne pre testy špeciálnych špecifických sady).

Záver infekcie HIV sa vykonáva len na základe imunoblotovania. Vykonáva sa konverzácia s infikovaným v plnej dôvernosti. Zverejnenie lekárskeho tajomstva v Rusku, ako aj v iných krajinách, podlieha trestného trestania.

Analýzy na Chlamydia a cytomegalovírusu imumunitou metódou tiež získali konkrétnu popularitu, vzhľadom na to, že umožní určiť čas infekcie, štádium ochorenia a účinnosť terapeutických opatrení.

Pri zavádzaní môžete tiež pozorovať vzhľad protilátok rôznych tried. V rôznych fázach patologického stavu spôsobené infekčným činidlom:

• IGM môže byť objavený niekoľko dní po siedmich po infekcii;
• IGA hovoria, že infekcia v tele žila viac ako mesiac;
• IgG potvrdzuje diagnózu chlamydia, pomáha nasledovať liečbu a určiť jeho účinnosť. Treba poznamenať, že protilátky triedy G zostávajú a cirkulované v tele bez ohľadu na predpis ochorenia, preto riadne rozlúštiť analýzu, referenčné hodnoty (normy), ktoré pre každého KDL Ich vlastné sú: berúc do úvahy značku testovacieho systému a špecifickosť činidiel zahrnutých v súbore. Hodnoty normy zapadajú do prázdneho vedľa výsledku ELISA.

Pokiaľ ide o to, že je o niečo iné: Trieda M protilátky sa objavujú približne po mesiaci a polovicu, to znamená, že pozitívny výsledok (IGM +) sa stáva v primárnej fáze infekcie alebo pri reakcii skrytej infekcie a zostáva jeden od 4 mesiacov do šiestich mesiacov.

Prítomnosť v triede G je charakteristická pre spustenie primárnej akútnej infekcie alebo reinfekcie. Analýza uvádza, že vírus sa koná, však, že informácie sú, v ktorých je infekčný proces - nedáva. Medzitým definícia Titer IgG tiež spôsobuje ťažkosti, pretože záleží úplne na imunitný status konkrétnej osoby, ktorá je však stanovená identifikáciou imunoglobulínov triedy G. Vzhľadom na správanie protilátok, pri diagnostike CMWI , je potrebné posúdiť schopnosti triedy g protilátok, aby interakcia s CMV, potom "neutralizovať" (aviditou at). V počiatočnom štádiu je IgG ochorenie veľmi zle spojené s vírusmi antigénmi (nízka avidita) a potom sa začnú prejavovať aktivitu, je možné hovoriť o zvýšení avidity protilátok.

Môžete hovoriť o výhodách imunoformálneho analýzy na dlhú dobu a veľa, pretože táto metóda sa podarilo vyriešiť mnoho diagnostických úloh s použitím iba venóznej krvi. Už nepotrebujete dlhé očakávania, vzrušenie a problémy s plotom materiálu na štúdium. Okrem toho je testovací systém IFA naďalej vylepšený a deň nie je ďaleko od rohu, keď skúška poskytne 100% presnosť výsledku.

Video: MGMU Learning Film. Sechenov o základoch IFA

Patentový majitelia RU 2283497:

Vynález sa týka oblasti biotechnológie a medicíny. Systém testovania imunoarapátora na identifikáciu spektra protilátok k vírusu ľudskej imunodeficiencie (HIV) prvého a druhého typu, prvý typ skupiny O a detekciu antigénu na vírus ľudskej imunodeficiencie v prvom type P24 zahŕňa imunosorbent o antigénoch ľudskej imunodeficiencie vírus predstavujúce gp41 (env HIV-1 a HIV-2 skupiny o), GP120 (ENV), p24 (GAG), P31 (Pol), GP36 (ENV-2), protilátky proti antigénu HIV 1 p24 a detekčné činidlá, zatiaľ čo vyššie uvedené HIV antigény a HIV protilátky sorbitované v rôznych jamkách tabliet na enzýmový imunotest a 96-jamkové polystyrénové alebo neinmulárne dosky sa používajú na sorpciu. Vynález poskytuje zvýšenie citlivosti, zjednodušenia, eliminácie subjektivity hodnotenia výsledkov. 1 z.p. F-Lies, 10 Tab., 1 Il.

Vynález sa týka oblasti biotechnológie a medicíny. Použitie: diferencovaná detekcia všetkých tried špecifických protilátok proti ľudskej imunodeficiencie vírusové proteíny 1 a 2, HIV 1 skupinu O a antigén R24 HIV 1.

Essencia: Získanie imunoformálneho testovacieho systému na identifikáciu spektra protilátok všetkých tried na jednotlivé proteíny a HIV 1 a 2, HIV 1 skupinu O a antigén R24 HIV 1 v sére (plazma) krvi, imunoglobulínov a ľudských krvných prípravkov na účely Identifikovať spektrum protilátok proti HIV 1 a 2, HIV 1 skupine O, detekciu antigénu P24 HIV 1 a potvrdenie pozitívnych alebo pochybných výsledkov skríningu na protilátkach na HIV 1 a 2, HIV 1 skupinu O a antigén P24 HIV 1.

Popis vynálezu

Laboratórna diagnostika infekcie HIV je založená na troch smeroch: a) indikácia HIV a jej zložiek; b) Detekcia protilátok proti HIV; c) určovanie zmien imunitného systému. Medzi existujúce metódy laboratórnej diagnostiky sú najčastejšie sérologické - identifikácia protilátok proti antigénom vírusu.

Immunimenálna analýza (IFA) a imunoblotovanie (Ib) sa používa hlavne na identifikáciu protilátok v infekcii HIV. V srdci ELISA leží imobilizácia vírusových antigénov na tabletách, s ktorými sú pacientove protilátky spojené, a antigén antigén komplex sa deteguje použitím myšej protilátky konjugovanej s peroxidázou na imunoglobulíny g a človeka. Metóda je celkom špecifická a citlivá a umožňuje identifikovať vírusové protilátky u 95% pacientov. Zvyšných 5% prípadov spadajú na skoré štádiá infekcie, keď sú sérové \u200b\u200bprotilátky sú stále malé alebo terminálne fázy ochorenia, keď telo už nie je schopné syntetizovať protilátky v dôsledku prudkej deplécie imunitného systému. Je tiež možné falošne pozitívne výsledky ELISA, najmä u pacientov s autoimunitnými a onkologickými ochoreniami, ako aj v infekcii spôsobenej vírusom Ahophliadky Barr. Zároveň existuje krížová reakcia protilátok proti reumatoidnému faktoru, vírusu epstein-Barr, alebo antigénne determinanty, podobne ako proteíny hlavného histokompatibilného komplexu 1 a 2 triedy (HLA-4 a DQW3) a s Schopnosť komunikovať s HIV antigénmi. Falošné pozitívne výsledky sú často pozorované u gravidných žien a starších ľudí. Hemolýza, lipemia, znečistenie baktérií môže tiež spôsobiť nespoľahlivé výsledky.

