3-15 yaş arası 45 çocuk muayene edildi. Çalışmanın amacı, apoptoz belirteçleri - CD95, CD95L, BSL2'yi belirleyerek periferik kan lenfositlerinin ve nötrofillerin apoptoza hazır olup olmadığını belirlemekti. İmmünokompetan hücrelerin apoptozunu değerlendirirken, lenfositlerin programlanmış hücre ölümüne hazırlığında bir azalma ve nötrofilik granülositlerde bir artış bulundu. En belirgin değişiklikler şurada kaydedilir: yaş grubu 3 yıldan fazla hastalığı olan 7-15 yıl. Elde edilen veriler, pankreas dokusundaki otoreaktif lenfositlerin programlanmış ölümünün baskılanmasının bir işareti olabilir, bu da bağışıklık tepkisinin uzamasına katkıda bulunur. CD95L eksprese eden lökosit hücrelerinin oranındaki bir artış, immünokompetan hücreler tarafından sızan pankreasın adacık β-hücrelerinde programlanmış hücre ölümü süreçlerini iyileştirebilir.
nötrofillerin apoptozu
lenfositlerin apoptozu
tip 1 şeker hastalığı
1. Pekareva E. V. Hastalarda apoptoz belirteçleri şeker hastalığı Hastalığın başlangıcında tip 1 / E.V. Pekareva ve diğerleri // Diabetes mellitus. - 2009. - No. 4. - S. 86-89.
2. Pekareva EV Tip 1 diabetes mellitus patogenezinde apoptozun rolü / EV Pekareva, TV Nikonova, OM Smirnova // Diabetes mellitus. - 2010. - No. 1. - S.45-48.
3. Adeghate E. Diabetes mellitus etiyolojisi ve epidemiyolojisi üzerine bir güncelleme / E. Adeghate, P. Schattner, E. Dunn // Ann NY. Acad Bilim, 2006. - Cilt. 1084. - S. 1-29.
4. Tip 2 diabetes mellitus / С olan hastaların periferik kanında nötrofil apoptozunun klinik önemi Sudo ve ark. // Laboratuvar Hematol. 2007; 13 (3): 108-12 (düşürülmüş).
5. Filep J. G. Nötrofil apoptoz: inflamasyonun çözünürlüğünü arttırmak için bir hedef / J. G. Filep, E. l. Kebir // J. Hücre Biyokimyası. - 2009. - Cilt. 108. - S. 1039-1046.
6. Sağlıklı ve diyabetik deneklerde Burkholderia pseudomallei'ye insan polimorfonükleer nötrofil tepkileri / S. Chanchamroen ve ark. // Bağışıklığı enfekte et. - 2009. - Cilt. 77. - S. 456–463 (azalmış apoptoz).
7. Diyabette Lenfosit Apoptozunun Etkisi / K. A. Awadhesh ve ark. // Asya Tıp Bilimleri Dergisi. - 2011. - No. 2. - S. 1-6.
8. Enflamasyon tip 1 diyabetik farelerde daha kalıcıdır / D.T. Graves ve ark. // J. Dent. Araş., 2005. - Cilt. 84. - S. 324–328.
9. Juliana C. Alves Diabetes mellituslu hastalarda enfeksiyonlar: Patogenezin gözden geçirilmesi / C. Juliana, C. Janine, C. Alves // Indian J. Endocrinol. Metab. - 2012 Mart. - Destek l1. - No. 16. - S. 27–36.
10. Luo H. R. Kurucu nötrofil apoptozu: mekanizmalar ve düzenleme / H. R Luo, F. Loison // Am. J. Hematol. - 2008. - Cilt. 83. - S. 288-295.
Giriş
Tip 1 diabetes mellitus (T1DM), pankreasın β-hücrelerine otoantikorların ve otoreaktif T-lenfositlerin oluşumu ile ilişkili poligenik, çok faktörlü bir hastalıktır.
Otoimmün lezyonların patogenezinde önde gelen bağlantılar, bağışıklığın düzensizliği ve programlanmış hücre ölümüdür.
Kontrollü apoptoz, günümüzde enflamasyonun odağındaki hücrelerin optimal dengesini korumak, aktive edilmiş klonların genişlemesini sınırlamak ve otoimmün reaksiyonların gelişmesini önlemek için ana mekanizma olarak kabul edilmektedir. Uygulamasında bir kusur oluştuğunda, etkinleştirilir bağışıklık hücreleri birikebilir ve otoimmün hastalıkların ortaya çıkmasına neden olabilir.
Bu çalışmanın amacı: Çocuklarda tip 1 diyabette periferik kanın lenfositleri ve nötrofilleri üzerinde apoptoz CD95, CD95L, Bsl2 aktivasyon belirteçlerinin incelenmesi.
Malzeme ve araştırma yöntemleri
3-15 yaş arası tip 1 diyabetli 45 çocuğun muayenesi yapıldı. Grup I, 3-6 yaş arası 20 çocuğu (okul öncesi), grup II - hastalık süresi 3 yıldan az olan 7-15 yaş arası 12 çocuğu (okul çocukları), grup III - 7-15 yaş arası 13 çocuğu (okul çocukları) hastalıkta 3 yıldan fazla deneyime sahip. Kontrol grubu 3-6 (15) ve 7-15 (15) yaşlarında 30 sağlıklı çocuktan oluşturuldu. Çalışma, D.G.'nin endokrinoloji bölümü temelinde yapıldı. GK Filippsky, Stavropol.
Programlanmış hücre ölümünü değerlendirmek için apoptoz belirteçlerini ifade eden lenfositlerin ve nötrofilik granülositlerin sayısı belirlendi. Lenfositler, bir Ficoll-Paque yoğunluk gradyanında, nötrofiller - bir Ficoll-Paque çift yoğunluklu gradyanda ve ficoll-urografin'de (GE Healthcare, İsveç) izole edildi. Hücre süspansiyonu, RPMI-1640 ortamında (Vector-Best, Rusya) üç kez yıkandı. Lenfosit ve nötrofil kültürlerinde, CD95, CD95L, Bsl2 eksprese eden hücrelerin sayısı, monoklonal antikorlar (Invitrogen, ABD) kullanılarak akış sitometrisi ile değerlendirildi.
İçin istatistiksel analiz veriler, "Primer of Biostat 4.0", Attestat 10.5.1. " yazılım paketini kullandı. Gruplar arası farklılıkları değerlendirmek için Newman - Keuls ve Dunn kriterlerinin hesaplanmasında tekrarlanan ölçümler ANOVA kullanıldı.
Kantitatif değerler anormal bir dağılım ile karakterize edildi ve medyan ve interkantil (25. ve 75. persentil) aralığı (Me (Q1-Q)) olarak sunuldu. p'deki farklılıklar<0,05.
