Métodos modernos para diagnosticar la infección por VIH. Usando la prueba del combibio en el diagnóstico del VIH que se puede esperar de los resultados del VIH

ELISA (análisis inmunotimmunal, ELISA - inglés) entró en la vida de la medicina práctica en algún lugar de los años 60 del siglo pasado. La tarea inicial fue estudios histológicos para fines científicos, que se redujeron a la búsqueda e identificación de la estructura antigénica de las células del organismo vivo.

El método IFA se basa en la interacción de antígenos específicos (AT) y relacionados (AG) con la formación del complejo antígeno - anticuerpo, que se detecta utilizando la enzima. Este hecho se encontró con los científicos de la idea de que el método se puede usar para diagnosticar para identificar inmunoglobulinas específicas de diversas clases involucradas en la respuesta inmune a una u otra infección. ¡Y fue un avance en el diagnóstico de laboratorio clínico!

El método comenzó a ser utilizado activamente solo a principios de los 80 y que se encuentra principalmente en agencias especializadas. Los primeros analizadores de inmunoferment estaban equipados con centros y estaciones de transfusión de sangre, hospitales infecciosos y venereológicos, ya que nacieron en el continente africano, que apareció en el horizonte, y se unió inmediatamente a las "antiguas" infecciones de formidables ayudas, exigieron medidas de diagnóstico inmediatas y la Búsqueda de medicamentos terapéuticos que afectan a su.

Alcance del método ELISA

Las posibilidades de análisis inmunotimmunal son verdaderamente extensas. Ahora es difícil imaginar cómo puede hacerlo sin dichos estudios utilizados literalmente en todos los sectores de la medicina. Parece que IFA puede hacer en la oncología? Resulta tal vez. Y mucho. La capacidad de analizar los marcadores, característica de ciertos tipos de neoplasias malignas, subyace a la detección temprana del tumor, cuando aún no está determinado por otra forma debido a su pequeño tamaño.

Los modernos diagnósticos de laboratorio clínico (CDL), a excepción de los contenedores, tienen un importante paneles de arsenales para ELISA y los utilizan para el diagnóstico de diversas condiciones patológicas (procesos infecciosos, trastornos hormonales) y monitoreando las preparaciones médicas farmacéuticas para identificar su influencia en el paciente. Cuerpo y, por cierto, no solo una persona. Actualmente, el análisis inmunoesimensional se usa ampliamente en el servicio veterinario, porque "nuestros hermanos más pequeños" también están sujetos a muchas enfermedades, lo que a veces sufren mucho.

De este modo, Elisa, debido a su sensibilidad y especificidad, de acuerdo con la muestra de sangre tomada de la vena, puede determinar:

• Estado hormonal (hormonas tiroideas y glándulas suprarrenales, hormonas sexuales);
• Presencia de infección viral y bacteriana (VIH, B y C, clamidia, sífilis y, así como muchas otras enfermedades causadas por microorganismos patógenos);
• Rastros de la actividad vital de los microorganismos que despertaron el proceso infeccioso, que se terminó de manera segura y se cambió a la etapa de la formación de una respuesta inmune a este patógeno. Tales trazas, es decir, los anticuerpos, en muchos casos, circulan en la sangre de la vida, que proteger a una persona de la reinfección.

¿Cuál es la esencia de la IFA?

Un método inmununimal le permite determinar no solo la presencia del propio patógeno (análisis de alta calidad), sino también su contenido cuantitativo en el suero del paciente.

El virus o la dosis bacteriana afecta significativamente el curso del proceso infeccioso y su resultado, por lo que el análisis cuantitativo no se le asigna el último rol en el diagnóstico y el tratamiento de enfermedades en diversas formas y etapas.

Sin embargo, al conocer los estudios inmunorristosos, como el método IFA, ni siquiera pensamos en cómo logra cubrir una amplia gama de microorganismos que habitan en nuestro planeta, muchos de los cuales llevan una amenaza directa a la salud y la vida del hombre y los animales. . Y el hecho es que Elisa tiene muchas opciones (no competitivas y competitivas, directas y indirectas), cada una de las cuales resuelve su tarea y, por lo tanto, permite una búsqueda específica.

Para identificar inmunoglobulinas de una u otra clase, se usa un panel de poliestireno de 96 pocillos tradicional (tableta), en los pozos de los cuales las proteínas recombinantes de sorbo se concentran en la fase sólida. Un anticuerpo o suero de antígeno o antígeno, que cayó en un anticuerpo bien amable, encontrar un objeto "familiar" y formar un complejo con él (AG-AT), que, confiado al conjugado de enzimas, al leer los resultados se manifiesta con Un cambio en el color del pozo.

El análisis inmunoesimensional se lleva a cabo en los sistemas de prueba de cierta especificidad, fabricado en laboratorios especiales y está equipado con todos los componentes de reaccionación necesarios. Los estudios se pueden realizar con la ayuda de las lavadoras ("Voshor") y los espectrofotómetros de lectura, donde el trabajo manual está involucrado principalmente involucrado. En las máquinas automáticas completas, con una manera de laboratorio de la instilación monótona, el lavado y otros casos de rutina, por supuesto, el trabajo más rápido y más conveniente, pero no todos los laboratorios pueden permitirse un lujo y continuar trabajando de manera antigua, en semi- automático.

La interpretación de los resultados de la IFA está dentro de la competencia de un médico de diagnóstico de laboratorio, y se tiene necesariamente en cuenta e inherente a casi todas las reacciones inmunoquímicas para dar respuestas falsas positivas o falsas negativas.

Video: Análisis inmunal moderno.

Ifa resultados en el ejemplo de la sífilis

El análisis de enzimas Immuno es adecuado para identificar todas las formas.Además, se utiliza en la investigación de detección. Para el análisis, se usa la sangre venosa del paciente, tomando un estómago vacío. El documento utiliza tabletas con una especificidad específica (en las clases A, M, G) o anticuerpos totales.

Teniendo en cuenta el hecho de que en la sífilis se produce en una secuencia específica, el ELFA puede responder fácilmente a la pregunta cuando se produjo la infección y en qué etapa es el proceso, y la decodificación de los resultados obtenidos puede presentarse en el siguiente formulario:

• IgM indica la duración del proceso infeccioso (puede aparecer cuando se agravan las enfermedades inflamatorias crónicas);
• El estado de IGA que la infección ocurrió hace más de un mes;
• IgG sugiere que la infección está en plena marcha o en el tratamiento recientemente, que se descubre fácilmente al recoger anamnesis.

Al analizar la sífilis, los pocillos con una respuesta negativa (y control negativo) permanecerán incoloros, mientras que un resultado positivo (así como un control positivo) dará una tinción amarilla brillante debido a los cambios en el color del cromógeno agregado durante el estudio. Sin embargo, la intensidad del color no siempre coincide con el control, es decir, puede ser un poco más pálido o ligeramente amarillento. Estos son resultados dudosos, que, por regla general, están sujetos a reexaminar con el obligatorio teniendo en cuenta los indicadores cuantitativos obtenidos en el espectrofotómetro, pero en general, el color está en la dependencia proporcional directa del número de complejos inmunes (el asociado AG y AT).