V tejto súvislosti sa navrhuje množstvo metód a používa sa na overenie špecifickosti výsledkov detekcie protilátok. Z týchto metód sa reakcia "imunitný blot" najčastejšie používa v úprave "Western blot". Essencia spôsobu je nasledovná: V prvej fáze sa vyrába separácia proteínov HIV na molekulovú hmotnosť s použitím elektroforézy v polyakrylamidovom géli. Potom sa vykonáva elektroforetický prenos z polyakrylamidového gélu na povrch nitrocelulózovej membrány. Antigény prenesené týmto spôsobom sa detegujú na membráne s použitím nepriamej analýzy: membrána sa inkubuje so špecifikovaným materiálom; Protilátky sú spojené s HIV antigénmi prenesenými do nitrocelulózovej membrány, potom sa membránové pásy inkubujú s konjugátom; Keď je vytvorený komplex protilátok antigén, konjugát sa pripojí, po premytí pred konjugátom a inkubáciou so substrátom sa vyvolávajú farbenie tých oblastí nitrocelulózy, kde sa vytvorila tvorba komplexu antigénu - protilátka - konjugát. Kresba predstavuje príklady pozitívnych, slabo-lôžkových a negatívnych imunoblotových výsledkov.

V sére osôb infikovaných HIV-1 a HIV-2 deteguje protilátky podľa nasledujúcich proteínov (p) a glykoproteínov (GP): tabuľku A.

Tabuľka v tabuľke prezentuje kritériá hodnotenia výsledkov imunitných blotov, ktoré odporúčajú, kto a Ruské centrum pre prevenciu a kontrolu AIDS.

Na základe kritérií WHO, séra sa považujú za pozitívne, v ktorých protilátky proti akémukoľvek dvom proteínom HIV-1 Shell detect. Ak existuje reakcia s iba jednou z proteínov shell (GP160, GP120, GP41), v kombinácii s reakciou s inými proteínmi, alebo bez neho, výsledok sa považuje za pochybný. Podľa federálneho vedeckého a metodického centra Ministerstva zdravotníctva Ruskej federácie pre prevenciu a kontrolu AIDS je možné interpretovať sérum ako pozitívne a v prítomnosti protilátok len na jeden proteín shell.

Detekcia protilátok proti antigénu P24 môže indikovať počas obdobia začiatku sérokonverzie, pretože protilátky sú presne prvé k tomuto proteínu. Pozitívne reakcie s GAG a Pol proteíny bez reakcie s proteínmi ENV môžu odrážať skorý sérokonverzný stupeň, ako aj indikuje prítomnosť infekcie HIV-2 alebo nešpecifickej odozvy.

Použitie v diagnóze HIV ako odborného spôsobu imunoblotovnej reakcie má množstvo významných nevýhod:

1. neschopnosť potvrdiť detekciu antigénu P24 HIV 1 v prípade použitia testov, ktoré určujú antigén a HIV antigén a protilátky, čo z neho neuspokojiteľné (bezvýznamné) použitie ako skríningové testy na súčasné detekciu antigénu a protilátok proti HIV ( Uznesenie Ministerstva zdravotníctva Ruskej federácie č. 292 z 30.07. 2001: "Pre preskúmanie darcov v staniciach pre transfúziu krvi, je potrebné použiť testovacie systémy, ktoré odhaľujú antigén a protilátky proti HIV súčasne).

2. Detekcia protilátok Iba IgG trieda. Nie je možné plne potvrdiť pozitívne výsledky získané použitím testov 3 a 4 generácií (detekcie IgG a IgM protilátok).

3. Subjektivita výkladu posúdenia testu, najmä v prípadoch "pochybných" a "neistých" výsledkov a v počiatočných štádiách sérokonverzie (detegované pásy na nitrocelulózových membránach v týchto prípadoch sú fuzzy, sotva viditeľné voľným okom a nezhody sú často pozorované pri posudzovaní rôznych osôb).

4. Neschopnosť automatizovaného kvantitatívneho hodnotenia výsledkov analýzy.

5. Nižšia citlivosť v porovnaní s IFA.

6. Distribúcia skladovania (pri skladovaní pásu nitrocelulózovej membrány vyblednutej a nemôže byť objektívnym potvrdením identifikácie alebo detekcie HIV v kontroverzných prípadoch).

7. Obtiažnosť v reakcii a skladovaní (pásy nitrocelulózovej membrány sú veľmi krehké a často zlomené).

8. Vysoké náklady na SADY IB.

Je známe činidlo je známe pre súčasné definovanie antigénov a protilátok k rovnakému patogénu, vrátane HIV (DE 4236189 F1, 04/28/1994). Testovací systém však nie je odhalený, ktorý umožňuje diagnostiku HIV infekcie v rôznych štádiách.

Cieľom predloženého vynálezu je získať testovací systém, s pomocou ktorej možnosť potvrdiť pozitívne alebo pochybné výsledky skríningových štúdií na protilátok proti HIV 1 a 2, HIV 1 a antigénu HIV 1, pri použití testov Dosiahne sa simultánna detekcia antigénov a protilátok.

Navrhované technické riešenie je dosiahnuté imunoopimen testovaciemu systému na identifikáciu spektra protilátok proti vírusu ľudskej imunodeficiencie (HIV) prvého a druhého typu, prvý typ skupiny o a detekciu antigénu P24 na vírus ľudskej imunodeficiencie prvej Typ P24, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa antigény na báze imunosorbent ľudskej imunodeficiencie vírus reprezentujúci gP41 (ENV HIV-1 a HIV-2 skupiny o), GP120 (ENV), p24 (GAG), P31 (Pol), GP36 (ENV HIV- 2), protilátky proti HIV antigénu 1 p24 a detekčné činidlá, zatiaľ čo vyššie uvedené HIV antigény a HIV protilátky sú soli v rôznych jamkách pre enzým imunotest.

Okrem toho sa na sorpciu používa 96-jamkové skladacie alebo neinmulárne dosky imumunicky analýzy.