Sonuçlar ve tartışması
Çalışma, sağlıklı çocuklara kıyasla tüm gruplardaki hastalarda Fas reseptörlerini (CD95) eksprese eden lenfositlerin sayısında bir azalma buldu (Tablo 1). Asgari göstergeler, 3 yıldan fazla hastalığı olan 7-15 yaş arası çocuklarda gözlendi (Tablo 1).
tablo 1
Tip 1 diyabetli çocuklarda lenfosit apoptoz indeksleri
|
Klinik gruplar |
||||
|
3-6 yaş |
CD1 (I) (n = 20) |
17,7(15,9-19,43) * ** |
7,4(5,81- 8,94) * ** |
70,2(68,56-71,76) * ** |
|
Kontrol grubu |
28,0(26,08-30,0) |
9,2(8,04- 10,25) |
65,9(62,82-69,05) |
|
|
7-15 yaşında |
20,5(17,94-23,02) * ** |
11,6(10,12-13,14) * ** |
70,3(65,72-74,9) * ** |
|
|
13,9(10,04-17,73) * ** |
15,6(14,26-16,87) * ** |
79,5(75,47-83,59) * ** |
||
|
Kontrol grubu |
26,5 (24,20-28,84) |
8,14 (6,49-9,78) |
60,3(56,97-63,66) |
*- p<0,05 - по сравнению с контрольной группой, **- p<0,05 - по сравнению с группой
Anti-apoptotik belirteçlerin (Bsl2) ekspresyon seviyesini değerlendirirken, tüm gruplardaki çocukların lenfositlerinde, hastalık süresi 3 yıldan fazla olan okul çocuklarında daha belirgin olan bir artış bulundu, bu da Fas'ın ihlaline işaret ediyor. Tip 1 diabetes mellituslu çocuklarda bağımlı apoptoz, otoreaktif lenfosit formlarının hücre ölümü süreçlerini yavaşlatmaya yol açar.
Sonuçlarımız, bağışıklık tepkisinin uzamasına katkıda bulunan pankreas dokusunda aktive edilmiş lenfositlerin programlanmış ölümünün baskılanmasının dolaylı bir işareti olabilir.
Lenfoid hücrelerin apoptotik hazır olma düzeyi, hastalığın süresine bağlıdır ve 3 yıldan fazla T1DM deneyimi olan çocuklarda azalmaktadır.
Daha önce diyabetes mellitusta lenfositlerin apoptoza karşı direncinin ortaya çıktığı gösterilmişti, bu da otoimmün yanıtın yapısını ve süresini açıklayabilir.
Diabetes mellituslu çocukların lenfosit kültüründe, sağlıklı çocuk grubuna kıyasla CD95L eksprese eden lenfosit yüzdesinde bir artış bulundu (Tablo 1). En yüksek oranlar 3 yıldan fazla hastalığı olan 7-15 yaş arası çocuklarda bulundu (Tablo 1).
T1DM'de pankreas adacıklarının, membran reseptörlerinin anormal ekspresyonunun eşlik ettiği çok çeşitli sitokinler üreten immün hücreler tarafından sızdığı bilinmektedir. Artan glikoz ve sitokin konsantrasyonunun etkisi altında, β-hücreleri, normal koşullarda pratik olarak bulunmayan yüzeylerinde CD95'i eksprese etmeye başlar.
Lenfoid hücreler üzerinde CD95L ekspresyonundaki bir artış, pankreasın β-hücrelerinde daha belirgin bir apoptotik süreçten ve daha sonra bunların çıkarılmasından sorumlu olabilir.
Son yıllarda nötrofilik granülositlerin otoimmün inflamasyon oluşumunda aktif rol aldığı gösterilmiştir. Otoantijenlerin lokalizasyonunu ve ortadan kaldırılmasını amaçlayan nötrofillerin reaksiyonu, büyük ölçüde, antijenik etkinin bağışıklık sistemi üzerindeki gücüne ve süresine ve ayrıca hücrelerin başlangıç fonksiyonel aktivite seviyesine bağlıdır.
Çocuklarda diabetes mellitusun seyrine, apoptoz belirteçlerini (CD95) ifade eden nötrofillerin yüzdesinde bir artış ve yüzeylerinde anti-apoptotik proteinler Bsl2 bulunan hücrelerin oranında bir azalmanın eşlik ettiğini bulduk (Tablo 2).
Tablo 2
Tip 1 diyabetli çocuklarda nötrofillerin apoptoz indeksleri
|
klinik gruplar |
||||
|
3-6 yaş |
CD1 (I) (n = 20) |
75,1(71,49-78,72) * ** |
9,5 (8,63- 10,32) * ** |
3,68 (3,46-3,90 * ** |
|
kontrol grubu |
59,2 (56,31- 62,01) |
7,35 (6,58- 8,12) |
||
|
7-15 yaşında |
T1DM, 3 yıldan az hastalık (II) (n = 12) |
77,6(71,15-83,99) * ** |
9,5(8,14-10,92) * ** |
3,99(2,9- 5,08) * ** |
|
T1DM, 3 yıldan fazla hastalık (III) (n = 13) |
87,9(84,24-91,63) * ** |
12,1(10,22-13,96) * ** |
2,78(2,36-3,19) * ** |
|
|
kontrol grubu |
58,43(54,95- 1,90) |
*- p<0,05 - по сравнению с контрольной группой, **- p<0,05 - по сравнению с группой III (Newman - Keuls testi, Dunn testi).
Karşılaştırmalı bir gruplar arası özelliği ile, maksimum CD95 göstergeleri (p<0,05) и минимальные Bsl2 (p<0,05) отмечены у детей 7-15 лет с длительностью заболевания более 3-х лет.
Yüzeylerinde CD95L bulunan polimorfonükleer lökositlerin yüzdesinde bir artış ortaya çıktı. En yüksek oranlar, 3 yıldan fazla hastalığı olan okul çocuklarında gözlendi.
Literatürde sunulan diyabetes mellitusta PMNL apoptoz çalışmalarının sonuçları tartışmalıdır. T1DM ve T2DM'de periferik kan nötrofillerinin apoptoz oranında bir artış olduğuna dair kanıtlar vardır.
Bununla birlikte, bir dizi çalışma, tip 1 diyabetli hastalarda, özellikle hiperglisemi koşullarında, muhtemelen doku hasarı ile kronik inflamasyon süreçlerini başlatan ve aynı zamanda uzun süreli bakteriyel enfeksiyonlara yatkınlık yaratan nötrofilik granülositlerin apoptozunda bir azalma olduğunu ortaya koymuştur. tip 1 şeker hastalığı.
Sonuçlarımız, tip 1 diyabetli hastaların, oluşumu doku hasarını artıran aktif nötrofillerin "fazlasını" ortadan kaldırmayı amaçlayan koruyucu bir reaksiyonun bir tezahürü olabilen, apoptoza karşı PMNL'nin artan bir yatkınlığına sahip olduğunu göstermektedir.
Nötrofilik granülositlerin apoptotik potansiyelindeki artış, hastalığın immünopatogenezinde PMNL'nin aktif katılımının bir yansımasıdır.
Diyabetik hastalarda nötrofilik granülositler üzerinde artan CD95L ekspresyonu, muhtemelen sadece pankreas hücrelerinin değil, aynı zamanda kendi lökosit hücrelerinin de yok edilmesine katkıda bulunur.
Bu nedenle, tip 1 diabetes mellituslu çocuklarda immünokompetan hücrelerin apoptozunu değerlendirirken, lenfositlerin programlanmış hücre ölümüne hazırlıkta bir azalma ve polimorfonükleer lökositlerde bir artış bulundu.
En belirgin değişiklikler, 3 yıldan fazla bir hastalık öyküsü olan 7-15 yaş grubunda kaydedilir. Tüm grupların çocuklarında, yüzeylerinde CD95L eksprese eden lökosit hücrelerinin oranında bir artış ortaya çıktı.
PMNL'lerin doğuştan gelen ve adaptif bağışıklık arasında bir bağlantı olduğu ve antibakteriyel korumada baskın bir rol oynadığı bilinmektedir.
Apoptotik aktivitelerinde bir artış, çocuğun düşük yaş direncinin, bulaşıcı hastalıklara duyarlılığının nedeni olabilir.