Los análisis más emocionantes de los inmunoensayos - IFA en el VIH

El análisis de, quizás, más que otros, es interesante en una amplia gama de personas, ya que aún no tiene confianza afirmar que muchos problemas sociales han desaparecido (prostitución, adicción a las drogas, etc.). Desafortunadamente, el VIH afecta no solo a estas capas de la sociedad humana, es posible infectarse en diferentes circunstancias que no están relacionadas con el sexualismo o la ingesta de drogas. Pero, si surgió la necesidad de encuestas contra el VIH, no debería temer que todos aprendieron a visitar un laboratorio de este tipo. Ahora las personas infectadas por el VIH están protegidas por la ley, y los dudos pueden ponerse en contacto con las oficinas anónimas, donde puede resolver el problema sin temor a la publicidad y la condena.

Un método inmununal utilizado para diagnosticar la infección por VIH se relaciona con los estudios de estándares primarios que, sin embargo, requieren condiciones especiales, ya que el tema es muy delicado.

IFA sobre el VIH tiene sentido después del contacto sexual, las transfusiones de sangre, otras manipulaciones médicas que involucran a la infección, y al final del período de incubación ("Ventana seronegativa"), pero debe tenerse en cuenta que este período de tiempo no es constante. Puede terminar de 14 a 30 días, y puede continuar hasta seis meses, por lo que el valor promedio se toma el intervalo de 45 a 90 días. Para el VIH, la sangre se entrega de la misma manera que otras infecciones, desde Viena en un estómago vacío. Los resultados se prepararán dependiendo de la acumulación de material en el laboratorio y su carga de trabajo (de 2 a 10 días), aunque la mayoría de las veces el laboratorio proporciona una respuesta el mismo día o el siguiente.

¿Qué se puede esperar de los resultados del VIH?

IFA Sobre la infección por VIH define los anticuerpos a dos variedades del virus: VIH-1 (más comunes en Rusia y otros países de Europa y Asia) y el VIH-2 (ocurriendo más a menudo en el territorio de África Occidental).

La tarea de IFA VIH es la búsqueda en la clase G, que se detecta en todos los sistemas de prueba, pero en un período posterior, y en las clases A y M, detectadas en pruebas recombinantes de una nueva generación, lo que le permite encontrar anticuerpos en el Etapas primeras (período de incubación - "Ventana seronegativa"). Desde IFA, puede esperar las siguientes opciones de respuesta:

1. Resultado positivo principal: la sangre está sujeta a la reclamación en un sistema de prueba del mismo tipo, pero si es posible, otra serie y otra persona (asistente de laboratorio);
2. Repetido (+) implica una nueva ingesta de sangre en un paciente con un estudio como el análisis primario;
3. Otro resultado positivo está sujeto a análisis de referencia, que utiliza kits de prueba altamente específicos (2-3 PC.);
4. Se envía un resultado positivo en los sistemas (o en tres) a la inmunoteca (la misma ELISA, pero se realizan individualmente para pruebas de conjuntos especiales de especificidad).

La conclusión de la infección por VIH se realiza solo sobre la base de la inmunoteca. Se lleva a cabo una conversación con infectada en total confidencialidad. La divulgación del secreto médico en Rusia, así como, en otros países, está sujeto a un castigo penal.

Los análisis sobre la clamidia y el citomegalovirus por el método inmunununimal también obtuvieron una popularidad particular, debido al hecho de que permiten determinar el tiempo de infección, la etapa de la enfermedad y la efectividad de las medidas terapéuticas.

Al introducir, también puede observar la aparición de anticuerpos de varias clases. En diferentes fases de la condición patológica causada por el agente infeccioso:

• El IGM se puede descubrir durante siete años después de las infecciones;
• La IGA dice que la infección en el cuerpo ha estado viviendo durante más de un mes;
• IgG Confirme que el diagnóstico de la clamidia, ayuda a seguir el tratamiento y determinar su efectividad. Cabe señalar que los anticuerpos de Clase G permanecen y circulan en el cuerpo, independientemente de la prescripción de la enfermedad, por lo tanto, para descifrar adecuadamente el análisis, los valores de referencia (normas), que, por cierto, para cada KDL de Los suyos son: teniendo en cuenta la marca del sistema de prueba y la especificidad de los reactivos incluidos en el conjunto. Los valores de la norma se ajustan al espacio en blanco al lado del resultado del ELISA.

En cuanto, es algo diferente: Los anticuerpos de clase M aparecen aproximadamente después de un mes y medio, es decir, un resultado positivo (IgM +) se convierte en la fase de infección primaria o cuando se reacciona en una infección oculta y sigue siendo uno de 4 meses a seis meses.

La presencia de en clase G es característica de iniciar una infección o reinfección aguda primaria. El análisis establece que el virus tiene lugar, sin embargo, la información es en la que se encuentra el proceso infeccioso, no da. Mientras tanto, la definición del título de IgG también causa dificultades, ya que depende completamente del estado inmunológico de una persona en particular, que, sin embargo, se establece mediante la identificación de inmunoglobulinas de clase G. Dado el comportamiento de los anticuerpos, al diagnosticar el CMWI , es necesario evaluar las habilidades de los anticuerpos de clase G para interactuar con CMV, luego a "neutralizarlo" (Avidez en). En la etapa inicial, la enfermedad de IgG está muy mal asociada con antígenos de virus (baja avidez) y solo comienzan a mostrar actividad, es posible hablar de aumentar la avidez de los anticuerpos.

Puede hablar sobre las ventajas del análisis inmunoformo durante mucho tiempo y mucho, porque este método logró resolver muchas tareas de diagnóstico utilizando solo sangre venosa. Ya no necesita largas expectativas, emoción y problemas con la cerca del material para el estudio. Además, el sistema de prueba IFA continúa mejorando y el día no está lejos de la esquina cuando la prueba dará una precisión del 100% del resultado.

Video: Película de aprendizaje MGMU. Sechenov sobre los conceptos básicos de IFA

Propietarios de patentes RU 2283497:

La invención se refiere al campo de la biotecnología y la medicina. Un sistema de prueba de inmunoafector para identificar el espectro de anticuerpos al virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) de los primeros y segundos tipos, el primer tipo de grupo O y la detección del antígeno al virus de inmunodeficiencia humana del primer tipo P24 incluye una base inmunoestorbente. en antígenos de un virus de inmunodeficiencia humana que representa GP41 (ENV HIV-1 y VIH-2 grupos O), GP120 (ENV), P24 (GAG), P31 (POL), GP36 (ENV VIH-2), anticuerpos contra el antígeno del VIH 1 P24, y detectando reactivos, mientras que los antígenos de VIH mencionados anteriormente y los anticuerpos contra el VIH creados en diferentes pocillos de tabletas para inmunoensayo de enzimas, y placas placas de poliestireno o sinitelular de 96 pocillos. La invención proporciona un aumento en la sensibilidad, la simplificación, la eliminación de la subjetividad de la evaluación de los resultados. 1 Z.P. F-Lies, 10 Tab., 1 IL.

La invención se refiere al campo de la biotecnología y la medicina. Uso: Detección diferenciada de todas las clases de anticuerpos específicos a las proteínas de virus de inmunodeficiencia humana 1 y 2, HIV 1 Grupo O y antígeno R24 VIH 1.

Esencia: obteniendo un sistema de prueba inmunoformo para identificar el espectro de anticuerpos de todas las clases a proteínas individuales y VIH 1 y 2, HIV 1 Grupo O y antígeno R24 VIH 1 en suero (plasma) de sangre, inmunoglobulinas y preparaciones de sangre humana con el fin de Identifique el espectro de anticuerpos contra el VIH 1 y 2, el Grupo O VIH 1 O, la detección del antígeno P24 VIH 1 y la confirmación de los resultados positivos o dudosos de la detección en los anticuerpos al VIH 1 y 2, el VIH 1 Grupo O y el antígeno P24 VIH 1.

