Moderne metode dijagnosticiranja HIV infekcije. Koristeći test combibest u dijagnostici HIV-a koji se može očekivati \u200b\u200bod rezultata za HIV

ELISA (imuno-imunim analiza, ELISA - English) ušla je u život praktične medicine negdje u 60-ih godina prošlog stoljeća. Početni zadatak bio je histološke studije u znanstvene svrhe, koje su svedene na pretraživanje i identifikaciju antigenske strukture stanica življenja.

Metoda IFA temelji se na interakciji specifičnih (AT) i srodnih antigena (AG) sa stvaranjem kompleksa antigen - antitijela, koji se detektira pomoću enzima. Ta je činjenica došla na znanstvenike za ideju da se metoda može koristiti za dijagnosticiranje identificiranja specifičnih imunoglobulina različitih klasa uključenih u imunološki odgovor na jednu ili drugu infekciju. I to je bio proboj u kliničkoj laboratorijskoj dijagnostici!

Metoda se počela aktivno koristiti samo na početku 80-ih i to je uglavnom u specijaliziranim agencijama. Prvi analizatori imunoferment opremljeni su centrima i postajama transfuzije krvi, zaraznim i venerološkim bolnicama, od rođene u afričkom kontinentu, koji se pojavio na horizontu, i odmah se pridružio "starim" infekcijama zabranjene pomoći, zahtijevao je trenutne dijagnostičke mjere i Potražite terapijske lijekove koji utječu na njegov.

Opseg ELISA metode

Mogućnosti imuno-imunikalne analize doista su opsežne. Sada je teško zamisliti kako možete učiniti bez takve studije koje se koriste doslovno u svim sektorima medicine. Čini se da IFA može učiniti u onkologiji? Ispada možda. I mnogo. Sposobnost analiziranja oznaka, karakterističnih za određene vrste malignih neoplazmi, temelj rano otkrivanje tumora, kada još nije određena drugim putem zbog male veličine.

Moderna klinička laboratorijska dijagnostika (CDL), osim za oncomarkere, ima značajne arsenalne ploče za ELISA i koristi ih za dijagnozu raznih patoloških uvjeta (infektivni procesi, hormonski poremećaji) i praćenje farmaceutskih medicinskih pripravaka kako bi se utvrdilo njihov utjecaj na pacijenta tijelo i, usput, ne samo osoba. Trenutno se imunoatimenzionalna analiza široko koristi u veterinarskoj službi, jer "naša manja braća" također podliježu mnogim bolestima, što ponekad pate jako puno.

Na ovaj način, ELISA, zbog osjetljivosti i specifičnosti, prema uzorku krvi uzeta iz vene, može odrediti:

• Hormonski status (hormoni štitnjače i nadbubrežne žlijezde, spolni hormoni);
• Prisutnost virusne i bakterijske infekcije (HIV, B i C, klamidija, sifilis, i, kao i mnoge druge bolesti uzrokovane patogenim mikroorganizmima);
• Tragovi vitalne aktivnosti mikroorganizama koji su izazvali infektivni proces, koji je sigurno završio i prebačen u fazu stvaranja imunološkog odgovora na ovaj patogen. Takvi tragovi, to jest, antitijela, u mnogim slučajevima ostaju cirkulirani u krvi za život, nego zaštititi osobu od ponovne infekcije.

Što je bit IFA?

Imununulalna metoda omogućuje vam da odredite ne samo prisutnost same patogena (visokokvalitetna analiza), već i njezin kvantitativni sadržaj u serumu pacijenta.

Virus ili bakterijska doza značajno utječe na tijek infektivnog procesa i njegovog ishoda, tako da je kvantitativna analiza dodijeljena ne posljednja uloga u dijagnostici i liječenju bolesti u različitim oblicima i fazama.

Međutim, znajući imunoimimenzionalne studije, kao IFA metoda, ne mislimo čak ni o tome kako uspijeva pokriti tako široku paletu mikroorganizama koji nastanjuju naš planet, od kojih mnogi nose izravnu prijetnju zdravlju i životu čovjeka i životinja , A činjenica je da ELISA ima mnoge mogućnosti (nekonkurentne i konkurentne - izravne i neizravne), od kojih svaki rješava svoj zadatak i, tako, omogućuje ciljano pretraživanje.

Kako bi se identificirali imunoglobulini jednog ili drugog razreda, koristi se tradicionalna polistirenska ploča s 96 jažica (tableta), u jažicama čije se sorbed rekombinantni proteini koncentriraju u krutoj fazi. Protutijela ili serum ili antigenov serum ili antigen, koji je pao u dobro prijateljsko antitijelo, pronašao je "poznat" objekt i formirao kompleks s njim (AG-AT), koji je, povjerio enzimskom konjugatu, kada se očitava rezultati očituje promjena u boji bunara.