Apoptoz indüksiyonuna duyarlı lenfoid hücre sayısındaki azalma, programlanmış hücre ölümünün baskılanmasının ve aktive lenfosit formlarının bozulmuş eliminasyonunun dolaylı bir işaretidir.
sonuçlar
1. Tip 1 diyabetli çocuklarda, periferik kan lenfositlerinin apoptoza hazırlığında bir azalma, nötrofilik granülositlerde bir artış, buna CD95 ve Bsl2 ekspresyonunda bir değişiklik eşlik eder ve uzunluğuna bağlıdır. hastalık.
2. Tip 1 diyabette lenfositler ve nötrofilik granülositler üzerindeki CD95L ekspresyonundaki bir artış, immünokompetan hücreler tarafından sızan pankreasın adacık β-hücrelerinde programlanmış hücre ölümü süreçlerini iyileştirebilir.
İnceleyenler:
Shchetinin E.V., Tıp Bilimleri Doktoru, Profesör, Stavropol Devlet Tıp Üniversitesi Bilimsel ve Yenilikçi Çalışmalarından Sorumlu Rektör Yardımcısı, Rusya Federasyonu Stavropol Sağlık Bakanlığı HBO HPE "Stavropol Devlet Tıp Üniversitesi" Bölüm Başkanı.
Golubeva M.V., Tıp Bilimleri Doktoru, Profesör, Rusya Federasyonu Sağlık Bakanlığı Stavropol Devlet Bütçe Eğitim Kurumu "Stavropol Devlet Tıp Üniversitesi" Çocuk Bulaşıcı Hastalıklar Bölüm Başkanı.
bibliyografik referans
Barycheva L.Yu., Erdni-Goryaeva N.E. ÇOCUKLARDA TİP 1 DİYABET MELLITUS'TA BAĞIŞIKLIK YETKİN HÜCRELERİN APOPTOZ İŞARETLERİ // Modern bilim ve eğitim sorunları. - 2013. - No. 4;URL: http://science-education.ru/ru/article/view?id=9953 (erişim tarihi: 18.07.2019). "Doğa Bilimleri Akademisi" yayınevinin yayınladığı dergileri dikkatinize sunuyoruz 1
AA Markova birE.I. Kashkina bir Rubtsov V.S. 1 Lyakisheva R.V. bir
1 Saratov Devlet Tıp Üniversitesi. VE. Razumovsky, Saratov
Ülseratif kolitli 61 hastada apoptoz ve proliferasyon belirteçlerinin ekspresyonunun, hastalığın süresine, ciddiyetine, kolondaki inflamatuar sürecin lokalizasyonuna bağlı olarak analizi. Karşılaştırma grubu, pratik olarak sağlıklı 15 kişiden oluşuyordu. Hastaların muayenesi klinik, laboratuvar, endoskopik, morfolojik yöntemler kullanılarak yapıldı. İmmünohistokimyasal belirteçler Ki-67, P53, BAX ve CEA'nın ekspresyonu kolon mukozasının biyopsilerinde belirlendi. Çalışma, ülseratif kolitli hastalarda kolon mukozasının proliferatif aktivitesinin parametrelerinde sağlıklı bireyler grubuna kıyasla istatistiksel olarak anlamlı bir azalmanın yanı sıra proliferasyon süreçlerinde bir azalma ve apoptoz belirteçlerinin ekspresyonunda bir artış olduğunu ortaya koydu. hastalığın klinik belirtilerinin şiddetinin süresinde ve şiddetlenmesinde artış.
spesifik olmayan ülseratif kolit
apoptoz ve proliferasyon belirteçleri
1. Aruin L.I., Kapuller L.L., Isakov V.A. Mide ve bağırsak hastalıklarının morfolojik teşhisi. - M.: Triada-X, 1998 .-- 496 s.
2. Gastroenteroloji ve hepatoloji: tanı ve tedavi: doktorlar için bir rehber / ed. AV Kalinin, A.F. Loginova, A.I. Khazanov. - 2. baskı, Rev. ve Ekle. - E.: MEDpress-inform, 2011 .-- 864 s.: hasta.
3. Brown D. Gatter K. Monoklonal antikor Ki-67: histopatolojide kullanımı // Histopatoloji. - 1990. - Sayı 17. -
4. Bruno S., Darynkiewich Z. HL-60 hücrelerinde Ki-67 antikorları tarafından tespit edilen nükleer proteinin hücre döngüsüne bağlı ekspresyonu ve stabilitesi // Hücre. prolif. - 1992. - Sayı 25. -
5. Normal insan kolon mukozasının kriptlerinde her hücre pozisyonunda belirlenen çoğalma belirteçlerinin (BrdUrd, Ki-67, PCNA) bir karşılaştırması / M. Bromley, D. Rew, A. Becciolini
et al. // Avro. J. Histochem. - 1996. - Cilt. 40. - S. 89-100.
6. Holt P.R., Moss S.F., Kapetanakis A.M. Ki-67, kolonda çoğalan hücre nükleer antijeninden daha iyi bir proliferatif belirteç midir? Kanser. Epidimiol // Biyobelirteçler. Önceki - 1997. -
6. - S. 131-135.
7. McCormick D, Chong C, Hobbs C ve diğerleri. Monoklonal antikor MIB-1 // Histopatoloji ile sabit ve mum gömülü bölümde Ki-67 antijeninin tespiti. - 1993. -
22. - S. 355-360.
8. Reed J.C. Bcl-2 ve programlanmış hücre ölümünün düzenlenmesi // J. Cell. Biol. - 1994. - Cilt. 124. - S. 1-6.
Ülseratif kolit (ÜK), gastrointestinal sistemin en ciddi hastalıklarından biridir ve hastaların sakatlığına ve ölümüne yol açar.
Son yıllarda, dünyanın çeşitli ülkelerinde, büyük ölçüde bu patolojik sürecin tanısında bir iyileşme ile ilişkili olan NUC insidansında bir artış kaydedilmiştir.
Şu anda, X-ışını, endoskopik ve histolojik araştırma yöntemleri kullanılarak NUC tanısında entegre bir yaklaşım kullanılmaktadır. Kalın bağırsağın mukoza zarının durumunu değerlendirmek için umut verici yöntemlerden biri, çoğalma ve apoptoz belirteçlerinin belirlenmesi ile immünohistokimyadır.
İmmünohistokimyasal çalışma yöntemleri arasında en yaygın kullanımı apoptoz belirteçleri bcl ve p53 bulmuştur. bcl ailesinin proteinlerinin ya apoptoz indükleyicilerine (Bad, Bax, Bak, vb.) ya da apoptoz inhibitörlerine (Bcl-2, Bcl-XL, BOO, vb.) ait olduğu bilinmektedir. p53 proteininin birçok dönüştürülmüş hücrede tespit edildiğine dikkat edilmelidir. İşlevleri, apoptozun başlatılması da dahil olmak üzere, hasarlı genetik bilginin bir hücre neslinden diğerine transferini önlemeyi amaçlar. Yüksek bir p53 içeriği, hücredeki Bax konsantrasyonunda bir artışa ve apoptoz yoluyla hücre ölümüne katkıda bulunan bcl-2 konsantrasyonunda bir azalmaya yol açar.
Proliferasyon belirteçleri olarak birkaç antijen kullanılır. Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA) sadece hücre proliferasyonunda değil, aynı zamanda hasar sonrası DNA onarımında da rol oynar, bu da bu antijeni şartlı olarak hücre döngüsüne özgü kılar, çünkü DNA onarımı dinlenme fazında gerçekleştirilebilir. Hücre döngüsünün evreleriyle önemli ölçüde ilişkili bir başka antijen Ki-67'dir. Bu proteinin ekspresyonu, sentez öncesi fazda meydana gelir, hücre döngüsü sırasında artar ve mitoz fazında keskin bir şekilde azalır. Bu protein, PCNA'nın aksine, DNA onarımında yer almaz. Ki-67'nin ekspresyonu, dinlenme fazı dışında hücre döngüsünün tüm fazlarındaki hücreleri tanımlamayı mümkün kılar.