Descripción de la invención.

Los diagnósticos de laboratorio de la infección por VIH se basan en tres direcciones: a) Indicación del VIH y sus componentes; b) Detección de anticuerpos contra el VIH; c) Determinar los cambios en el sistema inmunológico. Entre los métodos existentes de diagnósticos de laboratorio son la identificación serológica más común de los anticuerpos a los antígenos de virus.

Un análisis inmununimenal (IFA) y la inmunoteca (IB) se utiliza principalmente para identificar los anticuerpos en la infección por VIH. En el corazón de la Elisa se encuentra la inmovilización de antígenos virales en las tabletas, con las que se asocian los anticuerpos del paciente, y el complejo antígeno del antígeno se detecta utilizando el anticuerpo del ratón conjugado con la peroxidasa a las inmunoglobulinas g y los humanos. El método es bastante específico y sensible y le permite identificar anticuerpos de VirusEspecíficos en el 95% de los pacientes. El 5% restante de los casos cae en las primeras etapas de la infección cuando los anticuerpos séricos siguen siendo pequeños o las fases terminales de la enfermedad, cuando el cuerpo ya no puede sintetizar los anticuerpos debido al agente agotamiento del sistema inmunológico. Los resultados falsos positivos de la ELISA también son posibles, principalmente en pacientes con enfermedades autoinmunes y oncológicas, así como en infección causada por el virus de Ashpectina Barr. Al mismo tiempo, existe una reacción cruzada de anticuerpos contra el factor reumatoide, virus epstein-Barr, o determinantes antigénicos, similares a las proteínas de la clase principal del complejo de histocompatibilidad 1 y 2 (HLA-4 y DQW3) y con el Capacidad para comunicarse con antígenos del VIH. Los resultados positivos falsos a menudo se observan en mujeres embarazadas y las personas mayores. La hemólisis, la lipemia, la contaminación bacteriana en suero también pueden causar resultados poco fiables.

A este respecto, se proponen una serie de métodos y se utilizan para verificar la especificidad de los resultados de la detección de anticuerpos. De estos métodos, la reacción de "transferencia inmune" se usa con mayor frecuencia en la modificación "Blot Western Blot". La esencia del método es la siguiente: En la primera etapa, se produce la separación de proteínas del VIH para el peso molecular que utiliza electroforesis en el gel de poliacrilamida. Luego se lleva a cabo la transferencia electroforética del gel de poliacrilamida a la superficie de la membrana de nitrocelulosa. Los antígenos transferidos de esta manera se detectan en la membrana utilizando análisis indirecto: la membrana se incuba con el material en estudio; Los anticuerpos están asociados con antígenos de VIH transferidos a la membrana de nitrocelulosa, luego las tiras de membrana se incuban con un conjugado; Cuando se forma el complejo de anticuerpos antígeno, el conjugado se une, después del lavado del conjugado y la incubación con el sustrato, hay tinción de aquellas áreas de nitrocelulosa, donde se produjo la formación del complejo antígeno - conjugado. El dibujo presenta ejemplos de resultados de inmunotraBlot positivo, débil y negativo.

En el suero de personas infectadas con VIH-1 y VIH-2, detectan anticuerpos a las siguientes proteínas (P) y glicoproteínas (GP): Tabla A.

La tabla presenta los criterios para evaluar los resultados de la transferencia inmune, recomendada por la OMS y el Centro Ruso para la Prevención y el Control del SIDA.

Sobre la base de los criterios de la OMS, los suero se consideran positivos, en los que los anticuerpos a cualquiera de las dos proteínas de la concha de VIH-1 detectan. Si hay una reacción con una de las proteínas de la cáscara (GP160, GP120, GP41), en combinación con una reacción con otras proteínas, o sin ella, el resultado se considera dudoso. Según el Centro Federal Científico y Metodológico del Ministerio de Salud de la Federación de Rusia para la Prevención y el Control de SIDA, es posible interpretar a los suero como positivos y en presencia de anticuerpos solo a una proteína de cáscara.

La detección de anticuerpos contra el antígeno P24 puede indicar durante el período del inicio de la seroconversión, ya que los anticuerpos son precisamente los primeros en esta proteína. Las reacciones positivas con la gag y las proteínas POL sin una reacción con proteínas ENV pueden reflejar la etapa de seroconversión temprana, así como también indicar la presencia de la infección por VIH-2 o la respuesta no específica.

El uso en el diagnóstico del VIH, ya que un método experto de reacción de inmunotransferencia tiene una serie de inconvenientes significativos:

1. La incapacidad de confirmar la detección del Antígeno P24 VIH 1 en el caso de usar pruebas que determinan el antígeno y los antígenos y los anticuerpos del VIH, lo que lo hace impracticable (sin sentido). Uso como pruebas de detección para detectar simultáneamente el antígeno y los anticuerpos al VIH ( Orden del Ministerio de Salud de la Federación Rusa No. 292 de 30.07. 2001: "Para examinar los donantes en las estaciones de transfusión de sangre, es necesario usar sistemas de prueba que revelen antígenos y anticuerpos al VIH simultáneamente).

2. Detección de anticuerpos solo clase IgG. Es imposible confirmar completamente los resultados positivos obtenidos utilizando las pruebas 3 y 4 de generaciones (detectando anticuerpos IgG y IgM).

3. La subjetividad de la interpretación de la evaluación de la prueba, especialmente en los casos de resultados "dudosos" y "inciertos" y en las etapas iniciales de la seroconversión (las tiras detectadas en las membranas de nitrocelulosa en estos casos son borrosos, apenas visibles a simple vista y los desacuerdos se observan a menudo en la evaluación de varias personas).

4. La imposibilidad de una evaluación cuantitativa automatizada de los resultados del análisis.

5. menor sensibilidad en comparación con IFA.

6. Distribución del almacenamiento (al almacenar una tira de membrana de nitrocelulosa se desvanece y no puede ser una confirmación objetiva de identificar o detectar el VIH en casos controvertidos).

7. Dificultad en la reacción y el almacenamiento (las tiras de membrana de nitrocelulosa son muy frágiles y, a menudo, se rompen).

8. Alto costo de los conjuntos de IB.

Se conoce un reactivo por la definición simultánea de antígenos y anticuerpos contra el mismo patógeno, incluido el VIH (DE 4236189 F1, 04/28/1994). Sin embargo, el sistema de prueba no se revela, lo que permite diagnosticar la infección por VIH en varias etapas.

El objetivo de la presente invención es obtener un sistema de prueba, con la ayuda de los cuales la posibilidad de confirmar los resultados positivos o dudosos de los estudios de detección de los anticuerpos contra el VIH 1 y 2, el VIH 1 y el antígeno del VIH 1, al usar pruebas para Se logra la detección simultánea de antígenos y anticuerpos.

La solución técnica propuesta se logra mediante un sistema de prueba de inmunoopimen para identificar el espectro de anticuerpos al virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) del primer y segundo tipo, el primer tipo de grupo O y la detección del antígeno P24 al virus de la inmunodeficiencia humana de la primera Tipo P24, caracterizado porque incluye virus de inmunodeficiencia humana basada en antígenos que representa el GP41 (ENV HIV-1 y los grupos HIV-2 O), GP120 (ENV), P24 (GAG), P31 (POL), GP36 (ENVH VIH- 2), anticuerpos contra el antígeno del VIH 1 P24 y reactivos de detección, mientras que los antígenos de VIH mencionados anteriormente y los anticuerpos contra el VIH están hablando en diferentes pocillos para un inmunoensayo enzimático.