Imunoatimenzionalna analiza se provodi na ispitnim sustavima određene specifičnosti, proizvedene u posebnim laboratorijima i opremljeni svim potrebnim reakcijskim komponentama. Studije se mogu provesti uz pomoć strojeva za pranje rublja ("Voshor") i čitanja spektrofotometara, gdje je uključen ručni rad uglavnom uključen. Na punim automatskim strojevima, noseći laboratorijski način iz monotonog ubacivanja, pranje i drugih rutinskih slučajeva, naravno, radeći brže i praktičnije, ali ne i svi laboratoriji mogu priuštiti takav luksuz i nastaviti raditi na stari način - na polu- automatski.

Tumačenje rezultata IFA-e je unutar nadležnosti liječnika laboratorijske dijagnostike, a nužno se uzima u obzir i svojstveno u gotovo svim imunokemijskim reakcijama kako bi se dali lažno pozitivne ili lažno negativne odgovore.

Video: Moderna imunikalna analiza

IFA rezultira primjerom sifilisa

Analiza imuno enzim je pogodna za identifikaciju svih oblika, Osim toga, koristi se u istraživanju probira. Za analizu koristi se pacijentovu vensku krv, uzimajući prazan želudac. U radu se koristi tablete s određenom specifičnosti (na nastavi A, M, G) ili ukupna antitijela.

S obzirom na činjenicu da se u Sifilisu proizvodi u određenom slijedu, ELFA može lako odgovoriti na pitanje kada je nastala infekcija iu kojoj fazi je proces, a dekodiranje dobivenih rezultata može se prikazati u sljedećem obliku:

• IGM označava trajanje infektivnog procesa (može se pojaviti kada otežavaju kronične upalne bolesti);
• IGA država da se infekcija dogodila prije više od mjesec dana;
• IgG sugerira da je infekcija u punom zamahu ili nedavno liječenje, što se lako može saznati prilikom prikupljanja anamneze.

Kada analizira sifilis, bunari s negativnim odgovorom (i negativnim kontrolom) ostaju bezbojni, dok će pozitivan rezultat (kao i pozitivan kontrola) dati svijetlo žuto bojenje zbog promjena u boji kromogena tijekom studije. Međutim, intenzitet boje se ne podudara s kontrolom, to jest, može biti malo blješće ili blago žućkasto. To su sumnjivi rezultati, koji su, u pravilu, podložni ponovnom ispitivanju s obveznim uzimajući u obzir kvantitativni pokazatelji dobiveni na spektrofotometru, ali općenito, boja je u izravnoj razmjernoj ovisnosti o broju imunih kompleksa ( pridruženi AG i AT).

Najuzbudljivije analize imunoasa - IFA na HIV

Analiza, možda, više od drugih je zanimljivo u širokom rasponu ljudi, jer još nije pouzdano tvrditi da su mnogi društveni problemi nestali (prostitucija, ovisnost o drogama itd.). Nažalost, HIV utječe ne samo o tim slojevima ljudskog društva, moguće je zaraziti u različitim okolnostima koje nisu povezane s seksualnim ili unosom lijeka. Ali ako je potreba za Anketama HIV-a nastala, ne bi se trebala bojati da su svi oko sebe naučili o tome da posjetite takav laboratorij. Sada su HIV-zaraženi ljudi zaštićeni zakonom, a sumnjatelji mogu kontaktirati anonimne urede, gdje možete riješiti problem bez straha od publiciteta i osude.

Imununulalna metoda koja se koristi za dijagnosticiranje HIV infekcije odnosi se na primarne standardne studije koje, međutim, zahtijevaju posebne uvjete, budući da je tema vrlo osjetljiva.

IFA na HIV ima smisla nakon seksualnog kontakta, transfuzija krvi, druge medicinske manipulacije koje uključuju infekciju, a na kraju razdoblja inkubacije ("seronegativni prozor"), ali treba imati na umu da ovo razdoblje nije konstantno. Može završiti 14-30 dana, a može se nastaviti do šest mjeseci, tako da se interval od 45 do 90 dana uzima prosječna vrijednost. Za HIV, krv se predaje na isti način kao i druge infekcije - od Beča na prazan želudac. Rezultati će biti pripremljeni ovisno o akumulaciji materijala u laboratoriju i njegovom radnom opterećenju (od 2 do 10 dana), iako najčešće laboratorij daje odgovor na isti dan ili sljedeći.