Çalışmanın amacı, nonspesifik ülseratif kolitli hastalarda apoptoz ve proliferasyon belirteçlerinin ekspresyonunu hastalığın süresine, şiddetine, inflamatuar sürecin lokalizasyonuna bağlı olarak analiz etmektir.
Malzemeler ve araştırma yöntemleri
Ana grup, 19 ila 66 yaşları arasında (27 kadın ve 34 erkek) UC'li 61 hastadan oluşuyordu, karşılaştırma grubu pratik olarak sağlıklı 15 kişiden oluşuyordu. Hastaların muayenesi, kolon mukozasının biyopsi örneklerinin immünohistokimyasal incelemesinin yanı sıra klinik, laboratuvar, endoskopik, morfolojik yöntemler kullanılarak gerçekleştirildi.
UC'li hastalar klinik belirtilerin ciddiyetine, hastalığın süresine ve inflamatuar sürecin lokalizasyonuna göre gruplara ayrıldı.
Hücrelerin proliferatif aktivitesi, aşağıdaki formüle göre proliferatif gösterge Ki-67 ile belirlendi:
Nerede X- mikroskobun görüş alanındaki çekirdek sayısı. Sayım en az 10 görüş alanında gerçekleştirildi.
Apoptoz, kolonun yüzey ve glandüler epitelindeki p53 ve BAX proteinlerinin ekspresyonu ile değerlendirildi. NUC'de kalın bağırsağın mukoza zarındaki rejeneratif süreçleri değerlendirmek için kanser embriyonik antijeninin (CEA) ekspresyonu belirlendi.
Araştırma sonuçları ve tartışmaları
Bir immünohistokimyasal çalışma, bu belirteçlerin ekspresyonunun NUC süresine, klinik belirtilerinin ciddiyetine ve kolondaki inflamatuar sürecin prevalansına bağımlılığını belirledi.
Varyansların eşitliği ve dağılımın normalliği için testler yapıldıktan sonra elde edilen verilerin istatistiksel olarak işlenmesi sırasında, örneğin normal dağılım yasasına uymadığı kanıtlandı, bu nedenle grupları karşılaştırmak için parametrik olmayan testler kullanıldı. Kantitatif özellikleri tanımlamak için medyan, üst ve alt çeyrekler kullanıldı.
Bu nedenle sağlıklı bireylerde PI Ki-67 54'tür (46; 67), bu da kolon hücrelerinin yüksek proliferatif aktivitesini gösterir (tablo).
Sağlıklı kişilerde ve ülseratif kolitli hastalarda kolon mukozasının epitel hücrelerinin proliferasyon indeksi Ki-67 (%), süresine, şiddetine ve lokalizasyonuna bağlı olarak
|
Analiz edilen gruplar |
Ki-67 değerleri |
farklılıkların geçerliliği |
|
|
Karşılaştırma grubu |
|||
|
Hastalığın süresi |
p 0 ≤ 0.001 $ 1 ≤ 0,02 p 0 ≤ 0.001 $ 1 ≥ 0,05 |
||
|
akımın şiddeti orta-ağır |
p 0 ≤ 0.004 $ 2 ≤ 0,05 p 0 ≤ 0.004 $ 2 ≤ 0,02 |
||
|
Lezyonun lokalizasyonu uzak Solak Toplam |
p 0 ≤ 0,002 $ 3 ≥ 0,05 p 0 ≤ 0,002 $ 3 ≥ 0,05 |
Notlar:
- $ 0 - kontrol grubuyla farklılıkların güvenilirliği;
- $ 1 - hastalık süresi 1 yıldan az olan farklılıkların güvenilirliği;
- $ 2 - hastalığın hafif seyri ile farklılıkların güvenilirliği;
- $ 3 - hastalığın distal lokalizasyonu ile farklılıkların güvenilirliği.
Sağlıklı bireylerde BAX ekspresyonu vakaların %80'inde yoktu ve %20'sinde düşük marker ekspresyonu vardı. CEA ifadesi vakaların %50'sinde not edildi ve ayrıca düşüktü.
Tüm hastalar, hastalık süresine göre 3 gruba ayrıldı: 1. 1 yıla kadar süren ÜK, 2. 1 ila 5 yıl arası ve 3. 5 yıldan fazla süren ÜK.
Tablodan da görüldüğü gibi hastalık süresi 1 yıldan 5 yıla kadar olan hasta grubunda PI Ki-67'de grup 1'e göre artış ( $≤ 0.02), kalın bağırsağın mukoza zarındaki onarıcı süreçleri yansıtan hücrelerin artan proliferatif aktivitesi ile açıklanabilir. 1 yıla kadar süren ülseratif kolitli hasta grubunda, 31 (25; 36) tutarındaki düşük PI Ki-67, hastalığın başlangıcında bağırsak mukozasındaki proliferatif süreçlerde belirgin bir azalmaya işaret edebilir.
P53 indeksi incelenirken, hastalığın süresine bağlı olarak, bu proteinin ekspresyon paternleri ortaya çıkmadı, ancak sağlıklı bireyler grubu ile hastalığı olan hasta grubu arasında bu markörün ekspresyonunda bir fark var. 1 ila 5 yıl arası ( $≤ 0.05) ve 5 yıldan fazla ( $ ≤ 0,03).
BAX ekspresyonu, kolonun hem yüzeysel hem de glandüler epitelinde belirlendi. Bu işaretleyicinin yüzey epitelindeki ve bezlerin epitelindeki ifadesinin her bir vakada pratik olarak aynı olduğu bulunmuştur. NUC'lu hastalarda BAX ekspresyonu vakaların %100'ünde tespit edildi, karşılaştırma grubu ile NUC'li hastalar arasında belirteç ekspresyonunda istatistiksel olarak anlamlı farklılıklar bulundu ( $ ≤ 0,01).
CEA ekspresyonunun yoğunluğu karşılaştırıldığında, hastalık süresindeki artışla birlikte önemli bir artış kaydedildi. Karşılaştırma grubunda, CEA ifadesi sadece izole vakalarda ortaya çıktı ( $ ≤ 0,003).
UC'nin klinik belirtilerinin ciddiyetine bağlı olarak, PI Ki-67'de bir değişiklik de ortaya çıktı (tabloya bakınız). PI Ki-67, hastalığın orta formu olan hastalarda azaldı ( $≤ 0.05) ve şiddetli ( $≤ 0.02) hafif seyirli hastalarla karşılaştırıldığında, sağlıklı bireyler grubu ile herhangi bir şiddette UC'si olan hastalar arasında da bir fark vardı ( $ ≤ 0,004).
p53 belirtecinin ifadesindeki değişiklik, alevlenmenin şiddetine bağlıydı (hafifte %12,5; orta derecede %35.7 ve şiddetlide %50). Sağlıklı birey grupları ile hastalığın orta ve şiddetli formlarının NUC'si olan hastalar arasında istatistiksel olarak anlamlı farklılıklar elde edildi ( $ ≤ 0,03).