Además, se utilizan placas plegables o placas pocointelulares de poliestireno de 96 pocillos para el análisis inmununimal.

El resultado técnico logrado por la presente invención consiste en la posibilidad de confirmar los resultados positivos sobre los anticuerpos contra el VIH 1 y 2, el VIH 1 del grupo O y el antígeno P24 VIH 1, la alta sensibilidad, la posibilidad de la interpretación automatizada de los resultados, Lo que elimina la subjetividad de la evaluación, la simplicidad de las pruebas menores en comparación con los conjuntos existentes de costo IB.

Esta solución técnica es diferente de los conocidos:

1. Use como una tableta portadora de fase sólida para las reacciones inmunológicas.

2. Uso simultáneo como sorbente de anticuerpo a R 24 VIH y un conjunto de antígenos de VIH.

La invención se ilustra mediante el siguiente ejemplo.

El inicio actual del sistema de prueba desarrollado "DS-IFA-Anti-HIV 1,2-SPECTRUM + AG P24 VIH 1" son:

InmunoSorbente: antígenos recombinantes, similares a las proteínas estructurales de VIH-1: GP41 (ENV HIV-1 y HIV 1 Grupo O), GP120 (ENV), P24 (GAG), P31 (POL), VIH-2: GP36 (ENV ) y anticuerpos monoclonales del ratón al VIH 1 (P24), sorbed por separado en las tiras de una tableta plegable de poliestireno.

Para preparar un uso inmunosorbente:

1. VIH-1 GP41 - Proteína producida por la cepa E. coli No. YaIV 103.

2. VIH-1 GP120 - proteína producida por la cepa E. coli No. YaIV 109.

3. VIH-1 P24 - Proteína producida por la cepa E. coli No. YaIV 105.

4. VIH-1 P31 - Proteína producida por la cepa E. coli No. YaIV 108.

5. VIH-2 P36 - Proteína producida por la cepa E. coli No. YaIV 106.

Conjugado 1, liofilizado o líquido - anticuerpos de ratón monoclonal a antígeno R24 HIV1 conjugado con biotina.

1. Conjugado 2, liofilizado o líquido, es una mezcla de antígenos recombinantes similares a las proteínas estructurales del VIH-1: GP41 (ENV VIH-1 y VIH 1 del grupo O), GP120 (ENV), P24 (GAG), P31 (PO1); VIH-2: GP36 (ENV) conjugado con biotina;

2. conjugados 3, 4 - liofilizado o líquido - estreptavidina, etiquetada con la peroxidasa de Chren;

Durante los estudios preliminares, se eligió el diseño del sistema de prueba, se elaboró \u200b\u200bla tecnología de preparación de sus componentes, se optimizaron las condiciones para realizar una reacción de inmunoferento.

Al instalar el ELISA en el sistema de prueba "DS - IFA - Anti-VIH 1,2-espectro + AG P24 VIH 1" En los pocillos de una tableta con anticuerpos de sorbed a P24, 25 μl de conjugado-1 se llevan a los pozos , y en los pozos con antígenos de sorbed, en 25 μl de conjugado-2. El esquema de la formulación de reacción se muestra a continuación. A continuación, se agregan 25 μl de la muestra en estudio a cada pocillo. Al mismo tiempo, en los pozos con antígenos, el color cambia de naranja en rosa, y en un pozo con anticuerpos, con verde en gris. La mezcla se incuba 45 minutos a 37 ° C en una coctelera (o 1 hora a 37 ° C en un termostato). Luego, sin lavarse, 50 μl de conjugado-3 se lleva a los orificios de la tableta para determinar el antígeno P24, y en los pozos para determinar los anticuerpos de 50 μl de conjugado-4. Después de la incubación durante 20 minutos a 37 ° C en una coctelera (o 30 minutos a 37 ° C en un termostato), la tableta se lavó y exhibió la mezcla de sustrato. Tiempo total de reacción 1 H 25 min (o 1 h 50 min). El antígeno P24 presente en la muestra estudiada se asocia con anticuerpos monoclonales a P24, y los anticuerpos específicos forman un complejo con antígenos recombinantes en la tableta. El complejo inmune anti-P24 resultante con P24 se detecta mediante conjugados anti-P24-biotina, luego la peroxidasa de estreptavidina y los complejos inmunes del VIH con el conjugado AT-VIH - AG-Biotina, luego la estreptavidina peroxidasa.

El esquema de la formulación de reacción.

Los resultados de la contabilidad se realizan espectrofotométricamente a dos longitudes de onda: 450/620-680 nm con el ajuste del instrumento "por aire". Supongamos que los resultados de los resultados en una longitud de onda de 450 nm.

Los resultados del análisis se tienen en cuenta si los valores promedio de la densidad óptica (OP) en los pozos con k, no más de 0.2, en los pocillos con K +, no más bajo que 1.0. CRITO OP. Calcule por la fórmula:

CRITO OP. gp41 \u003d cf. Firmar OP K- (GP41) +0.15

CRITO OP. Gp120 \u003d wed. Firmar OP K- (GP120) +0.15

CRITO OP. P24 \u003d miércoles. Firmar Op K- (P24) +0.15

CRITO OP. p31 \u003d cf. Firmar Op K- (P31) +0.15

CRITO OP. gp36 \u003d cf. Firmar OP K- (GP36) +0.15

CRITO OP. Ag p24 \u003d miércoles. Firmar Op K- (AG P24) +0.04

cuando 0.15 y 0.04 son los coeficientes establecidos por el método de procesamiento estadístico en el fabricante. En el proceso de desarrollo del sistema de prueba, se utilizó:

1. Muestras de donantes sanos de suero en la sangre (n \u003d 610).

2. Muestras de pacientes en suero sanguíneo con diversas enfermedades infecciosas que no están asociadas con el VIH (orz, neumonía, angina, infecciones herpéticas y citomegalovirus, sífilis, clamidia, hepatitis viral A, B y C (n \u003d 224)).

3. Muestras de sueros de sangre de pacientes con diferentes enfermedades no transmisibles: lesiones, enfermedades del sistema cardiovascular, oncología (n \u003d 35).

4. Muestras de sangre sérica de mujeres embarazadas (n \u003d 40).

5. Muestras de sangre sérico seropositiva en ELISA y confirmadas en inmunotoblo (n \u003d 428).

6. Muestras de suero con un resultado positivo obtenido en sistemas de prueba inmunoformos para determinar simultáneamente los anticuerpos contra el VIH 1,2 y el antígeno P24, y un resultado incierto del inmunotoblo (n \u003d 123).

7. Panel interno de suero que contiene y no anticuerpos al VIH 1.2, probado en registrado por el Ministerio de Salud de los Sistemas de Pruebas de Inmunoferment de la Federación de Rusia e InmunoBlot (n \u003d 21).

8. Standard "HIV 1 Antigen estándar", "Bio Rad", Francia, gato. No. 72217, que es un antígeno derivado del lisado viral.

9. Norma interna de la empresa. Una muestra que contiene P 24 antígeno a una concentración de 200 pg / ml obtenidos del lisado viral y refinado de acuerdo con el estándar "estándar del antígeno del VIH 1" de la compañía "BIO RAD", Francia, gato. №72217.

10. Panel de suero estándar que contiene anticuerpos al virus de inmunodeficiencia humana de primer tipo (VIH 1) - OSO 42-28-212-93-02P, "Unión médica y biológica", Novosibirsk.