Što se može očekivati \u200b\u200bod HIV rezultata?

IFA na HIV infekciji definira antitijela na dvije vrste virusa: HIV-1 (češće u Rusiji i drugim zemljama Europe i Azije) i HIV-2 (češće se pojavljuju na području zapadne Afrike).

Zadatak IFA HIV-a je pretraživanje na adresi G, koji se otkrivaju na svim testnim sustavima, ali u kasnijem razdoblju, a na nastavi A i M, otkriven na rekombinantnim testovima nove generacije, omogućujući vam da pronađete antitijela u Najranije faze (razdoblje inkubacije - "seronegativni prozor"). Od IFA možete očekivati \u200b\u200bsljedeće mogućnosti odgovora:

1. Primarni pozitivni rezultat: Krv je podložan ponovnom provjeru ispitnog sustava istog tipa, ali ako je moguće, drugu seriju i drugu osobu (laboratorijski asistent);
2. Ponovljeno (+) podrazumijeva novi unos krvi kod pacijenta s proučavanjem kao što je primarna analiza;
3. Još jedan pozitivan rezultat podliježe referentnoj analizi, koja koristi visoko specifične testne komplete (2-3 kom.);
4. Pozitivan rezultat u oba (ili u tri) sustava šalje se imunoblotiranju (ista ELISA, ali je napravio pojedinačno za testove posebnih skupova specifičnosti).

Zaključak HIV infekcije vrši se samo na temelju imunoblotiranja. Provodi se razgovor s zaraženim u cijelosti povjerljivosti. Otkrivanje medicinske tajnosti u Rusiji, kao iu drugim zemljama, podliježe kaznenoj kazni.

Analize na klamidiji i citomegalovirusu imunumentalnom metodom također su stekli posebnu popularnost, zbog činjenice da omogućuje određivanje vremena infekcije, stupanj bolesti i učinkovitost terapijskih mjera.

Prilikom uvođenja možete promatrati i izgled antitijela različitih klasa. U različitim fazama patološkog stanja uzrokovane zaraznim sredstvom:

• IGM se može otkriti danima nakon sedam nakon infekcije;
• IGA kaže da infekcija u tijelu živi više od mjesec dana;
• IgG potvrđuje dijagnozu klamidija, pomaže slijediti liječenje i odrediti njegovu učinkovitost. Treba napomenuti da su antitijela klase i kruži u tijelu bez obzira na propisivanje bolesti, dakle, pravilno dešifrirati analizu, referentne vrijednosti (norme), koje, usput, za svaki KDL Njihove su: uzimajući u obzir brand testnog sustava i specifičnost reagensa uključenih u set. Vrijednosti norme uklapaju se u prazno pored rezultata ELISA-e.

Što se tiče, nešto je drugačije: Antitijela klase M pojavljuju se otprilike nakon mjesec dana i pol, to jest, pozitivan rezultat (IGM +) postaje u fazi primarne infekcije ili kada reagira skrivenu infekciju i ostaje jedan od 4 mjeseca do šest mjeseci.

Prisutnost u razredu G karakteristična je za pokretanje primarne akutne infekcije ili reinfekcije. Analiza se navodi da se virus odvija, međutim, informacije su u kojima je infektivni proces - ne daje. U međuvremenu, definicija IgG titra također uzrokuje poteškoće, jer ovisi u potpunosti na imunološkom statusu određene osobe, koja je, međutim, uspostavljena identifikacijom imunoglobulina klase G. S obzirom na ponašanje antitijela, kada se dijagnosticira CMWI Potrebno je procijeniti sposobnosti antitijela klase g za interakciju s CMV-om, a zatim "neutralizirati" IT (Avidy). U početnoj fazi, IgG bolest je vrlo slabo povezana s virusnim antigenima (niska pljuska) i tek tada počinju pokazivati \u200b\u200baktivnost, postaje moguće govoriti o povećanju plenosti antitijela.

Možete govoriti o prednostima imunoformalne analize za dugo vremena i mnogo, jer je ova metoda uspjela riješiti mnoge dijagnostičke zadatke koristeći samo vensku krv. Više ne trebaju dugo očekivanja, uzbuđenje i probleme s ogradom materijala za studiju. Osim toga, IFA testni sustav i dalje se poboljšava i dan nije daleko od ugla kada će test dati 100% točnost rezultata.