Technický výsledok dosiahnutý týmto predloženým vynálezom spočíva v možnosti potvrdenia pozitívnych výsledkov na protilátkach na HIV 1 a 2, HIV 1 skupiny O a antigénu P24 HIV 1, vysokej citlivosti, možnosť automatizovaného interpretácie výsledkov, \\ t ktorý eliminuje subjektivitu hodnotenia, jednoduchosť testovania menej ako v porovnaní s existujúcimi súbormi nákladov IB.

Toto technické riešenie sa líši od tých, ktoré sú známe:

1. Použite ako nosná tableta na pevnú fázu pre imunologické reakcie.

2. Simultánne použitie ako protilátka sorbent na R22 HIV a sada HIV antigénov.

Vynález je znázornený nasledujúcim príkladom.

Súčasný začiatok vyvinutého testovacieho systému "DS-IFA-Anti-HIV 1,2-spektrum + AG P24 HIV 1" sú:

Imunosorbentné - rekombinantné antigény, podobné štruktúrnym proteínom HIV-1: GP41 (ENV HIV-1 a HIV 1 skupina O), GP120 (ENV), P24 (GAG), P31 (Pol), HIV-2: GP36 (ENV ) A monoklonálne protilátky myši na HIV 1 (p24), sorbed samostatne na prúžkoch skladacej tablety polystyrénu.

Na prípravu použitia imunoosorbentu:

1. HIV-1 GP41 - proteín vyrobený kmeňom E. coli č. Yaiv 103.

2. HIV-1 GP120 - proteín produkovaný kmeňom E. coli č. Yaiv 109.

3. HIV-1 p24 - proteín vyrobený kmeňom E. coli č. Yaiv 105.

4. HIV-1 p31 - proteín produkovaný kmeňom E. coli č. YAIV 108.

5. HIV-2 p36 - proteín vyrobený kmeňom E. coli č. Yaiv 106.

Konjugát 1, lyofilizované alebo kvapalné - monoklonálne myšacie protilátky na antigén R24 HIV1 konjugovaný s biotínom.

1. Konjugát 2, lyofilizované alebo kvapalné, je zmes rekombinantných antigénov podobných štruktúrne proteíny HIV-1: GP41 (ENV HIV-1 a HIV 1 skupiny O), GP120 (ENV), P24 (GAG), P31 (PO1); HIV-2: GP36 (ENV) konjugovaný s biotínom;

2. konjugáty 3, 4-lyofilizované alebo kvapalné - streptavidínu, označené chren peroxidázou;

Počas predbežných štúdií bol zvolený návrh skúšobného systému, technológia prípravy jeho zložiek bola optimalizovaná, podmienky vykonávania imunofementálnej reakcie boli optimalizované.

Pri inštalácii ELISA v skúšobnom systéme "DS - IFA - anti-HIV 1,2-spektrum + AG P24 HIV 1" V jamkách tablety s sorbovanými protilátkami na p24 sa do jamiek priviedli 25 ul konjugátu-1 a jamiek s sorbovanými antigénmi - 25 ul konjugátu-2. Nižšie je uvedený schéma prípravku reakcie. Ďalej sa do každej jamky pridá 25 ul vzorky podľa štúdie. Súčasne, v studniach s antigénmi, farba sa mení z oranžovej na ružovej a dobre s protilátkami - so zelenou na šedú. Zmes sa inkubuje 45 minút pri 37 ° C na trepačke (alebo 1 hodinu pri 37 ° C v termostate). Potom sa bez premytia, 50 ul konjugátu-3 sa privádza do otvorov tablety na stanovenie antigénu P24 a v jamkách na stanovenie protilátok 50 ul konjugátu-4. Po inkubácii počas 20 minút pri 37 ° C na trepačke (alebo 30 minút pri 37 ° C v termostate) sa tableta premyla a vykazovala zmes substrátu. Celkový čas reakčného času 1 H25 min (alebo 1 H50 min). Antigén P24 prítomný v študovanej vzorke je spojený s monoklonálnymi protilátkami na p24 a špecifické protilátky tvoria komplex s rekombinantnými antigénmi na tablete. Výsledný imunitný komplex anti-p24 s P24 je detegovaný anti-p24-biotínovými konjugátmi, potom streptavidín peroxidázou a imunitné komplexy HIV s konjugátom AT-HIV - AG-biotínu, potom streptavidín peroxidázou.

Schéma prípravy reakcie.

Účtovníctvo výsledkov sa vykonávajú spektrofotometricky na dvoch vlnových dĺžkach: 450 / 620-680 nm s nastavením prístroja "vzduchom". Predpokladajme, že výsledky výsledkov pri jednej vlnovej dĺžke 450 nm.

Výsledky analýzy sa zohľadňujú, ak priemerné hodnoty optickej hustoty (OP) v jamkách s K- nie viac ako 0,2, v jamkách s K + - nie je nižšia ako 1,0. Opor. Vypočítajte vzorcom:

Opor. GP41 \u003d CF. Znamenie OP K- (GP41) +0,15

Opor. Gp120 \u003d St. Znamenie OP K- (GP120) +0,15

Opor. P24 \u003d St. Znamenie Op k- (p24) +0,15

Opor. p31 \u003d cf. Znamenie Op k- (p31) +0,15

Opor. GP36 \u003d CF. Znamenie Op k- (gp36) +0,15

Opor. AG P24 \u003d St. Znamenie OP K- (AG P24) +0,04

tam, kde 0,15 a 0,04 sú koeficienty stanovené metódou štatistického spracovania na výrobcu. V procese vývoja testovacieho systému sa použil:

1. Vzorky krvných sérov zdravý darcovia (n \u003d 610).

2. Vzorky pacientov s krvným sérom s rôznymi infekčnými ochoreniami, ktoré nie sú spojené s HIV (ORZ, pneumóniou, angíny, herpetickými a cytomegalovírusovými infekciami, syfilis, chlamýdie, vírusovou hepatitídou A, B a C (n \u003d 224)).

3. Vzorky séra Krv pacientov s rôznymi nekontrakovateľnými chorobami - zranenia, ochorenia kardiovaskulárneho systému, onkológia (n \u003d 35).

4. Vzorky sérovej krvi tehotných žien (n \u003d 40).

5. Vzorky sérového krvi séropozitívneho v ELISA a potvrdené v imunoblot (n \u003d 428).

6. Vzorky séra s pozitívnym výsledkom získaným v imunoformálnych testovacích systémoch na súčasné určovanie protilátok HIV 1,2 a antigénu P24 a neistý výsledok imunoblot (n \u003d 123).