11. Panel de suero estándar que contiene anticuerpos a un virus de inmunodeficiencia humana de segundo tipo (VIH 2) - OSO-42-28-216-02P, "Unión médica-biológica", Novosibirsk.

12. Panel de suero estándar que no contiene anticuerpos contra virus de inmunodeficiencia humana del primer tipo y segundo (VIH 1, 2) - OSO-42-28-214-94-02P, "Unión médica y biológica", Novosibirsk.

Se realizó una evaluación de la sensibilidad del sistema de prueba durante la detección del antígeno P24 utilizando el estándar estándar de antígeno del VIH I, BIO RAD, el estándar interno de la empresa. Cuando se utiliza la norma interna, se prepararon 4 diluciones consecutivas de 2 veces de 40 pg / ml a 5 pg / ml con un plasma de donante normal que no contiene anticuerpos contra el VIH 1, 2, como una etapa. La menor cantidad de antígeno detectado se tomó para el criterio de sensibilidad. Los datos obtenidos se presentan en la Tabla 1.

Para estimar la sensibilidad del sistema de prueba durante la detección de anticuerpos específicos, se utilizaron paneles estándar de muestras que contienen anticuerpos al virus de la inmunodeficiencia (VIH 1, 2) (OSO 42-28-212-93-02P S.012, OSO 42-28 -216- 02P (VIH 2) de.003).

Los datos obtenidos se presentan en las Tablas 3, 4.

Se realizó una comparación de la eficiencia diagnóstica del sistema de prueba "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + AGR24 VIH 1" con los sistemas de prueba "JENSKRIN-HIV-AG / AT" (BIO-RAD), "DIA -Hiv 1/2 "(DIAPROF-MIEL)," VIRO-VIA-FORMULARIO II AG / AG / AM "(Biomerioux)," VIH1.2 DSM "(MBS)," MBS), "MBS)," Amercard anti HIV-1,2 K " ), "VIH-1, VIH-2-IFA AVICENNA" (Avicenna). Para esto, se probaron muestras de suero del panel interno en todas las pruebas específicas. Los resultados presentados en la Tabla 5 indican la alta eficiencia de diagnóstico "DS-IFA-anti-VIH 1.2-Spectrum + AG24 VIH 1".

Los estudios de la sensibilidad del sistema de prueba "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + AG24 VIH 1" también se llevaron a cabo con suero de pacientes confirmados en inmunoblot como VIH positivo. Probado 428 muestras de tales suero. Se obtuvieron varias opciones para detectar anticuerpos a diferentes proteínas de VIH y antígeno P24. Los resultados se presentan en la Tabla 6.

Al probar muestras positivas del VIH 1, el 3% de los suero demostraron una reacción positiva con GP36 (ENV VIH 2). OP / OPKRIT. En estas muestras no superó los 2.0. Nuestros datos sobre la reactividad cruzada de la cubierta exterior del VIH 1 (GP41) y el VIH 2 (GP36) coinciden con los datos de la literatura.

interpretación de resultados

Análisis de la prueba de suero y muestras VIH positivos de paneles estándar e internos en "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + AG24 VIH 1" permitió desarrollar criterios para interpretar los resultados de esta prueba. Los criterios recomendados se muestran en la Tabla 7.

Sobre la base de estos criterios, todas las muestras de sueros VIH positivo (n \u003d 428) se definen como positivos y en "DS-IFA-ANTI-HIV 1.2-SPECTRUM + AG24 HIV1". De las 16 muestras de un panel estándar que contiene anticuerpos al VIH 1, 14 se definen como positivas y 2 como vagas. Las 8 muestras de un panel estándar que contiene anticuerpos al VIH 2 se definen como positivas. De las 10 muestras del panel interno que contiene anticuerpos al VIH 1, 7 se definen como positivas y 3 como vagas.

Las pruebas de sensibilidad del sistema de prueba "DS-IFA-ANTI-VIH 1,2-SPECTRUM + AGRA24 VIH 1" también se llevaron a cabo con suero de pacientes con un resultado positivo en los sistemas de prueba inmunoamimensionales, detectando simultáneamente los anticuerpos y el antígeno P224, e incierto en inmunotransporte. Probado 123 de tales muestras. Los datos se presentan en la Tabla 8.

Al probar los suero con un resultado inmunobloque indefinido (n \u003d 123) en "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + AG24 VIH 1" 72 muestra (58.5%), se demostró un resultado positivo. De estos, 26 sueros (21.1%) son positivos solo por P24, 20 (16.3%), solo en anticuerpos, 16 (13%), según P24 con anticuerpos a una de las proteínas, 10 (8.1%), según P24 con anticuerpos a dos o más de las proteínas. Por lo tanto, las pruebas solo en los anticuerpos (sin la detección de P24) determinarían como una positiva 30 muestras (24.4%). La detección en la prueba del antígeno P24 hizo posible determinar como una muestra positiva adicionalmente 42 (34.1%).

Para estimar la especificidad del sistema de prueba, se usó un panel de sueros estándar que no contiene anticuerpos contra el VIH 1, 2 (n \u003d 20); Muestras de suero donantes saludables (n \u003d 610), muestras de pacientes de suero sanguíneo con diferentes enfermedades infecciosas (n \u003d 224), no relacionadas con el VIH; Muestras de pacientes de suero sanguíneo con varias enfermedades no transmisibles: lesiones, enfermedades del sistema cardiovascular, oncología (n \u003d 35); Muestras del suero sanguíneo de mujeres embarazadas (n \u003d 40). Probado 929 muestras. Una muestra de los donantes sanos del suero sanguíneo mostró un resultado falso positivo: se revelaron los anticuerpos contra GP41 y P24. 7 Las muestras de donantes sanos de suero en la sangre y 2 muestras de pacientes de suero en la sangre con enfermedades infecciosas que no están asociadas con el VIH mostraron un resultado positivo falso por P24.

Para estimar la especificidad del sistema de prueba, se utilizó un panel estándar de muestras negativas (OSO 42-28-214-94-02P, desde.009). La especificidad fue del 100%.

Por lo tanto, los estudios han demostrado que la especificidad del sistema de prueba "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + AGR24 VIH 1" es del 99% en el estudio de muestras del suero sanguíneo de los donantes normales y los pacientes con varios infecciosos. y enfermedades somáticas.

Los datos obtenidos muestran la alta eficiencia de diagnóstico del sistema de prueba desarrollado "DS-IFA-Anti-HIV 1.2 Spectrum + AG24 VIH 1". El sistema de prueba se puede usar para detectar anticuerpos a proteínas separadas de los tipos de VIH 1 y 2 y el antígeno R24 VIH1 para confirmar el resultado positivo de los sistemas de prueba de detección que detectan anticuerpos o sistemas de prueba que están detectando simultáneamente los anticuerpos y el antígeno P24 HIV1. El sistema de prueba se puede utilizar como una prueba de inmunotrablot alternativa para confirmar los resultados positivos, así como para los estudios de la dinámica de los anticuerpos al VIH y el antígeno P24 en diferentes etapas de infección.