VIDEO: MGMU Film za učenje. Sechenov o osnovama IFA

Vlasnici patenta R2283497:

Izum se odnosi na područje biotehnologije i medicine. Sustav za ispitivanje imunoafatora za identificiranje spektra antitijela za virus ljudske imunodeficijencije (HIV) prvog i drugog tipa, prvi tip skupine o i detekciju antigena virusu ljudske imunodeficijencije prvog tipa p24 uključuje imunosorbent na antigenima virusa ljudske imunodeficijencije koja predstavlja GP41 (ENV HIV-1 i HIV-2 skupine O), GP120 (ENV), P24 (GAG), P31 (POL), GP36 (ENV HIV-2), antitijela na HIV antigen 1 p24 i detektiraju reagense, dok su gore spomenuti HIV antigeni i HIV protutijela sorbiranu u različitim jažicama tableta za enzimsko imunolas, i 96 jažica polistiren sklopivih ili neinstelularnih ploča koriste se za sorpciju. Izum osigurava povećanje osjetljivosti, pojednostavljenja, eliminaciju subjektivnosti procjene rezultata. 1 Z.P. F-laži, 10 tab., 1 il.

Izum se odnosi na područje biotehnologije i medicine. Upotreba: diferencirana detekcija svih klasa specifičnih antitijela za humane imunodeficijencije virus proteina 1 i 2, HIV 1 skupina O i antigen R24 HIV 1.

Suština: dobivanje imunoformalnog sustava ispitivanja za identificiranje spektra antitijela svih klasa na pojedinačne proteine \u200b\u200bi HIV 1 i 2, HIV 1 skupinu O i antigen R24 HIV 1 u serumu (plazma) krvi, imunoglobulina i preparata za ljudske krvi u cilju Identificirajte spektar antitijela na HIV 1 i 2, HIV 1 skupinu O, detekciju antigen p24 HIV 1 i potvrdu pozitivnih ili sumnjivih rezultata pregleda na antitijela na HIV 1 i 2, HIV 1 skupinu O i antigen P24 HIV 1.

Opis izuma

Laboratorijska dijagnostika HIV infekcije temelji se u tri smjera: a) naznaka HIV-a i njegovih komponenti; b) detekcija antitijela na HIV; c) određivanje promjena u imunološkom sustavu. Među postojećim metodama laboratorijske dijagnostike su najčešća serološka - identifikacija antitijela za virusne antigene.

Imunuunimenalna analiza (IFA) i imunoblotiranje (IB) uglavnom se koristi za identifikaciju antitijela u HIV infekciji. U srcu Elisa leži imobilizaciju virusnih antigena na tabletama, s kojima su antitijela pacijenta povezana, a kompleks antigena antigen detektiran je pomoću miša antitijela konjugiranog s peroksidazom do imunoglobulina G i čovjeka. Metoda je prilično specifična i osjetljiva i omogućuje vam da identificirate virusne antitijela u 95% bolesnika. Preostalih 5% slučajeva pada na rane faze infekcije kada su serumska antitijela još uvijek male ili terminalne faze bolesti, kada tijelo više ne može sintetizirati antitijela zbog oštrih iscrpljivanja imunološkog sustava. Lažno-pozitivni rezultati ELISA također su mogući, uglavnom u bolesnika s autoimunim i onkološkim bolestima, kao iu infekciji uzrokovane virusom Asc Facpespena Barra. U isto vrijeme, postoji križna reakcija antitijela na reumatoidni faktor, virus Epstein-Barr, ili antigenske determinante, slično proteinima glavnog kompleksa histokompatibilnosti 1 i 2 klase (HLA-4 i DQW3) i s sposobnost komuniciranja s HIV antigenima. Lažni pozitivni rezultati često se promatraju kod trudnica i starijih osoba. Hemoliza, lipemija, zagađenje bakterijskog seruma također može uzrokovati nepouzdane rezultate.

S tim u vezi, predlaže se brojne metode i koristi se za provjeru specifičnosti rezultata detekcije antitijela. Od tih metoda, reakcija "imunološkog blotiranja" najčešće se koristi u modifikaciji "Western blot". Suština metode je kako slijedi: U prvoj fazi proizvodi se odvajanje HIV proteina za molekulsku težinu pomoću elektroforeze u poliakrilamidnom gelu. Tada se provodi elektroforetski prijenos iz poliakrilamidnog gela na površinu nitroceluloze membrane. Antigeni preneseni na ovaj način otkrivaju se na membrani pomoću neizravne analize: membrana se inkubira s materijalom u studiju; Antitijela su povezana s HIV antigenima prenesenim u nitroceluloznu membranu, a zatim se membranske trake inkubiraju s konjugatom; Kada se formira kompleks antitijelo antigena, konjugat se pridruži, nakon ispiranja od konjugata i inkubacije s podlogom, nalaze se boje na onim područjima nitroceluloze, gdje se nastaje stvaranje kompleksa antigena - antitijelo - konjugat. Crtanje predstavlja primjere pozitivnih, slabo kreveta i negativnih imunoblot rezultata.