7. Vnútorný panel séra obsahujúceho a non-protilátky proti HIV 1.2, testované na registrovanom Ministerstvom zdravotníctva Ruskej federácie Immunofementovacích testovacích systémov a imunoblot (n \u003d 21).

8. Štandardný "HIV 1 antigénový štandard", "Bio Rad", Francúzsko, Cat. 72217, ktorý je antigén odvodený z vírusového lyzátu.

9. Vnútorná norma podniku. Vzorka obsahujúca P 24 antigén v koncentrácii 200 pg / ml získaných z vírusového lyzátu a rafinovatého podľa normy "HIV 1 antigén" štandard spoločnosti "Bio Rad", Francúzsko, Cat. №72217.

10. Štandardný sérový panel obsahujúci protilátky k prvému typu ľudskej imunodeficiencie vírus (HIV 1) - OSO 42-28-212-93-02P, "Lekársky a biologický únii", Novosibirsk.

11. Štandardný sérový panel obsahujúci protilátky na druhý typ ľudskej imunodeficiencie vírus (HIV2) - OSO-42-28-216-02P, "Medicokiologický únii", Novosibirsk.

12. Štandardný sérový panel, ktorý neobsahuje protilátky proti ľudskej imunodeficiencie vírusu prvého typu a druhého (HIV 1, 2) - OSO-42-28-214-94-02P, "lekársky a biologický únii" Novosibirsk.

Posúdenie citlivosti skúšobného systému počas detekcie antigénu P24 sa uskutočnilo s použitím štandardného štandardného štandardu HIV I antigénu, bio Rad, vnútorný štandard podniku. Pri použití vnútorného štandardu sa 4 po sebe nasledujúce 2-násobné riedenia zo 40 pg / ml až 5 pg / ml pripravili s normálnou plazmou darcov, ktorá neobsahuje protilátky na HIV 1, 2, ako štádium. Najmenšie množstvo detegovaného antigénu sa odobralo na kritérium citlivosti. Získané údaje sú uvedené v tabuľke 1.

Na odhad citlivosti skúšobného systému počas detekcie špecifických protilátok sa použili štandardné panely vzoriek obsahujúcich protilátky proti vírusu imunodeficiencie (HIV 1, 2) (OSO 42-28-212-93-02P S.012, OSO 42-28 -216- 02P (HIV 2) od.003).

Získané údaje sú uvedené v tabuľkách 3, 4.

Porovnanie bolo vyrobené z diagnostickej účinnosti testovacieho systému "DS-IFA-anti-HIV 1,2-spektrum + AGR24 HIV 1" s testovacími systémami "Jenskrin-HIV-AG / AT" (Bio-Rad), "DIA -HIV 1/2 "(DIAPROF-HONEY)," VIRO-VIO-forma II AG / AM "(biomerioux)," rekombinantný HIV1.2 DSM "(MBS)," AMERCARD ANTHARD HIV-1,2 K "(AMERCARD ), "HIV-1, HIV-2-IFA AVICENNA" (AVICENNA). Na tento účel boli vzorky séra z vnútorného panelu testované vo všetkých špecifikovaných testoch. Výsledky uvedené v tabuľke 5 ukazujú vysokú diagnostickú účinnosť "DS-IFA-anti-HIV 1,2-spektrum + AG24 HIV 1".

Štúdie citlivosti testovacieho systému "DS-IFA-anti-HIV 1,2-spektrum + AG24 HIV 1" sa uskutočnili aj so sérami pacientov potvrdených v imunoblot ako HIV pozitívne. Testované 428 vzoriek takýchto séra. Získalo sa niekoľko možností na detekciu protilátok proti rôznym HIV proteínom a antigénom P24. Výsledky sú uvedené v tabuľke 6.

Pri testovaní HIV 1 pozitívnych vzoriek, 3% séra ukázalo pozitívnu reakciu s GP36 (ENV HIV 2). Opkrit. V týchto vzorkách neprekročila 2.0. Naše údaje o krížovej reaktivite vonkajšieho plášťa HIV 1 (GP41) a HIV2 (GP36) sa zhodujú s údajmi literatúry.

Interpretácia výsledkov

Analýza testovania HIV pozitívnych séra a vzoriek zo štandardných a vnútorných panelov v "DS-IFA-anti-HIV 1,2-spektrum + AG24 HIV 1" umožnilo vypracovať kritériá na interpretáciu výsledkov tohto testu. Odporúčané kritériá sú uvedené v tabuľke 7.

Na základe týchto kritérií sú všetky vzorky HIV pozitívneho séra (n \u003d 428) definované ako pozitívne a v "DS-IFA-anti-HIV 1,2-spektrum + AG24 HIV1". Zo 16 vzoriek štandardného panelu obsahujúceho protilátky proti HIV 1, 14 sú definované ako pozitívne a 2 ako vágne. Všetky 8 vzoriek zo štandardného panelu obsahujúceho protilátky proti HIV2 sú definované ako pozitívne. Z 10 vzoriek vnútorného panelu obsahujúceho protilátky proti HIV 1, 7 sú definované ako pozitívne a 3 ako vágne.

Testy citlivosti testovacieho systému "DS-IFA-anti-HIV 1,2-spektrum + AGRA24 HIV 1" sa uskutočnili aj so sérami pacientov s pozitívnym výsledkom v imuno-imimenzimenzionálnych testovacích systémoch, súčasne detekciu protilátok a antigénu P224, \\ t a neistý v imunoblot. Testované 123 takýchto vzoriek. Údaje sú uvedené v tabuľke 8.

Pri testovaní séra s neurčitým imunoblotovým výsledkom (n \u003d 123) v "DS-IFA-anti-HIV 1,2-spektrum + AG24 HIV 1" 72 vzorka (58,5%) bol preukázaný pozitívny výsledok. Z nich je 26 séra (21,1%) kladné len P24, 20 (16,3%) - len v protilátkach, 16 (13%) - podľa P24 s protilátkami k jednému z proteínov, 10 (8,1%) - podľa P24 s protilátkami na dva alebo viac proteínov. Testovanie len na protilátkach (bez detekcie P24) by teda určilo ako pozitívne 30 vzoriek (24,4%). Detekcia testu antigénu P24 umožnila určiť ako pozitívnu vzorku 42 (34,1%).