Ventajas de la masa

1. Confirmando la prueba de inmunoferment del formato de la tableta.

2. Confirmar la prueba, combinando la determinación del espectro de anticuerpos VIH 1, 2 y antígeno P24 VIH 1

3. Detección de anticuerpos de todas las clases IG.

4. Sensibilidad durante la detección P24 al menos 5 pg / ml

5. Le permite reducir el número de resultados inciertos en comparación con ImmunoBlot

6. Tiempo de análisis - 1 H 25 min (ImmunoBlot - de 3 a 20 horas)

7. Evaluación visual de la introducción de todos los componentes y muestras.

1. Sistema de prueba inmunoamunimal para identificar anticuerpos contra el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) de los primeros y segundos tipos, del primer tipo de grupo O y la detección del antígeno P24 al virus de la inmunodeficiencia humana del primer tipo P24, caracterizado en que incluye un inmunosorbente basado en el antígeno del virus de la inmunodeficiencia a una persona que representa GP41 (ENV HIV-1 y los grupos HIV-2 O), GP120 (ENV), P24 (GAG), P31 (POL), GP36 (ENV VIH-2), Los anticuerpos contra el antígeno del VIH 1 P24 y los reactivos de detección, mientras que los antígenos de VIH mencionados anteriormente y los anticuerpos contra el VIH están hablando en diferentes pocillos para inmunoensayo de enzimas.

2. El sistema de prueba de inmunoferment según la reivindicación 1, caracterizado porque la sorción utiliza placas placibles o inintellulares de poliestireno de 96 pocillos para un inmunoensayo enzimático.

El diagnóstico oportuno de la infección por VIH se convierte en una medida extremadamente importante, ya que anteriormente el inicio del tratamiento puede predeterpar en gran medida el desarrollo posterior de la enfermedad y extender la vida útil del paciente. En los últimos años, se ha observado un progreso significativo en el campo de identificar esta terrible enfermedad: los métodos más avanzados, los métodos de encuesta vienen a reemplazar los sistemas de prueba antiguos, y su precisión aumenta significativamente.

En este artículo, contaremos sobre los métodos modernos para diagnosticar la infección por VIH, que es útil para el tratamiento oportuno de este problema y mantener la calidad de vida normal de la enfermedad.

Técnicas de diagnóstico del VIH

En Rusia, se lleva a cabo un procedimiento estándar para el diagnóstico de la infección por VIH, que incluye dos niveles:

• Sistema de prueba ELISA (análisis de detección);
• blot inmune (IB).

Otras técnicas también se pueden aplicar a los diagnósticos:

• pruebas expresas.

Sistema de prueba IFA

En la primera etapa de diagnósticos, se usa una prueba de detección (ELISA) para detectar la infección por VIH, que se basa en las proteínas del VIH creadas en los laboratorios, capturando los anticuerpos específicos generados en el cuerpo en respuesta a la infección. Después de su interacción con reactivos (enzimas), el sistema de prueba cambia el color del indicador. A continuación, estos cambios de color se procesan en un hardware especial, lo que determina el resultado del análisis realizado.

Dichas pruebas de IFA pueden mostrar el resultado después de unas semanas después de la introducción de la infección por VIH. Este análisis no determina la presencia de un virus, sino que revela la producción de anticuerpos. A veces, en el cuerpo humano, la producción de anticuerpos contra el VIH comienza después de 2 semanas el campo de la infección, pero la mayoría de las personas se producen en plazos posteriores, después de 3 a 6 semanas.

Hay cuatro generaciones de pruebas de IFA con diferentes sensibilidad. En los últimos años, los sistemas de prueba III y las generaciones IV a menudo se usan, que se basan en péptidos sintéticos o proteínas recombinantes y tienen mayor especificidad y precisión. Se pueden usar para diagnosticar la infección por VIH, monitorear la prevalencia del VIH y la seguridad al verificar la sangre del donante. La precisión de los sistemas de prueba IFA III y la generación IV es de 93-99% (pruebas más sensibles que se producen en países occidentales, 99%).

Para la ejecución de la prueba IFA, se toman 5 ml de sangre de las venas del paciente. Entre la última comida y el análisis deben tomar al menos 8 horas (como regla general, se realiza por la mañana en un estómago vacío). Se recomienda tal prueba para no tomar no antes de 3 semanas después de la supuesta infección (por ejemplo, después de las relaciones sexuales sin protección con una nueva pareja sexual).

Los resultados de las pruebas de IFA se obtienen en 2-10 días:

• resultado negativo: indica la falta de infección por VIH y no requiere acceso a un especialista;
• resultado falso negativo: se puede observar en los primeros términos de la infección (hasta 3 semanas), en las etapas posteriores de SIDA con una pronunciada supresión de la inmunidad y con una preparación de sangre realizada incorrectamente;
• resultado falso positivo: se puede observar en ciertas enfermedades y con una preparación de sangre realizada incorrectamente;
• resultado positivo: indica la infección de la infección por VIH, requiere IB y la circulación de un paciente a un especialista en el Centro de SIDA.

¿Por qué una prueba IFA da resultados falsos positivos?

Los resultados falsos positivos de las pruebas de IFA sobre el VIH se pueden observar con un procesamiento inadecuado en la sangre o en pacientes con tales condiciones y enfermedades:

• mieloma múltiple;
• enfermedades infecciosas provocadas por el virus Epstein-Barr;
• condición después;
• enfermedades autoinmunes;
• contra el fondo del embarazo;
• condición después de la vacunación.

Con las causas de sangre descritas anteriormente, pueden estar presentes los anticuerpos de reticulación no específicos, cuya producción no fue provocada por la infección por VIH.

En los últimos años, la frecuencia de los resultados falsos positivos ha disminuido significativamente debido al uso de los sistemas de prueba de generación III y IV, que contienen péptidos más sensibles y proteínas recombinantes (se sintetizan con ingeniería genética in vitro). Después del inicio del uso de dichas pruebas de IFA, la frecuencia de los resultados falsos positivos ha disminuido significativamente y es de aproximadamente 0.02-0.5%.

La identificación de un resultado falso positivo no significa que una persona esté infectada con el VIH. En tales casos, que recomienda otra prueba de IFA (generación IV requerida).

La sangre del paciente se envía al laboratorio de referencia o arbitraje con una nota "Repetir" y se investiga en la generación IV IV del sistema IFA. Si el resultado de un nuevo análisis es negativo, entonces el primer resultado se reconoce como erróneo (falso positivo) y IB no se realiza. Con un resultado positivo o dudoso, durante la segunda prueba, el paciente se le asigna necesariamente para realizar un IB después de 4-6 semanas para confirmar o refutar la infección por VIH.

Incorrecta inmune

El diagnóstico final de la infección por VIH se puede instalar solo después de recibir el resultado positivo de la transferencia inmune (IB). Utiliza una tira nitrocelulósica en la que se aplican las proteínas virales.

La valla de sangre para IB se realiza de las venas. A continuación, está sujeto a un procesamiento especial y proteínas contenidas en su suero se separan en un gel especial de acuerdo con su carga y peso molecular (la manipulación se lleva a cabo en equipos especiales bajo la influencia del campo eléctrico). Se impone una tira de nitrocelulosa en un gel de suero sanguíneo y bloqueo ("daño") en una cámara especial. La tira se procesa y si hay anticuerpos contra el VIH en los materiales utilizados, se asocian con rayas antigénicas en IB y se manifiestan como líneas.

IB se considera positivo si:

• según los criterios de los CDC estadounidenses, hay dos o tres líneas GP41, P24, GP120 / GP160;
• de acuerdo con los criterios de la FDA estadounidense, en la tira hay dos líneas P24, P31 y una línea GR41 o GR120 / GR160.

En el 99.9% de los casos, el resultado positivo del IB indica la infección por VIH.

En ausencia de líneas, IB es negativa.