U serumu osoba zaraženih HIV-1 i HIV-2, detektira antitijela na slijedeće proteine \u200b\u200b(p) i glikoproteina (GP): Tablica A.

Tablica predstavlja kriterije za ocjenjivanje rezultata imunološkog upijanja, koji je preporučio tko i ruski centar za prevenciju i kontrolu AIDS-a.

Na temelju kriterija WHO, serumi se smatraju pozitivnim, u kojima se detektiraju antitijela na bilo koja dva proteina HIV-1 školjke. Ako postoji reakcija sa samo jednim od proteina ljuske (GP160, GP120, GP41), u kombinaciji s reakcijom s drugim proteinima, ili bez njega, rezultat se smatra upitnim. Prema saveznom znanstvenom i metodološkom centru Ministarstva zdravstva Ruske Federacije za sprječavanje i kontrolu AIDS-a, moguće je tumačiti serume kao pozitivne iu prisutnosti antitijela samo na jedan granični protein.

Otkrivanje antitijela za antigen p24 može ukazivati \u200b\u200bna razdoblje početka serokonverzije, jer su antitijela upravo prva ovom proteinu. Pozitivne reakcije s GAG i POL proteinima bez reakcije s ENV proteinima mogu odražavati ranu fazu serokonverzije, kao i ukazati na prisutnost HIV-2 infekcije ili nespecifičnog odgovora.

Upotreba u dijagnostici HIV-a kao stručne metode reakcije imunoblotiranja ima brojne značajne nedostatke:

1. nemogućnost da se potvrdi detekciju antigen p24 HIV 1 u slučaju ispitivanja koji određuju antigen i HIV antigen i antitijela, što ga čini nepraktičnom (besmislenom) upotrebom kao testove probira na istovremeno otkrivanje antigena i antitijela na HIV ( Red Ministarstva zdravstva Ruske Federacije br. 292 od 30.07. 2001.: "Ispitati donatore na krvnim transfuzijskim postajama, potrebno je koristiti testne sustave koji otkrivaju antigen i antitijela za HIV istovremeno).

2. Detekcija antitijela samo IgG klase. Nemoguće je u potpunosti potvrditi pozitivne rezultate dobivene korištenjem testova 3 i 4 generacija (detektiranje IgG i IgM antitijela).

3. Subjektivnost tumačenja procjene testa, posebno u slučajevima "sumnjivih" i "nesigurnih" rezultata iu početnim fazama serokonverzije (otkrivene trake na nitroceluloznim membranama u tim slučajevima su nejasne, jedva vidljive golim okom i nesuglasice se često promatraju u procjeni raznih osoba).

4. Nemogućnost automatizirane kvantitativne procjene rezultata analize.

5. manja osjetljivost u usporedbi s IFA.

6. Distribucija skladištenja (pri skladištima trake nitroceluloze membrane blijede i ne može biti objektivna potvrda identificiranja ili otkrivanja HIV-a u kontroverznim slučajevima).

7. Poteškoća u reakciji i skladištenju (trake nitroceluloze membrane vrlo su krhačni i često slomljeni).

8. Visoki troškovi IB skupova.

Reagens je poznat po istovremenoj definiciji antigena i antitijela na isti patogen, uključujući HIV (DE 4236189 F1, 04/28/1994). Međutim, sustav za ispitivanje se ne otkriva, što omogućuje dijagnosticiranje HIV infekcije u različitim fazama.

Cilj ovog izuma je da se dobije ispitni sustav, uz pomoć kojih je mogućnost potvrđivanja pozitivnih ili sumnjivih rezultata studija probira na antitijela na HIV 1 i 2, HIV 1 i antigen HIV 1, pri uporabi testova za Postignuta je istodobno otkrivanje antigena i antitijela.

Predloženo tehničko rješenje postiže se imunoopimenskom sustavom za identifikaciju spektra antitijela na virus ljudske imunodeficijencije (HIV) prvog i drugog tipa, prvog tipa skupine O i detektiranje antigen p24 na virus ljudske imunodeficijencije prvog Tip p24, naznačen time, da uključuje antigensku imunosorbentnu humanu imunodeficijenciju virusa koji predstavlja GP41 (EVCH-1 i HIV-2 skupine O), GP120 (ENV), P24 (GAG), P31 (POL), GP36 (ENV HIV- 2), antitijela na HIV antigen 1 p24 i detektiranje reagensa, dok su gore spomenuti HIV antigeni i HIV antitijela sorped u različitim jažicama za enzimsko imunoatey.