Na odhad špecifickosti testovacieho systému sa použil štandardný sérový panel, ktorý neobsahuje protilátky proti HIV 1, 2 (n \u003d 20); Zdravé darčekové sérové \u200b\u200bvzorky (n \u003d 610), vzorky pacientov s krvným sérom s rôznymi infekčnými ochoreniami (n \u003d 224), nesúvisiace s HIV; Vzorky pacientov s krvným sérom s rôznymi necitlivými chorobami - zranenia, ochorenia kardiovaskulárneho systému, onkológie (n \u003d 35); Vzorky krvného séra tehotných žien (n \u003d 40). Testované 929 vzoriek. Jedna vzorka z krvných sérov zdraví darcovia ukázala falošný pozitívny výsledok - protilátky na GP41 a p24 boli odhalené. 7 Vzorky krvného séra zdravých darcov a 2 vzorky pacientov s krvným sérom s infekčnými ochoreniami, ktoré nie sú spojené s HIV, ukázali falošný pozitívny výsledok P24.

Na odhad špecifickosti testovacieho systému sa použil štandardný panel negatívnych vzoriek (OSO 42-28-214-94-02P, od.009). Špecifickosť bola 100%.

Štúdie teda ukázali, že špecifickosť skúšobného systému "DS-IFA-anti-HIV 1,2-spektrum + AGR24 HIV 1" je 99% v štúdii vzoriek krvného séra normálnych darcov a pacientov s rôznymi infekčnými a somatické ochorenia.

Získané údaje ukazujú vysokú diagnostickú účinnosť vyvinutého testovacieho systému "DS-IFA-Anti-HIV 1,2 Spektrum + AG24 HIV 1". Testovací systém sa môže použiť na detekciu protilátok na oddelenie proteínov typu HIV 1 a 2 a antigénu R24 HIV1, aby sa potvrdil pozitívny výsledok skríningových testovacích systémov, ktoré detekujú protilátky alebo testovacie systémy, ktoré sú súčasne detekciu protilátok a antigén p24 HIV1. Testovací systém môže byť použitý ako alternatívny imunoblotový test na potvrdenie pozitívnych výsledkov, ako aj na štúdie dynamiky protilátok proti HIV a antigénu P24 v rôznych štádiách infekcie.

Výhody cesta

1. Potvrdenie testu imunofementácie formátu tabliet

2. Potvrdzujúci test, ktorý kombinuje stanovenie spektra protilátok HIV 1, 2 a antigén P24 HIV 1

3. Detekcia protilátok všetkých tried IG

4. Citlivosť Počas detekcie P24 aspoň 5 pg / ml

5. Umožňuje znížiť počet neistých výsledkov v porovnaní s imunoblotom

6. Analýza čas - 1 h 25 min (imunoblot - od 3 do 20 hodín)

7. Vizuálne hodnotenie zavádzania všetkých komponentov a vzoriek.

1. Immuno-imunimálny testovací systém na identifikáciu protilátok proti vírusu ľudskej imunodeficiencie (HIV) prvého a druhého typu, prvého typu skupiny o a detekciu antigénu P24 na vírus ľudskej imunodeficiencie v prvom type P24, charakterizovaný To zahŕňa imunosorbent na báze antigénu vírusu imunodeficiencie Osoba predstavujúca GP41 (ENV HIV-1 a HIV-2 skupiny o), GP120 (ENV), P24 (GAG), P31 (Pol), GP36 (ENV HIV-2), Protilátky proti HIV antigénu 1 p24 a detekčné činidlá, zatiaľ čo vyššie uvedené HIV antigény a HIV protilátky sú soli v rôznych jamkách na imunotest enzýmu.

2. Systém testovania imunofementu podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sorpcia používa 96-jamkové polystyrénové skladacie alebo nezinketové dosky pre enzým imunotest.

Včasná diagnóza HIV infekcie sa stáva mimoriadne dôležitým opatrením, pretože predtým začiatok liečby môže do značnej miery predurčiť ďalší rozvoj ochorenia a predĺžiť životnosť pacienta. V posledných rokoch sa pozorovalo významný pokrok v oblasti identifikácie tejto strašnej choroby: pokročilejšie, prieskumné metódy prichádzajú nahradiť staré testovacie systémy a ich presnosť sa výrazne zvyšuje.

V tomto článku budeme rozprávať o moderných metódach diagnostikovania infekcie HIV, ktorá je užitočná na včasnú liečbu tohto problému a udržiavať normálnu kvalitu života choroby.

HIV Diagnostické techniky

V Rusku sa vykonáva štandardný postup na diagnostiku infekcie HIV, ktorá obsahuje dve úrovne:

• Testovací systém ELISA (analýza skríningu);
• imunitný blot (Ib).

Na diagnostiku možno použiť aj iné techniky:

• expresné testy.

Testovací systém IFA

V prvej fáze diagnostiky sa na detekciu infekcie HIV, ktorá je založená na HIV proteínoch vytvorených v laboratóriách, zachytávanie špecifických protilátok generovaných v tele ako odpoveď na infekciu. Po ich interakcii s činidlami (enzýmy) skúšobný systém zmení farbu indikátora. Ďalej sú tieto zmeny farieb spracované na špeciálnom hardvéri, čo určuje výsledok uskutočnenej analýzy.

Takéto testy IFA sú schopné ukázať výsledok po niekoľkých týždňoch po zavedení infekcie HIV. Táto analýza neurčuje prítomnosť vírusu, ale odhaľuje produkciu protilátok k nemu. Niekedy, v ľudskom tele, výroba protilátok proti HIV začína po 2 týždňoch oblasti infekcie, ale väčšina ľudí sa vyrába neskôr termíny, po 3-6 týždňoch.

Existujú štyri generácie testov IFA s rôznou citlivosťou. V posledných rokoch sa často používajú testovacie systémy III a IV generácie, ktoré sú založené na syntetických peptidoch alebo rekombinantných proteínoch a majú väčšiu špecifickosť a presnosť. Môžu byť použité na diagnostiku HIV infekcie, monitorovanie prevalencie HIV a bezpečnosť pri kontrole donorovej krvi. Presnosť testovacích systémov IFA III a IV je 93-99% (citlivejšie testy, ktoré sa vyrábajú v západných krajinách - 99%).

Na vykonanie testu IFA sa odoberie 5 ml krvi z žíl pacienta. Medzi posledným jedlom a analýzou by malo trvať najmenej 8 hodín (spravidla sa vykonáva v dopoludňajších hodinách na prázdny žalúdok). Takýto test sa odporúča, aby neprijal najskôr 3 týždne po údajnej infekcii (napríklad po nechránenom sexuálnom styku s novým sexuálnym partnerom).