BAX ve CEA, vakaların %100'ünde ifade edildi, ancak bu belirteçlerin ifadesinin yoğunluğunun NUC'nin klinik belirtilerinin ciddiyetine bağlı olmadığı bulundu. Klinik belirtilerin ciddiyetine bakılmaksızın karşılaştırma grubu ve UC'li hastalar arasında belirteçlerin ifadesinde farklılıklar bulundu (p≤0.01).
PI Ki-67'nin inflamatuar sürecin lokalizasyonuna bağımlılığını analiz ederken, sağlıklı insanlara kıyasla NUC'li hasta grubunda belirteç ekspresyonunda önemli bir artış ortaya çıktı ( $≤ 0,002), ancak ana grup içinde karşılaştırmalı bir analizde, işaretçinin ifadesi ile işlemin farklı lokalizasyonu arasında istatistiksel olarak anlamlı farklılıklar elde edilmedi ( $ ≥ 0,05).
Tüm hastalarda P53 ekspresyonu saptanmadı. Distal kolitli hastalarda, vakaların sadece %20'sinde, hastaların %18'inde sol tarafta pozitif sonuç elde edildi. Total intestinal lezyonlarda, vakaların %100'ünde p53 ekspresyonu saptandı ( $≤ 0.03 - distal kolit). Epitelyal metaplazi belirtileri olan alanlarda ekspresyonun en yoğun olduğu belirtilmelidir.
Total kolitli grupta BAX ekspresyonunun yoğunluğu, distal kolitten anlamlı olarak daha yüksekti ( $ ≤ 0,03).
CEA ekspresyonu, inflamatuar sürecin lokalizasyonuna bağlı değildi, ancak NUC'lu hastalarda karşılaştırma grubu ile karşılaştırıldığında anlamlı olarak daha yüksekti ( $ ≤ 0,03).
Ülseratif kolitte, kolon mukozasının epitel hücrelerinin proliferatif aktivitesi önemli ölçüde düşüktür ve apoptoz göstergeleri, enflamatuar değişikliklerinin yokluğundan daha yüksektir.
Ülseratif kolit süresinde bir artışa, kolon mukozasının epitelinin onarımını bozabilecek düşük proliferatif aktivitesi eşlik eder.
Ülseratif kolitin klinik belirtilerinin şiddetindeki artışla birlikte, sadece kolon epitel hücrelerinin proliferatif aktivite derecesinde bir azalma değil, aynı zamanda apoptoz aktivasyon indekslerinde bir artış vardır.
Enflamatuar sürecin proksimal kolona yayılmasıyla birlikte apoptozda artış ortaya çıktı.
İnceleyenler:
Shvarts Yu.G., Tıp Bilimleri Doktoru, Profesör, Başkan. Fakülte Terapisi Anabilim Dalı, Saratov Devlet Tıp Üniversitesi V.I. Razumovsky "Rusya Sağlık ve Sosyal Kalkınma Bakanlığı, Saratov;
Fedorina T.A., Tıp Bilimleri Doktoru, Profesör, Başkan. Genel ve Klinik Patoloji Anabilim Dalı: Patolojik Anatomi, Patolojik Fizyoloji, Samara Devlet Tıp Üniversitesi, Rusya Sağlık ve Sosyal Kalkınma Bakanlığı, Samara.
İş 09.12.2011 tarihinde alındı.
bibliyografik referans
Markova A.A., Kashkina E.I., Rubtsov V.S., Lyakisheva R.V. SPESİFİK OLMAYAN ÜLSERATİF KOLLİTİ OLAN HASTALARDA APOPTOZİS VE PROLİFERASYON İŞARETLERİ İFADE ÖZELLİKLERİ // Temel Araştırma. - 2012. - No. 2. - S. 79-82;URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=29400 (erişim tarihi: 18.07.2019). "Doğa Bilimleri Akademisi" tarafından yayınlanan dergileri dikkatinize sunuyoruz.
CAD (kaspazla aktifleştirilmiş DNase), 180-200 nükleotid katları halinde parçalara ayrılır. Apoptozun bir sonucu olarak, apoptotik cisimlerin oluşumu meydana gelir - ayrılmaz organelleri ve nükleer kromatin parçalarını içeren zar vezikülleri. Bu cisimler, fagositozun bir sonucu olarak komşu hücreler veya makrofajlar tarafından alınır. Hücre dışı matris, hücresel enzimlerden etkilenmediği için, çok sayıda apoptotik hücrede bile iltihaplanma gözlenmez.
Apoptozis işlemi vücuttaki hücre sayısının fizyolojik olarak düzenlenmesi, yaşlı hücrelerin yok edilmesi, antijenlerine reaktif olmayan lenfositlerin (otoantijenler) oluşumu, bitki yapraklarının sonbaharda dökülmesi için gereklidir. öldürücü T-lenfositlerin sitotoksik etkisi için, organizmanın embriyonik gelişimi için (kuş embriyolarında parmaklar arasındaki deri zarlarının kaybolması) ve diğerleri.
Normal hücre apoptozunun bozulması, kontrolsüz hücre çoğalmasına ve bir tümörün ortaya çıkmasına neden olur.
1. Apoptozun önemi
Apoptoz, çoğu çok hücreli organizmanın yaşamının ayrılmaz bir parçasıdır. Özellikle geliştirme süreçlerinde önemli bir rol oynar. Örneğin, tetrapodların uzuvları büyümek için bir spatula gibi serilir ve aralarındaki hücrelerin ölmesi nedeniyle parmakların oluşumu gerçekleşir. Ayrıca, hücrelerin artık apoptoza uğramasına gerek yoktur, bu nedenle özellikle iribaşların kuyruğu metamorfoz sırasında yok edilir. Omurgalı sinir dokusunda embriyonik gelişim sırasında nöronların yarısından fazlası oluşumdan hemen sonra apoptoz ile ölür.
Ayrıca apoptoz, hücrelerin "kalitesini" kontrol etme sisteminin bir parçasıdır, yanlış yerleştirilmiş, hasar görmüş, işlevsiz veya vücut için potansiyel olarak tehlikeli olanları yok etmenize olanak tanır. Bir örnek, yararlı antijene özgü reseptörler taşımadıklarında veya otoreaktif olduklarında ölen B-lenfositleridir. Apoptoz yoluyla, enfeksiyon sırasında toplanan lenfositlerin çoğu, üstesinden geldikten sonra da ölür.
Yetişkin organizmalarda, hücre proliferasyonu ve apoptozun aynı anda düzenlenmesi, tüm bireyin ve bireysel organlarının boyutunu korumayı mümkün kılar. Örneğin, hepatositlerin çoğalmasını uyaran fenobarbital ilacının implantasyonundan sonra, sıçanlarda karaciğer artar. Bununla birlikte, bu maddenin etkisinin kesilmesinden hemen sonra, tüm fazla hücreler apoptoza maruz kalır ve bunun sonucunda karaciğer boyutu normale döner.
Apoptoz, bir hücre, tamir edemediği büyük miktarda iç hasarı "algıladığında" da meydana gelir. Örneğin, DNA hasarı durumunda bir hücre kanser hücresine dönüşebilir, bu yüzden normal şartlarda bu olmaz, "intihar eder". Virüslerle enfekte olmuş çok sayıda hücre de apoptoz yoluyla ölür.
2. Apoptotik hücrelerin belirteçleri
apoptoz belirteçleri
TUNEL yöntemi ile apoptotik hücrelerde DNA parçalanmasının tespiti Fare karaciğer dokusunun bir preparatı, apoptotik hücrelerin çekirdeği kahverengi bir renge sahiptir, optik mikroskopi.