Osim toga, za sorpciju koriste se 96 jažica polistirena ili neinstelularna ploča za imununulalnu analizu.

Tehnički rezultat postignut ovim izumom sastoji se u mogućnosti potvrđivanja pozitivnih rezultata na antitijelima na HIV 1 i 2, HIV 1 skupine O i antigen P24 HIV 1, visoku osjetljivost, mogućnost automatizirane interpretacije rezultata, koji eliminira subjektivnost procjene, jednostavnost testiranja manje nego u usporedbi s postojećim skupovima IB troškova.

Ovo tehničko rješenje se razlikuje od poznatih:

1. Koristite kao tableta nosača krute faze za imunološke reakcije.

2. Simultano korištenje kao antitijelo sorbent na r 24 HIV i skup HIV antigena.

Izum je ilustriran sljedećim primjerom.

Trenutni početak razvijenog sustava ispitivanja "DS-IFA-anti-HIV 1,2-spektrom + AG P24 HIV 1" su:

Imunosorbent - rekombinantni antigeni, slični strukturnim proteinima HIV-1: Gp41 (ENV HIV-1 i HIV 1 skupina O), GP120 (ENV), P24 (GAG), P31 (POL), HIV-2: GP36 (ENV ) i monoklonska antitijela miša na HIV 1 (p24), sorbed odvojeno na trakama polistiren sklopivog tableta.

Za pripremu imunosorbentne uporabe:

1. HIV-1 GP41 - protein proizveden s naprezanjem E. coli br. Yaiv 103.

2. HIV-1 GP120 - protein proizveden s naprezanjem E. coli br. Yaiv 109.

3. HIV-1 p24 - protein proizveden na soj E. coli br. Yaiv 105.

4. HIV-1 p31 - protein proizveden s naprezanjem E. coli br. Yaiv 108.

5. HIV-2 p36 - protein proizveden pomoću naprezanja E. coli br. Yaiv 106.

Konjugat 1, liofilizirani ili tekući-monoklonski miša antitijela za antigen R24 HIV1 konjugiran s biotinom.

1. konjugat 2, liofilizirana ili tekućina, smjesa rekombinantnih antigena sličnih strukturnim proteinima HIV-1: GP41 (ENV HIV-1 i HIV 1 skupine O), GP120 (ENV), P24 (GAG), P31 (PO1); HIV-2: GP36 (ENV) konjugiran s biotinom;

2. konjugati 3, 4 - liofilizirani ili tekući - streptavidin, obilježeni klon peroksidazom;

Tijekom preliminarnih studija odabrana je dizajn testnog sustava, razrađena je tehnologija pripreme njegovih komponenti, optimizirani su uvjeti za provođenje reakcije imunofermenata.

Prilikom instaliranja ELISA-e u ispitnom sustavu "DS - IFA - Anti-HIV 1,2-spektrom + AG P24 HIV 1" u jažicama tablete sa sorbed antitijela do P24, 25 ul konjugata-1 dovede se u jažice , iu bušotinama sa sorbed antigena - za 25 ul konjugata-2. Shema reakcije formulacije je prikazana u nastavku. Zatim se u svaku jažicu doda 25 ul uzorka uzorka. U isto vrijeme, u bunarima s antigenima, boja se mijenja od narančaste na ružičaste, te u bušotinu s antitijelima - s zelenim na sivom bojom. Smjesa se inkubira 45 minuta na 37 ° C na mućkalici (ili 1 sat na 37 ° C u termostatu). Zatim, bez pranja, 50 ul konjugata-3 je dovedeno u rupe tablete kako bi se odredio antigen p24, au jažicama za određivanje antitijela od 50 ul konjugata-4. Nakon inkubacije 20 minuta na 37 ° C na mućke (ili 30 minuta na 37 ° C u termostatu), tableta je isprana i pokazuje smjesu supstrata. Ukupno vrijeme reakcije 1 h 25 min (ili 1 h 50 min). Antigen P24 prisutan u ispitivanom uzorku povezan je s monoklonskim antitijelima do P24, a specifična antitijela tvore kompleks s rekombinantnim antigenima na tableti. Dobiveni imunološki kompleks anti-p24 s P24 je detektiran anti-p24-biotinskim konjugatima, zatim streptavidin peroksidazom i imunološkim kompleksima HIV-a s konjugatom na HIV-AG-Biotin, zatim streptavidin peroksidaze.

Shema formulacije reakcije.