Výsledky testov IFA sa získajú po 2-10 dňoch:

• negatívny výsledok: Označuje nedostatok HIV infekcie a nevyžaduje prístup k špecialistu;
• falošný negatívny výsledok: možno pozorovať v prvých podmienkach infekcie (do 3 týždňov), na neskorších štádiách AIDS s výrazným potlačením imunity a nesprávne vykonanej prípravy krvi;
• falošný pozitívny výsledok: možno pozorovať u určitých chorôb a s nesprávnym prípravou krvi;
• pozitívny výsledok: označuje infekciu infekcie HIV, vyžaduje IB a cirkuláciu pacienta na špecialistu v centre AIDS.

Prečo test IFA dáva falošne pozitívne výsledky?

Falošné výsledky testov IFA na HIV sa môžu pozorovať s nesprávnym spracovaním krvi alebo u pacientov s takýmito podmienkami a chorobami:

• viacnásobný myelóm;
• infekčné ochorenia vyvolané vírusom Epstein-Barr;
• podmienka;
• autoimunitné ochorenia;
• proti pozadí tehotenstva;
• po očkovaní.

S vyššie opísanými príčinami krvi môžu byť prítomné nešpecifické zosieťovacie protilátky, ktorého výroba nebola vyvolaná infekciou HIV.

V posledných rokoch sa frekvencia falošne pozitívnych výsledkov výrazne znížila v dôsledku použitia testovacích systémov generácie III a IV, ktoré obsahujú citlivejšie peptidové a rekombinantné proteíny (sú syntetizované s genetickým inžinierstvom in vitro). Po začiatku používania takýchto testov IFA sa frekvencia falošne pozitívnych výsledkov výrazne znížila a je asi 0,02 až 0,5%.

Identifikácia falošne pozitívneho výsledku neznamená, že osoba je infikovaná HIV. V takýchto prípadoch, ktorý odporúča iný test IFA (povinné IV generácie).

Krv pacienta sa posiela na referenčné alebo arbitrážne laboratórium s poznámkou "REPEAT" a skúma na generáciu testovacieho systému IFA IV. Ak je výsledok novej analýzy záporný, prvý výsledok sa rozpoznáva ako chybné (nepravdivé pozitívne) a IB sa nevykonáva. S pozitívnym alebo pochybným výsledkom, počas druhého testu je pacient nevyhnutne priradený na vykonanie IB po 4-6 týždňoch na potvrdenie alebo vyvrátiť infekciu HIV.

Imunitný blot

Konečná diagnóza infekcie HIV môže byť inštalovaná až po obdržaní pozitívneho výsledku imunitného blotovania (Ib). Používa nitrocelulózový pás, na ktorom sa aplikujú vírusové proteíny.

Krvný plot pre IB sa vykonáva z žíl. Ďalej je podrobené špeciálnemu spracovaniu a proteíny obsiahnuté vo svojom sére sú oddelené v špeciálnom géli podľa ich náboja a molekulovej hmotnosti (manipulácia sa vykonáva na špeciálnom zariadení pod vplyvom elektrického poľa). Nitrocelulózový pás je uložený na gél krvného séra a blokovanie ("poškodenie") v špeciálnej komore. Pás sa spracuje a ak existujú protilátky proti HIV v použitých materiáloch, sú spojené s antigénnymi pruhmi na IB a prejavujú sa ako riadky.

IB sa považuje za pozitívne, ak:

• podľa amerických CDC kritérií - existujú dva alebo tri riadky GP41, P24, GP120 / GP160;
• podľa kritérií American FDA - na páse sú dva riadky P24, P31 a riadok GR41 alebo GR120 / GR160.

V 99,9% prípadov, pozitívny výsledok IB označuje infekciu HIV.

V neprítomnosti línií - IB je negatívny.

Pri identifikácii čiar s GR160, GR120 a GR41- IB je pochybné. Tento výsledok môže byť zistený na:

• oncologické ochorenia;
• tehotenstvo;
• Časté transfusy krvi.

V takýchto prípadoch sa odporúča vykonať opätovné štúdium pomocou sady inej firmy. Ak po ďalšom IB, výsledok zostáva pochybný, potom je potrebné pozorovať šesť mesiacov (IB sa koná každé 3 mesiace).

Polymerická reťazová reakcia

Test na PCR môže určiť RNA vírusu. Jeho citlivosť je dostatočne vysoká a umožňuje identifikáciu infekcie HIV po 10 dňoch po infekcii. V niektorých prípadoch môže PCR poskytnúť falošne pozitívne výsledky, pretože jeho vysoká citlivosť môže reagovať na protilátky na iné infekcie.

Táto diagnostická technika je drahá, vyžaduje špeciálne vybavenie a vysokú kvalifikáciu špecialistov. Tieto dôvody to neumožňujú vykonávať s hromadným testovaním obyvateľstva.

PCR sa uplatňuje v takýchto prípadoch:

• identifikovať HIV u novorodencov, ktorí sa narodili z matiek infikovaných HIV;
• identifikovať HIV v "okennom období" alebo s pochybným IB;
• kontrolovať koncentráciu HIV v krvi;
• pre výskum darcu.

Iba na PCR teste, HIV nie je vyrobený, ale vykonáva sa ako dodatočná diagnostická metóda na riešenie kontroverzných situácií.

Expresné metódy

Expresné testy, ktorých výsledky možno hodnotiť po 10-15 minútach stali jednou z inovácií v diagnostike HIV. Najúčinnejšie a presné výsledky sa získajú pomocou imunochromatografických testov založených na princípe kapilárneho prúdu. Sú to zvláštne prúžky, na ktorej sa aplikuje krv alebo iné študované kvapaliny (sliny, moč). Ak existujú protilátky na HIV, 10-15 minút neskôr, na skúške sa objaví farebný a kontrolný pás - pozitívny výsledok. S negatívnym výsledkom sa objaví len kontrolný pás.

Ako po testoch IFA musia byť výsledky expresných testov potvrdené analýzou IB. Až potom môže byť diagnostikovaná s infekciou HIV.

Existujú expresné súbory pre domáce testovanie. Test ORASURE Technologies1 (USA) schválené FDA, predávané bez lekárskeho predpisu a môžu byť použité na identifikáciu HIV. Po testovaní, v prípade pozitívneho výsledku, sa pacient odporúča podrobiť prieskumu v špecializovanom stredisku na potvrdenie diagnózy.

Zostávajúce domáce testy ešte neboli schválené FDA a ich výsledok môže byť veľmi pochybný.

Napriek tomu, že expresné testy sú horšie ako testy IV generácií IV, sú široko používané pre ďalšie testovanie populácie.