Agaroz jel elektroforezi kullanılarak apoptotik hücrelerde DNA parçalanmasının tespiti. Solda: Apoptotik hücrelerden izole edilen DNA - "DNA merdiveni" görülebilir; orta: işaretçiler; durum: işlenmemiş hücrelerden DNA örneğini kontrol edin. Hücre çizgisi H4IIE (sıçan hepatomu), apoptoz indükleyici - parakuat, etidyum bromür ile görselleştirme.
Yukarıda: Bir floresan boya (Hoechst 34580) ile boyama yoluyla kromatin yoğunlaşmasının ve parçalanmasının tespiti. Orta: Annexin V ile boyanarak plazmalemmanın dış yaprağına fosfadidilserin translokasyonunun tespiti. Alt: Parlak bir alanda apoptotik hücrelerin fotomikrografisi. Hücre hattı - Jurkat, apoptoz indükleyici - TRAIL, konfokal ve svitlopilna optik mikroskopisi.
Apoptoz ile ölen hücreler, bir dizi morfolojik özellik ile tanınabilir. Küçülür ve yoğunlaşır (piknoz), yuvarlanır ve psödopodia kaybederler, içlerinde hücre iskeleti yok edilir, nükleer membran parçalanır, kromatin yoğunlaşır ve parçalanır. Hücrelerin yüzeyinde çok sayıda kabarcık belirir, eğer hücreler yeterince büyükse, zarlarla çevrili parçalara ayrılırlar - apoptotik cisimler.
Apoptotik hücrelerde morfolojik olanların yanı sıra çok sayıda biyokimyasal değişiklik de meydana gelir. Özellikle DNA, nükleozomlar arasındaki bağlayıcı bölgelerde özel nükleazlarla eşit uzunlukta parçalara bölünür. Bu nedenle, bir apoptotik hücrenin tüm DNA'sı elektroforez kullanılarak ayrılırken, karakteristik bir "merdiven" gözlemlenebilir. DNA fragmantasyonunu tespit etmek için başka bir yöntem, TUNEL kullanarak serbest uçlarını işaretlemektir ( T erminal deoksinükleotidil transferaz d sen TP n ick e nd ben abeling ) .
Apoptotik hücrelerin plazma zarı da değişikliklere uğrar. Normal koşullar altında, negatif yüklü fosfolipid fosfatidilserin sadece iç tabakasında bulunur (sitozole geri döner), ancak apoptoz sırasında dış tabakaya "sıçrır". Bu molekül, yakındaki fagositler için bir "beni ye" sinyali olarak hizmet eder. Apoptotik hücrelerin fosfatidilserin ile indüklenen alımı, diğer fagositoz tiplerinden farklı olarak, inflamatuar mediatörlerin salınımına yol açmaz. Plazmalemmadaki tarif edilen değişiklik, apoptoz ile ölen hücreleri tespit etmek için başka bir yöntemin altında yatar - spesifik olarak fosfatidilserine bağlanan aneksin V ile boyama.
3. Kaspaz - apoptozun aracıları
Apoptoz geçişini sağlayan hücre sistemleri tüm hayvanlarda benzerdir, bunların merkezinde kaspaz protein ailesi yer alır. Kaspazlar, aktif merkezinde bir sistein kalıntısına sahip olan ve substratlarını belirli bir aspartik asit kalıntısında kesen proteazlardır (dolayısıyla adı: c itibaren sistein ve asp itibaren aspartik asit). Kaspazlar, hücrede, aspartat kalıntısında bir veya iki yerde kesen, halihazırda aktive edilmiş diğer kaspazların substratı olabilen, aktif olmayan prokaspazlar şeklinde sentezlenir. İki parça oluşur - daha büyük ve daha küçük - birbirine bağlanır ve aynı dimmer ile ilişkili bir dimer oluşturur. Bu şekilde oluşturulan tetramer, substrat proteinlerini kesebilen aktif bir proteazdır. Daha büyük ve daha küçük alt birimlere karşılık gelen bölgelere ek olarak, procaspazlar bazen bölünmeden sonra bozulan inhibitör prodomainleri de içerir.
Bazı kaspazların diğerleri tarafından bölünmesi ve aktivasyonunun bir sonucu olarak, sinyali önemli ölçüde artıran ve belirli bir andan itibaren apoptozu geri döndürülemez bir süreç haline getiren bir protealitik kaskad oluşur. Bu çağlayanı başlatan prokaspazlara başlatıcı, substratlarına ise efektör adı verilir. Aktivasyondan sonra efektör kaspazlar, diğer efektör prokaspazları veya hedef proteinleri parçalayabilir. Apoptoz sırasında yok edilen efektör kaspazların hedefleri, özellikle, bölünmeleri bu yapının parçalanmasına yol açan nükleer lamina proteinlerini içerir. Aynı zamanda proteini de bozar, normal koşullar altında CAD endonükleazlarını baskılar ve bunun sonucunda DNA parçalanması başlar. Hücre iskeletinin ve hücreler arası yapışmanın kaspazları ve proteinleri parçalanır, bunun sonucunda apoptotik hücreler yuvarlanır ve komşu hücrelerden ayrılır ve böylece fagositler için daha kolay bir hedef haline gelir.
Apoptoza uğramak için gerekli olan kaspazlar, doku tipine ve hücre ölümünün aktive edildiği yola bağlıdır. Örneğin farelerde, efektör kaspaz-3'ü kodlayan gen kapatıldığında, beyinde apoptoz gerçekleşmez, ancak normal olarak diğer dokularda meydana gelir.
Procaspase genleri sağlıklı hücrelerde aktiftir ve bu nedenle proteinler apoptozun seyri için sürekli olarak mevcuttur; hücresel intiharı tetiklemek için sadece aktivasyonlarına ihtiyaç vardır. Başlatıcı procaspazlar, CARD ( kaspaz işe alım alanı , Kaspazları çekmek için alan). CARD, hücre apoptozu uyaran bir sinyal aldığında başlatıcı prokaspazların adaptör proteinlere bağlanarak aktivasyon kompleksleri oluşturmasına izin verir. Aktivasyon komplekslerinde, birkaç procaspaz molekülü kendilerini doğrudan birbirine yakın bulur, bu da aktif bir duruma geçişleri için yeterlidir, ardından birbirlerini keserler.
Memeli hücrelerinde kaspaz kaskadını aktive etmek için daha iyi anlaşılan iki sinyal yolu, her biri kendi başlatıcı prokaspazlarını kullanan harici ve dahili (mitokondriyal) olarak adlandırılır.
4. Apoptoz aktivasyon yolları
4.1. Dış yol
Hücre, örneğin sitotoksik lenfositlerden dışarıdan apoptozu indükleyen bir sinyal alabilir. Bu durumda, sözde harici yol etkinleştirilir ( dış yol) Ölüm reseptörlerinden başlayarak. Ölüm reseptörleri, TNF reseptörünün kendisi ve Fas ölüm reseptörü gibi tümör nekroz faktörü (TNF) reseptör ailesine ait transmembran proteinlerdir. Her monomerin hücre dışı bir ligand bağlama alanına, bir transmembran alanına ve bir sitoplazmik ölüm alanına sahip olduğu homotrimerler oluştururlar, adaptör proteinler aracılığıyla prokaspazları çeker ve aktive eder.