Računovodstvo rezultata provodi se spektrofotometrijski na dvije valne duljine: 450/620-680 nm s postavkom instrumenta "zrakom". Pretpostavimo rezultate rezultata na jednoj valnoj duljini od 450 nm.

Rezultati analize uzimaju se u obzir ako prosječne vrijednosti optičke gustoće (op) u jažicama s k- ne više od 0,2, u jažicama s k + - ne niže od 1.0. Op crit. Izračunajte formulom:

Op crit. GP41 \u003d usp. Znak OP K- (GP41) +0.15

Op crit. GP120 \u003d Wed. Znak OP K- (GP120) +0.15

Op crit. P24 \u003d sri. Znak OP K- (p24) +0.15

Op crit. p31 \u003d usp. Znak OP K- (p31) +0.15

Op crit. GP36 \u003d usp. Znak OP K- (GP36) +0.15

Op crit. AG P24 \u003d Wed. Znak OP K- (AG P24) +0.04

gdje su 0,15 i 0,04 koeficijenti uspostavljeni metodom statističke obrade na proizvođaču. U procesu razvoja testnog sustava korišteno je:

1. Uzorci serumskih donatora krvi (N \u003d 610).

2. Uzorci bolesnika u serumu u krvi s različitim zaraznim bolestima koji nisu povezani s HIV-om (ORZ, upale pluća, angine, herpetičke i citomegalovirusne infekcije, sifilis, klamidija, virusni hepatitis A, B i C (n \u003d 224)).

3. Uzorci sera krvi bolesnika s različitim nekonkomuntičnim bolestima - ozljeda, bolesti kardiovaskularnog sustava, onkologije (n \u003d 35).

4. Uzorci serumske krvi trudnica (n \u003d 40).

5. Uzorci serumskog seropozitivnog seropozitivnog u ELISA i potvrđeni u imunoblotu (n \u003d 428).

6. Uzorci seruma s pozitivnim rezultatom dobivenim u imunoformalnim testnim sustavima za istovremeno određivanje HIV 1,2 antitijela i antigen P24 i neizvjestan rezultat imunoblota (n \u003d 123).

7. Unutarnji panel seruma koji sadrži i ne-antitijela za HIV 1.2, testiran na registriranom od strane Ministarstva zdravstva imunovladatih sustava imunofermenta i imunoblota (n \u003d 21).

8. Standard "HIV 1 standard antigena", "Bio Rad", Francuska, mačka. 72217, koji je antigen izveden iz virusne lizata.

9. Unutarnji standard poduzeća. Uzorak koji sadrži P 24 antigen u koncentraciji od 200 pg / ml dobivenih iz virusnih lizata i rafiniranih prema standardu "HIV 1 antigen" standard tvrtke "Bio Rad", Francuska, mačka. №72217.

10. Standardna serumska ploča koja sadrži antitijela na virus ljudske imunodeficijencije prvog tipa (HIV 1) - OSO 42-28-212-93-02P, "Medicinski i biološki uniji", Novosibirsk.

11. Standardna serumska ploča koja sadrži antitijela na virus ljudske imunodeficijencije drugog tipa (HIV 2) - Oso-42-28-216-02p, "Medičko-biološki uniji", Novosibirsk.

12. Standardna serumska ploča koja ne sadrži antitijela za virus ljudske imunodeficijencije prvog tipa i drugog (HIV 1, 2) - Oso-42-28-214-94-02P, "Medicinski i biološki uniji", Novosibirsk.

Procjena osjetljivosti sustava ispitivanja tijekom detekcije antigen p24 provedena je korištenjem standardnog standarda HIV I antigena, bio Rad, unutarnji standard poduzeća. Prilikom korištenja unutarnjeg standarda, 4 uzastopna 2-struko razrjeđenja iz 40 pg / ml do 5 pg / ml pripravljene su s normalnom donatorskom plazmom koja ne sadrži antitijela na HIV 1, 2, kao pozornicu. Najmanji dio detejunog antigena je uzet za kriterij osjetljivosti. Dobiveni podaci prikazani su u tablici 1.

Za procjenu osjetljivosti sustava za ispitivanje tijekom detekcije specifičnih antitijela korištena su standardne ploče uzoraka koji sadrže antitijela na virus imunodeficijencije (HIV 1, 2) (OSO 42-28-212-93-02P S.012, OSO 42-28 -216- 02P (HIV 2) od.003).

Dobiveni podaci prikazani su u tablicama 3, 4.