Môžete absolvovať testy na identifikáciu infekcie HIV v akejkoľvek polylinickom, CRH alebo v špecializovaných centrách AIDS. V Rusku sa vykonávajú absolútne dôverné, alebo anonymne. Každý pacient sa môže spoľahnúť na získanie lekárskeho alebo psychologického poradenstva pred alebo po analýze. Budete musieť zaplatiť za testy HIV len v komerčných zdravotníckych inštitúciách a sú splnené vo verejných klinikách a nemocniciach.

O akých spôsoboch, ktorými sa môžete infikovať infekciou HIV a ktoré mýty existujú o možnostiach, ktoré sa majú infikovať, prečítajte si

Najväčšia distribúcia dnes na svete bola prijatá pomocou AIDS - vírusom z podrodinného retrovírusov, nazývajú sa aj lentivirus, alebo "pomalé". V ľudskom tele naozaj začínajú prejavovať činnosť po relatívne dlhej dobe, približne 10 rokov.

Existuje imunodeficiencia prvého a druhého typu. Ale môžete bezpečne hovoriť o rozšírení prvého typu vírusu. Nájdenie do krvi a spájanie klietky, ktorá je zodpovedná za imunitu, vírus začína rýchlo množiť. Kým molekula CD4, ktorá je zodpovedná za svoje uznanie, identifikuje mazaný nepriateľ, má čas na infikovanie celého organizmu. Preto, čím skôr je to diagnostikovať, tým väčšia je šanca na pacienta, aby sa včasná liečba a žili dlhšie.

Ak má osoba dôvod na kontrolu pre AIDS, toto by malo byť okamžite vykonané. Najčastejšie je základom takejto diagnózy definícia protilátok proti imunodeficiencie - proteíny, ktoré sa vyskytujú ako reakcia na prítomnosť vírusu a začínajú sa tvoriť v období 1,5 až 6 mesiacov, pretože možná infekcia. V súlade s tým, že je to výhodnejšie zdôrazniť diagnózu po tomto období.

Množstvo protilátok sa stanoví pomocou analýzy nazývanej názov imunofementácie (ELISA). Táto metóda je dôveryhodná, je to relatívne presné a vysoko citlivé, tieto ukazovatele sú viac ako 99, 5%. Farmaceutický trh ponúka množstvo diagnostických testov pre ELISA: HIV Combission, Anti-HIV 1 2, Anti-HIV, Anti-HIV CombiBest, kombinovať anti-HIV 1 2 D 0172. Tieto testovacie systémy patria do tretej generácie. Nevýhodou týchto činidiel: nenesú vždy detekciu ochorenia v skorých podmienkach. Osoba je už vírusovým dopravcom, je to potenciálne nebezpečné pre partnerov, ale protilátky v krvi ešte nie sú prítomné.

Súpravy sú väčšinou vybavené počtom testov pre 12 * 8 alebo 192 anti-HIV testov. Neodporúča sa ich používať. V opise liečiv sa uvádza, že ich hlavným cieľom je identifikovať množstvo protilátok na pomoc oboch typov. A tiež identifikovať protilátky všetkých tried na AIDS. Ak neexistuje žiadna protilátka, znamená to, že choroba nie je diagnostikovaná.

Štvrtá generácia testov "vidí", s výnimkou protilátok a AIDS antigénov, sú schopní detegovať infekciu skôr ako tretia generácia. Pre porovnanie: HIV antigén je v krvi, od 5. dňa a prvé protilátky sa objavujú nie skôr ako za mesiac. HIV 1, 2 AG / AC (Komple 1) a HIV 1, 2 AG / AT (Set 2) patria do 4. generačných testov. Využívanie sady týchto činidiel sa detegujú protilátky k typu 1, 2 a antigénu P24, skúmajúca sérum alebo plazmy ľudskej krvi. Mnohé krajiny používajú testovanie ELISA 4 generácie, ktorá tiež spôsobuje aj názov antigénu / protilátky, skrátený - achát.

Testovanie sa vykonáva anonymne.

Popis

Príprava

Indikácie

Interpretácia výsledkov

Popis

Metóda definovania Immuno enzýmová analýza (ELISA).

Materiál podľa štúdia Sérová krv

Dostupný odchod do domu

Kombinovaná detekcia protilátok na HIV typu 1 a 2 a antigén R24 HIV, vysokokvalitný test.

Pozornosť. S pozitívnymi a pochybnými reakciami sa môže lehota na vydanie výsledku zvýšiť na 10 pracovných dní. HIV (vírus ľudskej imunodeficiencie), spôsobujúci AIDS (získaný syndróm imunodeficiencie) - patrí do rodiny retrovírusov. Prenášané z osoby na osobu pri použití kontaminovaných ihličiek a injekčných striekačiek na intravenózne podávanie liečiva alebo terapeutických postupov, so sexuálnymi kontaktmi, ako je hetero a homosexuál. Prenos vírusu sa môže vyskytnúť pri preprave infikovanej krvi a jej výrobkov, darcovstva orgánov alebo semien tekutiny, zdravotníckych pracovníkov - pri injekcii infikovaných ihličiek alebo nástrojov. HIV infekcia je možná svojím prevodom z infikovanej matky dieťaťa (vertikálna cesta), hoci moderné spôsoby prevencie s použitím antiretrovírusovej terapie, pri plnení všetkých odporúčaní, zníženie takéhoto rizika na minimum.

Proces interakcie medzi vírusom s bunkou obsahuje množstvo stupňov: väzba vírusu s bunkou, uvoľňujte ho zo škrupiny, penetráciu do cytoplazmy, syntézu DNA pre vírusovú RNA, vloženú vírusovú DNA v hostiteľskej bunke genóm. Potom začína latentná fáza infekcie. V takom stave, preukázanie DNA môže existovať nejakú dobu bez toho, aby sa zobrazovala aktivita a bez ovplyvnenia životne dôležitých aktivít hostiteľskej bunky. Neexistuje žiadna expresia vírusových proteínov, neexistuje žiadna imunitná reakcia na vírus. HIV protilátky, charakterizujúce imunitnú reakciu tela, objavujú sa po aktivácii vírusovej DNA a začiatku aktívneho chovu vírusu. Trvanie latentného obdobia závisí od viacerých faktorov, vrátane jednotlivých genetických prvkov tela.

HIV protilátky sa môžu objaviť od druhého týždňa po infekcii; Ich obsah sa zvyšuje na 2-4 týždne a v priebehu rokov sa udržiava. V 90-95% tých infikovaných, objavujú sa v prvých troch mesiacoch po infekcii, 5-9% - v období od troch do šiestich mesiacov, v čase 0,5-1% - neskôr.