Ölüm reseptörü ligandları da homotrimerlerdir. Birbirleriyle ilişkilidirler ve tümör nekroz faktörü sinyal molekülleri ailesine aittirler. Örneğin sitotoksik lenfositler, yüzeylerinde, hedef hücrelerin plazmalemması üzerindeki Fas ölüm reseptörlerine bağlanabilen Fas ligandlarını taşır. Bu durumda, bu reseptörlerin hücre içi alanları bir adaptör protein ile birleşir ( FADD, Fas ile ilişkili ölüm alanı ), Ve bunlar da, 8 ve / veya 10 başlatıcı procaspazlarını çeker. Bu olaylar dizisinin bir sonucu olarak, ölümü indükleyen bir sinyal kompleksi, DISC ( ölüme neden olan sinyal kompleksi ). Bu komplekste başlatıcı kaspazlar tarafından aktivasyondan sonra efektör prokaspazlar kesilir ve apoptotik kaskad tetiklenir.
Birçok hücre molekülleri sentezler ve bir dereceye kadar onları apoptozun dış yolunun aktivasyonundan korur. Bu tür bir korumaya bir örnek, sözde yem reseptörlerinin ifadesidir ( tuzak alıcılar), hücre dışı ligand bağlama alanlarına sahip olan, ancak smetri'nin sitoplazmik alanlarına sahip olmayan ve bu nedenle apoptozu tetikleyemeyen ve ligandlar için geleneksel ölüm reseptörleri ile rekabet eden. Hücreler ayrıca apoptozun dış yolunu bloke eden proteinler de üretebilir, örneğin yapı olarak prokaspaz 8 ve 10'a benzeyen, ancak protealitik aktiviteye sahip olmayan FLIP. Başlatıcı prokaspazların DISC kompleksine bağlanmasını engeller.
4.2. iç yol
apoptozom
Apoptoz, örneğin yaralanma, DNA hasarı, oksijen eksikliği, besinler veya hücre dışı hayatta kalma sinyalleri gibi durumlarda hücre içinden de tetiklenebilir. Omurgalılarda bu sinyal yoluna dahili (iç) denir. içsel yol) Veya mitokondriyal, buradaki kilit olay, belirli moleküllerin mitokondrinin zarlar arası boşluğundan salınmasıdır. Fidenin bu tür moleküllerine, kötü zihinlerin mitokondrinin elektron taşıma mızrağına girmesi için sitkrom c vardır, sitoplazmanın proteasının kendi işlevi vardır - adaptör Apaf'a gelmek ( apoptotik proteaz aktive edici faktör-l ), apoptozom adı verilen yedi üyeli tekerlek benzeri bir yapıya oligomerleşmesine neden olur. Apoptozom, başlatıcı prokaspaz-9'u çeker ve aktive eder, bu daha sonra başlatıcı prokaspazını aktive edebilir.
Bazı hücrelerde, apoptozun dışsal yolu, hücreyi etkin bir şekilde yok etmek için intrinsik yolu aktive etmelidir. İç yol, Bcl-2 ailesinin proteinleri tarafından sıkı bir şekilde düzenlenir.
4.2.1. Bcl-2 ailesinin proteinleri tarafından içsel yolun düzenlenmesi
Bcl-2 ailesi, ana işlevi sitokrom c ve diğer moleküllerin mitokondriyal zar boşluğundan salınmasını düzenlemek olan evrimsel olarak korunmuş proteinleri içerir. Bunlar arasında çeşitli kombinasyonlarda birbirleriyle etkileşebilen, birbirlerini baskılayan, aktiviteleri arasındaki dengeyi sağlayan ve hücrenin kaderini belirleyen pro-apoptotik ve anti-apoptotik moleküller bulunmaktadır.
Bu aileden yaklaşık 20 protein bilinmektedir ve bunların tümü Bcl2 homolojisinin BH1-4 olarak adlandırılan dört alfa-helikal alanından en az birini içerir. bcl2 homoloji). Bcl2 ailesinin anti-apoptotik proteinleri, Bcl-2'nin yanı sıra Bcl-XL, Bcl-w, Mcl-1 ve A1 dahil olmak üzere dört alanın tümünü içerir. Proapoptotik proteinler, ilkinin üyeleri üç BH alanı (BH1-3), özellikle Bak, Bax ve Bok (ikincisi sadece üreme organlarının dokularında ifade edilir) içeren iki gruba ayrılır. Bcl-2 ailesi arasında en çok sayıda olanı, yalnızca BH3 alanını (yalnızca BH3'ü) içeren ikinci proapoptotik protein grubudur; Bim, Bid, Bad, Bik / Nbk, Bmf, Nix / BNIP3, Hrk içerir. , Noxa, Puma.
Normal koşullar altında (yani hücre apoptoza girmediğinde), Bcl-2 ve Bcl-XL gibi anti-apoptotik proteinler, proapoptotik proteinler BH123'e (Bax ve Bak) bağlanır ve dış mitokondriyalde polimerleşmelerini engeller. gözenekler oluşturarak membran. Belirli bir apoptotik uyarıcının etkisinin bir sonucu olarak, hücrede sadece BH3 alanını içeren pro-apoptotik proteinler aktive edilir veya sentezlenir. Bunlar sırasıyla, anti-apoptotik proteinleri inhibe ederek Bak ve Bax üzerindeki inhibitör etkiyi ortadan kaldırır veya ikincisi ile doğrudan etkileşime girer ve bunların oligomerizasyonunu ve gözenek oluşumunu teşvik eder. Dış zarın, sitokrom c'nin ve ayrıca AIF (eng. apoptoz indükleyici faktör ).
Örneğin, JNK MAP kinazın aracılık ettiği hücrede hayatta kalma sinyallerinin olmaması, apoptozun iç yolunu tetikleyen Bim proteininin BH3 ekspresyonunu aktive eder. DNA hasarı durumunda, apoptoz geçişini de sağlayan BH3 proteinleri Puma ve Noxa'yı kodlayan genlerin transkripsiyonunu uyaran tümör baskılayıcı p53'ün birikmesi meydana gelir. Başka bir BH3 proteini olan Bid, apoptozun dış ve iç yolları arasında bir bağlantı sağlar. Ölüm reseptörlerinin ve sonuç olarak kaspaz-8'in aktivasyonundan sonra, ikincisi, Bcl-2'yi baskıladığı mitokonriyuma hareket eden, kesilmiş bir tBid (kırpılmış Teklif) oluşumu ile Bid'i keser.
Genel olarak hücre bölünmesi, hücre döngüsü adı verilen oldukça monoton bir süreçtir. Hücrenin çevrimin bir fazından diğerine geçişinin kontrol edildiği çok sayıda "kontrol noktası" içerir. Bir veya daha fazla "kontrol noktasının" yok edilmesi, hem kontrolsüz çoğalmaya hem de hücre ölümüne, özellikle apoptoza yol açabilir. Apoptozun tüm karakteristik özellikleriyle (kromatoliz, inflamatuar yanıtın olmaması, hücresel yamyamlık, vb.) morfolojik resmi, L. Graper tarafından tanımlanmış ve "fizyolojik hücre eliminasyonu" olarak adlandırılmıştır. 1971'de J. Kerr, bir ağaçtan oraya buraya düşen yapraklara benzeterek “apoptoz” (Latince aro - with, ptosis - düşmek) terimini önerdi. Apoptoz sırasında, üç faz ayırt edilir - erken (hücre boyutunda azalma, DNA'nın büyük parçalara bölünmesi), orta (DNA'nın daha fazla parçalanması) ve geç (apoptotik cisimler). Apoptoz, insan plasentasının gelişiminde önemli bir rol oynar. Hamileliğin seyri ile normal işleyen plasentada apoptotik değişikliklerde artış olur.
Tertemiz et al.