Al identificar líneas con GR160, GR120 y GR41- IB, es dudoso. Este resultado se puede detectar en:

• enfermedades oncológicas;
• el embarazo;
• transfuses de sangre frecuentes.

En tales casos, se recomienda realizar un re-estudio utilizando un conjunto de otra empresa. Si, después de un IB adicional, el resultado sigue siendo dudoso, entonces es necesario observar durante seis meses (IB se celebra cada 3 meses).

Reacción en cadena de la polimerasa

La prueba en PCR puede determinar el ARN del virus. Su sensibilidad es lo suficientemente alta y le permite identificar la infección por VIH después de 10 días después de la infección. En algunos casos, la PCR puede dar resultados falsos positivos, ya que su alta sensibilidad puede reaccionar a los anticuerpos a otras infecciones.

Esta técnica de diagnóstico es costosa, requiere equipo especial y altas calificaciones de especialistas. Estas razones no permiten que lo realice con las pruebas masivas de la población.

PCR se aplica en tales casos:

• para identificar el VIH en los recién nacidos que nacieron de madres infectadas por el VIH;
• para identificar el VIH en el "período de la ventana" o con dudoso IB;
• controlar la concentración de VIH en la sangre;
• para la investigación de la sangre donante.

Solo en la prueba de PCR, el VIH no se realiza, pero se lleva a cabo como un método de diagnóstico adicional para resolver situaciones controvertidas.

Métodos expresios

Pruebas expresas cuyos resultados pueden evaluarse después de 10 a 15 minutos se convirtieron en una de las innovaciones en el diagnóstico del VIH. Los resultados más efectivos y precisos se obtienen utilizando pruebas inmunocromatográficas basadas en el principio de la corriente capilar. Son tiras especiales en las que se aplica la sangre u otros líquidos estudiados (saliva, orina). Si hay anticuerpos contra VIH, 10-15 minutos más tarde, aparece una tira de color y control en la prueba: un resultado positivo. Con un resultado negativo, solo aparece la tira de control.

Como después de las pruebas IFA, los resultados de las pruebas expresas deben ser confirmadas por el análisis IB. Solo después de esto puede ser diagnosticado con infección por VIH.

Hay conjuntos de expresiones para las pruebas en el hogar. Pruebe ORASURE TECHNOLOGIES1 (EE. UU.) FDA aprobado, vendido sin receta y se puede utilizar para identificar el VIH. Después de la prueba, en el caso de un resultado positivo, se recomienda al paciente para someterse a una encuesta en un centro especializado para confirmar el diagnóstico.

Las pruebas nacionales restantes aún no han sido aprobadas por la FDA y su resultado puede ser muy dudoso.

A pesar de que las pruebas expresas son inferiores a las pruebas de IFA de generaciones IV, se utilizan ampliamente para pruebas de población adicionales.

Puede pasar las pruebas para identificar la infección por VIH en cualquier centro policlínico, CRH o en centros de SIDA especializados. En Rusia, se llevan a cabo absolutamente confidenciales, o de forma anónima. Cada paciente puede contar con obtener asesoramiento médico o psicológico antes o después del análisis. Tendrá que pagar las pruebas de VIH solo en las instituciones médicas comerciales, y se cumplen en clínicas públicas y hospitales.

Sobre qué formas puede infectarse con la infección por VIH y qué mitos existen sobre las posibilidades de infectarse, lea

La mayor distribución hoy en día en el mundo fue recibida por SIDA, un virus de la subfamilia de retrovirus, también se llaman lentivirus, o "lento". De hecho, en el cuerpo humano, comienzan a mostrar actividad después de un tiempo relativamente largo, aproximadamente 10 años.

Hay una inmunodeficiencia del primer y segundo tipo. Pero puede hablar con seguridad de la expansión del primer virus de tipo. Encontrar en la sangre y unirse a la jaula que es responsable de la inmunidad, el virus comienza a multiplicarse rápidamente. Mientras que la molécula CD4, que es responsable de su reconocimiento, identifica a un enemigo astuto, tiene tiempo para infectar a todo el organismo. Por lo tanto, cuanto antes sea diagnosticarlo, mayor será la posibilidades del paciente para obtener un tratamiento oportuno y vivir más tiempo.

Si una persona tiene una razón para salir con SIDA, esto debe hacerse de inmediato. La mayoría de las veces, la base de dicho diagnóstico es la definición de anticuerpos contra la inmunodeficiencia: proteínas que ocurren como una reacción a la presencia de un virus, y comienzan a formarse en un período de 1,5 a 6 meses desde una posible infección. En consecuencia, es más conveniente subrayar el diagnóstico después de este período.

La cantidad de anticuerpos se determina utilizando el análisis llamado el nombre de Immunoferment (ELISA). Este método se confiaba, es relativamente preciso y altamente sensible, estos indicadores son más de 99, 5%. El mercado farmacéutico ofrece una serie de pruebas de diagnóstico para ELISA: Comisión de VIH, Anti-VIH 1 2, Anti-VIH, Combibst, Combibst, Combine Anti-VIH 1 2 D 0172. Estos sistemas de prueba pertenecen a la tercera generación. Desventaja de estos reactivos: no siempre detectan la enfermedad en términos tempranos. Una persona ya es portadora de virus, es potencialmente peligroso para los socios, pero los anticuerpos en la sangre aún no están presentes.

Los kits están equipados principalmente con el número de pruebas para pruebas anti-VIH 12 * 8 o 192. No se recomienda usarlos usted mismo. En la descripción de los medicamentos, se indica que su propósito principal es identificar la cantidad de anticuerpos para el SIDA de ambos tipos. Y también identificar anticuerpos de todas las clases para el SIDA. Si no hay anticuerpo, significa que la enfermedad no se diagnostica.

La cuarta generación de pruebas "ve", excepto los anticuerpos y los antígenos del SIDA, pueden detectar la infección antes de la tercera generación. Para la comparación: el antígeno VIH está en la sangre, a partir del quinto día, y los primeros anticuerpos no aparecen anteriormente que en un mes. El VIH 1, 2 AG / AC (KOMPLE 1) y VIH 1, 2 AG / AT (SET 2) pertenecen a las pruebas de 4ª generación. Aprovechando el conjunto de estos reactivos, se detectan anticuerpos contra el tipo 1, 2 y el antígeno P24, explorando el suero o el plasma de la sangre humana. Muchos países utilizan las pruebas ELISA de 4 generaciones, que también también causan el nombre del antígeno / anticuerpo, abreviado: ágata.

Las pruebas se realizan de forma anónima.

Descripción

Preparación

Indicaciones

interpretación de resultados

Descripción

Método de definición Análisis de enzimas Immuno (ELISA).

El material en estudio. Sangre de suero

Salida disponible a la casa.

Detección combinada de anticuerpos a los tipos de VIH 1 y 2 y antígeno R24 VIH, prueba de alta calidad.

Atención. Con reacciones positivas y dudosas, la fecha límite para emitir el resultado se puede aumentar a 10 días hábiles. VIH (virus de inmunodeficiencia humana), causando ayudas (síndrome de inmunodeficiencia adquirida), pertenece a la familia de retrovirus. Transmitido de una persona a una persona al usar agujas y jeringas contaminadas para administración de fármacos intravenosos o procedimientos terapéuticos, con contactos sexuales como hetero y homosexual. La transmisión del virus puede ocurrir al desbordarse la sangre infectada y sus productos, donación de órganos o fluidos de semillas, trabajadores médicos, cuando se inyectan con agujas o herramientas infectadas. La infección por VIH es posible mediante su transferencia de la madre infectada del niño (camino vertical), aunque los métodos modernos de prevención que utilizan la terapia antirretroviral, al cumplir con todas las recomendaciones, reducen un riesgo de este tipo al mínimo.