V prvých týždňoch infekcie, dokonca aj pred vzhľadom na protilátky proti vírusu (t.j. pred servo- konverziou), v sérových alebo plazmových vzorkách, môže byť identifikovaná prítomnosť HIV antigénov, vrátane jej kapsidového proteínu p24. Neskôr sa po sérokonverzii zvyčajne stane neurčené.

Kombinované testovacie systémy zo 4. generácie, ktoré zahŕňajú HIV AG / AB Combo test (Architect, Abbott), detegujú obidve protilátky typu HIV 1 a 2 a HIV antigénu R24, ktorý umožňuje včasné detekciu infekcie. Osobitné charakteristiky testovacieho testu InvOrro používané v laboratóriu na detekciu infekcie HIV by sa mali pripísať vysokej špecifickosti výskumu (\u003e 99,5%); 100% citlivosť na protilátky charakteristické pre sérokonverzné obdobie a citlivosť testu na Antigén P24 približne 18 pg / ml.

Postup vykonávania laboratórneho prieskumu o HIV je prísne regulovaný príkazmi Ministerstva zdravotníctva Ruskej federácie a zahŕňa krok skríningu (kvalifikovaného) štúdie prítomnosti protilátok proti HIV imunikonom (IFA) metódy povolených na použitie, a Štádium overovania (potvrdzujúce) podrobnejšiu štúdiu v laboratóriu centra mesta AIDS. Treba poznamenať, že aj tie najlepšie skríning iFA systémy nezaručujú 100% špecifickosť, to znamená, že existuje nejaká pravdepodobnosť získania nešpecifických, falošne pozitívnych výsledkov spojených so zvláštnymi krvným sérom pacienta. Preto pozitívny výsledok skríningu IFA vyšetrenia sa nesmie potvrdiť v potvrdzovacích testoch, po ktorých pacient poskytne negatívny alebo neurčitý výsledok. S neurčitým výsledkom potvrdzujúcej štúdie by sa testovanie malo opakovať v dynamike v 2-3 týždňoch.

Laboratórna diagnóza infekcie HIV u detí narodených z matiek infikovaných HIV má svoje vlastné charakteristiky. Vo svojej krvi, až 18 mesiacov od okamihu narodenia môže cirkulovať materské protilátky na HIV (trieda IgG). Absencia protilátok proti HIV u novorodencov neznamená, že vírus nie je preniknutý cez placentárnu bariéru. Deti z HIV-infikovaných matiek podliehajú laboratóriom a diagnostickým prieskumom po dobu 36 mesiacov po narodení.

Príprava

Osobitná príprava sa nevyžaduje. Krv nemá skoršie ako 4 hodiny po poslednom jedle. Všeobecné odporúčania pre prípravu výskumu možno nájsť. Odporúča sa vykonať štúdiu o detekcii antigénu a protilátok proti HIV nie je skoršie ako dva týždne po možnej infekcii, s opakovaním jej opakovaním cez tri a šesť týždňov v prípade negatívneho výsledku. Registrácia žiadostí o výskum v LLC "INVIVRO" sa vykonáva na cestovnom pase alebo dokumente, ktorý ho nahrádza (migračná karta, dočasná registrácia v mieste bydliska, osvedčenie o služobnej certifikáte, osvedčenie z pasovej tabuľky s stratou pasu, registračnou kartou účtovníctva z hotela). Predložený dokument musí nevyhnutne obsahovať informácie o dočasnej alebo trvalej registrácii na území Ruskej federácie a fotografie. V neprítomnosti pasu (dokument, ktorý ho nahrádza) má pacient právo vydať anonymnú aplikáciu na dodanie biomateriálu. S anonymným vyšetrením, aplikáciou a klientom prijatým od klienta, niekoľko biomateriálov je pridelený k pacientovi, ktorý je známy, a zdravotnícky personál, ktorý vyhľadal objednávku. ! Výsledky uskutočnenej výskumu anonymne nemožno predložiť na hospitalizáciu, profesionálne inšpekcie a nepodliehajú registrácii v pištole.

Indikácia na vymenovanie

• Zvýšenie lymfatických uzlín viac ako dvoch oblastí.
• Leukopénia s lymfopéniou.
• Nočné potenie.
• Sharbo strata hmotnosti nejasného dôvodu.
• Hnačka viac ako tri týždne nejasného dôvodu.
• Horúčka.
• Plánovanie tehotenstva.
• Predoperačná príprava, hospitalizácia.
• Detekcia nasledujúcich infekcií alebo ich kombinácií: tuberkulóza, matrikacia toxoplazmóza, často recidivujúca herpesvírusová infekcia, vnútorné orgány kandidóza, re-neuralgia herpes-zoster, spôsobené mykoplazmou, pneumatickými alebo legionmi pneumónia.
• Sarcoma caposhi v mladom veku.
• Náhodných sexuálnych kontaktov.

Interpretácia výsledkov

Výklad výsledkov výskumu obsahuje informácie pre účasť lekára a nie je diagnóza. Informácie z tejto časti nie je možné použiť na seba-diagnostiku a samoobsluhu. Presná diagnóza vykonáva lekára s použitím výsledkov tohto prieskumu a potrebných informácií z iných zdrojov: anamnéza, výsledky iných prieskumov atď.

Merné jednotky v nezávislom laboratóriu InvOrro: Skúška kvality. Forma reprezentácie: v neprítomnosti protilátok proti HIV 1 a 2 a antigénu P24, odpoveď je "negatívna". V prípade detekcie protilátok proti HIV alebo antigénu v skríningových enzýmoch sa sérová vzorka posiela na potvrdenie metódy imunoblot v centre mesta AIDS, ktorá overuje pozitívne a neisté výsledky.

Pozitívny výsledok:

1. Infekcia HIV;
2. falošný pozitívny výsledok, ktorý vyžaduje opakovaný alebo dodatočný výskum *);
3. Štúdia je neformatívna u detí mladších ako 18 rokov, narodená z matiek infikovaných HIV.

* Špecifickosť skríningového testovacieho systému protilátky na HIV 1 a 2 a HIV AG / Combo, Abbott (HIV AG / AB Combo, Abbott), podľa výrobcu činidiel, je približne 99,6% v všeobecnej populácii a U pacientov s potenciálnymi interferenciami (HBV, HCV, Rubelou, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E. coli, CHL.Trach atď., Autoimunitné patológie (vrátane reumatoidnej artritídy, prítomnosti antinukleárnych protilátok), \\ t Tehotenstvo, tehotenstvo, tehotenstvo, zvýšená IgG, IgM, monoklonálna gamapatia, hemodialýza, viac hemotransphus).