çalışmalarında apoptozun plasental vaskülogenezin fizyolojik düzenleme mekanizmalarında yer aldığını gösterdiler. Plasental baskülogenez, gebeliğin 21. gününde başlar ve hemanjiyoblastların ve anjiyojenik hücre adacıklarının görünümünü içerir. Plasental vaskülogenez, histolojik (hematoksilen ve eozin ile boyanmış preparatlar), immünohistokimyasal (CD31 tespiti), moleküler genetik (CD31-TUNEL - TdT aracılı X-dUTP nick end etiketleme) yöntemleri ve transmisyon elektron mikroskobu kullanılarak incelenmiştir. Çalışma, anjiyojenik hücre adacıklarında CD31-pozitif hücre olmadığını gösterdi. Bununla birlikte, CD31'in ekspresyonu, ilkel kılcal damar hücrelerinde ve vaskülojenik bölgeler arasında yer alan bir dizi stromal hücrede tespit edildi. Hematoksilen ve eozin ile boyanmış preparatların morfolojik incelemesi, bu hücrelerde apoptoz belirtileri ortaya çıkardı - karyopiknoz ve apoptotik cisimler. Plasentadaki apoptoz ve vaskülogenezin şiddeti doğru orantılıydı.
Gebeliğin erken sonlandırılması, ektopik gebelik, preeklampsi gibi gebelik bozukluklarında apoptoz düzeyi yükselir.
Sitotrofoblastın proliferasyonu ve farklılaşması ve villusun stromasında kan damarlarının gelişmesi, intervillöz boşluktan yeterli oksijen ve besin kaynağı gerektirir. Gebeliğin komplikasyonları arasında intrauterin gelişme geriliği perinatal mortalitenin önde gelen nedenlerinden biridir. Apoptozun bozulmuş düzenlenmesi, fetüse besin tedarikinde bir azalmaya ve fetüsün intrauterin gelişiminde bir gecikmeye neden olan sinsityotrofoblast hücrelerinin sayısında bir azalmaya yol açar. Levy et al. Rahim içi büyüme geriliğini preeklampsi ve tütün içimi ile ilişkilendirir - plasenta dokusunun oksijen açlığına yol açan koşullar. S.Y. Dai et al. kötü alışkanlıkları olmayan ve preeklampsisi olmayan ancak fetal gelişimde gecikme yaşayan kadınların plasentaları araştırıldı. Yazarlar, oksijen açlığı koşulları altında plasental hücrelerdeki apoptotik değişikliklerin, hipoksi (hipoksi ile indüklenebilir faktör) - HIF-la, HIF-2a, HIF-1 p altında aktive olan faktörler tarafından düzenlenebileceğini öne sürdüler.
HIF-1, hücrelerin hipoksiye adaptasyonundaki ana faktördür.
Eritropoez, glikoliz ve anjiyogenezden sorumlu bir dizi genin ekspresyonunu değiştirebilir. HIF-lp heterodimer her koşulda plasentanın tüm hücrelerinde saptanırken, HIF-la yalnızca hipoksi sırasında saptanır. Daha az yaygın olarak, oksijen açlığı koşulları altında, EPAS-1 olarak da bilinen HIF-2a, hücrelerde saptanır. HIF-la ve -2a mRNA hamilelik boyunca plasentada tespit edilir, ancak seviyeleri gebelik yaşına bağlı olarak önemli ölçüde değişir. HIF-la mRNA seviyesi sabit kalırsa, HIF-2a mRNA seviyesi hamilelik süreciyle birlikte yükselir. HIF-la'nın aksine, HIF-2a esas olarak endotelyal hücrelerde eksprese edilir ve anjiyogenez ve hematopoezde önemli bir rol oynar. İnsan plasentasında, HIF-la ve HIF-2a'nın ekspresyonu, hücrelerin bu hamilelik döneminde meydana gelen fizyolojik hipoksiye karşı direncini sağlayan erken aşamalarda maksimum düzeyde eksprese edilir. Ek olarak, preeklampside bu faktörlerin artan ekspresyonu kaydedildi.
Bu faktörlerin apoptoz üzerindeki uyarıcı etkisinin sonucu, fetüsün intrauterin gelişiminde bir gecikmedir.
Bu nedenle, S. Y. Dai ve ark. villus sinsityotrofoblastındaki apoptoz indeksi intrauterin gelişme geriliği olan grupta %1.45 + %1.26 ve intrauterin fetal büyüme geriliğinin izlenmediği kontrol grubunda 0.18 ± 0.16 - idi (p
Aynı zamanda, intrauterin gelişme geriliği olan grubun plasentalarında makroskopik olarak saptanan enfarktüsler (%50) kontrol grubuna (%22) göre anlamlı derecede daha sıktı. İntrauterin büyüme geriliği olan grupta intervillöz boşlukta fibrinoid birikiminin derecesi de biraz daha yüksekti. Trofoblast elementlerinin ve kan ve vasküler hücrelerin mitotik aktivitesi 6 ve 12-14. gebelik haftalarında Challier ve ark. Yazarlar, 6. gebelik haftasında sitotrofoblast hücreleri ve eritroblastlarda mitotik figürlerin varlığını ve Kd67-pozitif çekirdeklerin varlığını kaydettiler. Villus sitotrofoblastında, Ki67-pozitif çekirdeklerin sayısı gebeliğin 12-14. haftalarında azalmış, sadece ekstravillöz sitotrofoblastın hücre adacıklarında kalmıştır. Ki67 artık bu dönemde eritroblastlarda tespit edilmez. 6. gebelik haftasında endotel hücrelerinde, mitotik figürler ve Ki67 ekspresyonu yoktu, 12-14. gebelik haftalarında lektin UEA1 tespit edildi. 6 haftalık gebelikte endotelyal ve perivasküler hücrelerde mitotik figürlerin ve Ki67 ekspresyonunun yokluğu, vaskülojenezin stromal hücrelere ve trofoblasttan daha büyük ölçüde doğrudan bağımlı olduğunu gösterir.
Ökaryotik hücrelerin hücre döngüsü üzerindeki kontrol, bir kinaz ailesi, özellikle sikline bağımlı kinazlar tarafından gerçekleştirilir. Sitotrofoblast çekirdeğinde ve bitişik damarların endotelinde gebeliğin ilk üç ayından itibaren, ifadesi gebeliğin üçüncü trimesterinde giderek artan siklin D1 tespit edilir. CDK4, gebeliğin hem birinci hem de üçüncü trimesterlerinde sitotrofoblast çekirdeklerinde saptanırken, COK4-pozitif endotel hücreleri yalnızca üçüncü trimesterin sonunda not edilir. Bu, D1 / CDK4 kompleksinin hamilelik boyunca sitotrofoblast hücre proliferasyonunun düzenlenmesinde ve hamileliğin üçüncü trimesterinde anjiyogenezin kontrolünde yer aldığını göstermektedir. Endokrin bozuklukları, immünolojik denge, serbest radikallerin birikmesi plasenta dokularında artan apoptoza yol açar. Bu nedenle, preeklampsi ile sitotrofoblast farklılaşması ve büyük ölçüde apoptoz nedeniyle uterusa istila süreci bozulur. Apoptozun gebelik sırasında matür plasentada çok daha yaygın olduğu, fetal büyüme geriliği ile komplike olduğu ve bu sürecin düzenlenmesinde ana rolü p53 proteininin oynadığı ve Bcl-2 proteininin buna katılmadığı bilinmektedir. Çok sayıda çalışma, p53'ün aşırı ekspresyonunu ve sonuç olarak, koryonik karsinom ve safra kesesi sürüklenmesinde sitotrofoblasttaki apoptotik hücrelerde bir artış olduğunu göstermektedir.