El proceso de interacción entre el virus con una célula incluye una cantidad de etapas: la unión de un virus con una célula, libérela de la cáscara, la penetración en el citoplasma, la síntesis del ADN para el ARN viral, incrustando el ADN viral en la célula huésped genoma. Después de eso, comienza la etapa latente de la infección. En tal estado, el ADN de demostración puede existir durante algún tiempo sin mostrar la actividad y sin afectar la actividad vital de la célula huésped. No hay expresión de proteínas virales, no hay una respuesta inmune al virus. Los anticuerpos contra el VIH, caracterizando la respuesta inmune del cuerpo, aparecen después de la activación del ADN viral y el inicio de la reproducción activa del virus. La duración del período latente depende de una serie de factores, incluidas las características genéticas individuales del cuerpo.

Los anticuerpos contra el VIH pueden aparecer desde la segunda semana después de la infección; Su contenido aumenta durante 2-4 semanas y se mantiene a lo largo de los años. En el 90-95% de los infectados, aparecen en los primeros tres meses después de la infección, del 5-9%, en el período de tres a seis meses, en 0.5-1%, en una fecha posterior.

En las primeras semanas de infección, incluso antes de la aparición de anticuerpos contra el virus (es decir, antes de la conversión del servo), en muestras de suero o plasma, se puede identificar la presencia de antígenos del VIH, incluida su proteína P24 de la CAPSID. Más tarde, después de la seroconversión, generalmente se vuelve no determinada.

Los sistemas de prueba de 4ta generación combinados, que incluyen la prueba de combo de VIH AG / AB (arquitecto, abbott), detectan ambos anticuerpos a los tipos de VIH 1 y 2 y el antígeno VIH R24, lo que permite la detección temprana de la infección. Las características especiales de la prueba de detección de invitro utilizadas en el laboratorio para la detección de la infección por VIH deben atribuirse a una alta especificidad de investigación (\u003e 99.5%); 100% de sensibilidad a los anticuerpos característicos del período de seroconversión y la sensibilidad de la prueba al antígeno P24 de aproximadamente 18 pg / ml.

El procedimiento para realizar una encuesta de laboratorio sobre el VIH está estrictamente regulada por las órdenes del Ministerio de Salud de la Federación de Rusia e incluye un paso de estudios de detección (calificación) de la presencia de anticuerpos a los métodos inmununíferos (IFA) del VIH, y Una etapa de verificación (confirmando) estudio más detallado en el laboratorio del centro de la ciudad para el SIDA. Cabe señalar que incluso los mejores sistemas de detección de IFA no garantizan una especificidad del 100%, es decir, existe cierta probabilidad de obtener resultados no específicos y falsos positivos asociados con las peculiaridades del suero sanguíneo del paciente. Por lo tanto, el resultado positivo del examen IFA de detección no puede confirmarse en las pruebas de confirmación, después de lo cual el paciente dará un resultado negativo o indefinido. Con un resultado indefinido de un estudio de confirmación, las pruebas deben repetirse en la dinámica en 2-3 semanas.

El diagnóstico de laboratorio de la infección por VIH en niños nacidos de madres infectadas por el VIH tiene sus propias características. En su sangre, hasta 18 meses desde el momento del nacimiento puede circular anticuerpos maternos al VIH (Clase IgG). La ausencia de anticuerpos contra el VIH en los recién nacidos no significa que el virus no se penetre a través de la barrera placentaria. Los niños de las madres infectadas por el VIH están sujetas a encuestas de laboratorio y diagnóstico durante 36 meses después del nacimiento.

Preparación

No se requiere preparación especial. La sangre no toma antes de 4 horas después de la última comida. Se pueden encontrar recomendaciones generales para la preparación de la investigación. Es aconsejable realizar un estudio sobre la detección de antígenos y anticuerpos contra el VIH, no a principios de dos semanas posteriores a la posible infección, con la repetición de tres y seis semanas en caso de un resultado negativo. El registro de solicitudes de investigación en la LLC "Invitro" se lleva a cabo en un pasaporte o documento, reemplazándolo (tarjeta de migración, registro temporal en el lugar de residencia, certificado de un servicio de servicio, certificado de la tabla de pasaportes con una pérdida de pasaporte, tarjeta de registro de contabilidad desde el hotel). El documento presentado debe contener necesariamente información sobre el registro temporal o permanente en el territorio de la Federación Rusa y la foto. En ausencia de un pasaporte (documento que lo reemplaza), el paciente tiene derecho a emitir una solicitud anónima para la entrega de biomateriales. Con un examen anónimo, una solicitud y un cliente recibido del cliente, se le asigna una serie de biomateriales conocidos por el paciente, y el personal médico, que hizo el pedido. ! Los resultados de la investigación realizados anónimamente no se pueden presentar para hospitalización, inspecciones profesionales y no están sujetas a registro en una pistola.

Indicación para la cita

• Un aumento en los ganglios linfáticos de más de dos áreas.
• Leucopenia con linfopenia.
• Sudoración nocturna
• Pérdida de peso brusca de una razón poco clara.
• Diarrea más de tres semanas de una razón poco clara.
• Fiebre oculta causa.
• Planificación del embarazo.
• Preparación preoperatoria, hospitalización.
• Detección de las siguientes infecciones o sus combinaciones: tuberculosis, toxoplasmosis manifesional, a menudo infección de herpesvirus recurrentes, órganos internos candidiasis, re-neuralgia herpes-zoster, causada por micoplasma, neumática neumática o legionel.
• Sarcoma Caposhi a una edad temprana.
• Contactos de sexo al azar.

interpretación de resultados

La interpretación de los resultados de la investigación contiene información para el médico asistente y no es un diagnóstico. La información de esta sección no se puede utilizar para autodiagnóstico y autoc tratamiento. El médico realiza el diagnóstico exacto que utiliza los resultados de esta encuesta y la información necesaria de otras fuentes: anamnesis, los resultados de otras encuestas, etc.

Unidades de medición en un laboratorio de invitro independiente: prueba de calidad. La forma de representación de la forma: en ausencia de anticuerpos contra el VIH 1 y 2 y el antígeno P24, la respuesta es "negativa". En el caso de la detección de anticuerpos al VIH o el antígeno en las enzimas de detección, la muestra de suero se envía a la confirmación del método inmunotécnico en el Centro de la Ciudad del SIDA, que verifica resultados positivos e inciertos.

Resultado positivo:

1. Infección por VIH;
2. un resultado falso positivo que requiere investigación repetida o adicional *);
3. el estudio no es informativo en niños menores de 18 años, nacido de madres infectadas por el VIH.

* La especificidad del sistema de prueba de detección del anticuerpo al VIH 1 y 2 y el VIH AG / Combo, Abbott (VIH AG / AB Combo, Abbott), de acuerdo con el fabricante de reactivos, es aproximadamente el 99.6% ambos en la población general y En el grupo, pacientes con interferencias potenciales (HBV, HCV, Rubéola, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E. coli, chl.trach, etc., patologías autoinmunes (incluida la artritis reumatoide, presencia de anticuerpos antinucleares), Embarazo, embarazo, embarazo, IgG elevado, IgM, gammapatía monoclonal, hemodiálisis, múltiples hemotransfios).