Usporedba je izrađena od dijagnostičke učinkovitosti sustava ispitivanja "DS-IFA-anti-HIV 1,2-spektrom + AGR24 HIV 1" s testnim sustavima "Jenskrin-HIV-AG / AT" (Bio-RAD), "DIA -Hiv 1/2 "(diaprof-med)," viro-via-oblik II AG / AM "(biomeriux)," rekombinantni HIV1.2 DSM "(MBS)," Amercard Anti HIV-1,2 K "(Amercard ), "HIV-1, HIV-2-IFA Avicenna" (Avicenna). Za to se uzorci seruma s unutarnjeg panela testirani su u svim određenim testovima. Rezultati prikazani u tablici 5 ukazuju na visoku dijagnostičku učinkovitost "DS-IFA-Anti-HIV 1.2-spektrom + AG24 HIV 1".

Studije osjetljivosti ispitnog sustava "DS-IFA-anti-HIV 1,2-spektrom + AG24 HIV 1" također su provedeni s serumima bolesnika potvrđenih u imunoblotu kao HIV pozitivan. Testirano 428 uzoraka takvih seruma. Dobiveno je nekoliko opcija za otkrivanje protutijela na različite HIV proteine \u200b\u200bi antigen P24. Rezultati su prikazani u tablici 6.

Prilikom testiranja HIV 1 pozitivne uzorke, 3% seruma pokazalo je pozitivnu reakciju s GP36 (ENV HIV 2). Op / opkrit. U ovim uzorcima nisu prelazili 2.0. Naši podaci o unakrsnoj reaktivnosti vanjske ljuske HIV-a 1 (GP41) i HIV 2 (GP36) se podudaraju s podacima o literaturi.

Tumačenje rezultata

Analiza ispitivanja HIV pozitivnih seruma i uzoraka iz standardnih i unutarnjih panela u "DS-IFA-anti-HIV 1,2-spektrom + AG24 HIV 1" dopušteno je razviti kriterije za tumačenje rezultata ovog testa. Preporučeni kriteriji prikazani su u tablici 7.

Na temelju ovih kriterija, svi uzorci HIV pozitivne serume (N \u003d 428) definirani su kao pozitivni i u "DS-IFA-anti-HIV 1.2-spektrom + AG24 HIV1". Od 16 uzoraka standardnog panela koji sadrži antitijela na HIV 1, 14 su definirani kao pozitivni i 2 kao nejasne. Sva 8 uzoraka sa standardne ploče koji sadrži antitijela na HIV 2 definiraju se kao pozitivni. Od 10 uzoraka unutarnjeg panela koji sadrže antitijela na HIV 1, 7 su definirani kao pozitivni i 3 kao nejasne.

Ispitivanja osjetljivosti sustava ispitnog sustava "DS-IFA-anti-HIV 1,2-spektrom + AGRA24 HIV1" su također provedeni s serumima bolesnika s pozitivnim rezultatom u imunomimenzionalnim testnim sustavima, istovremeno otkrivanjem antitijela i antigena P224, i nesigurno u imunoblotu. Ispitano 123 takve uzorke. Podaci su prikazani u tablici 8.

Kada se testiranje serumi s neodređenim imunoblotom (n \u003d 123) u "DS-IFA-anti-HIV 1,2-spektrom + AG24 HIV 1" 72 uzorak (58,5%), pokazao je pozitivan rezultat. Od njih, 26 seruma (21,1%) je pozitivno samo P24, 20 (16,3%) - samo u antitijelima, 16 (13%) - prema P24 s antitijelima na jedan od proteina, 10 (8,1%) - prema P24 s antitijelima do dva ili više proteina. Tako bi ispitivanje samo na antitijelima (bez detekcije P24) odredila kao pozitivni 30 uzoraka (24,4%). Otkrivanje u ispitivanju antigen P24 omogućio je da se odrekne kao pozitivni dodatno 42 uzorak (34,1%).

Za procjenu specifičnosti testnog sustava, korištena je standardna seraska ploča koja ne sadrži antitijela na HIV 1, 2 (n \u003d 20); Zdravi donatori serum uzorci (n \u003d 610), uzorci bolesnika u serumu u serumu s različitim zaraznim bolestima (n \u003d 224), koji nisu povezani s HIV; Uzorci bolesnika u serumu krvi s različitim nekonmomuntičnim bolestima - ozljeda, bolesti kardiovaskularnog sustava, onkologije (n \u003d 35); Uzorci krvnog seruma trudnica (n \u003d 40). Testirano 929 uzoraka. Jedan uzorak iz serumskih donatora krvi pokazao je lažni pozitivan rezultat - otkrivena su antitijela na GP41 i P24. 7 uzoraka krvnih seruma zdravih donatora i 2 uzorka bolesnika u serumu krvi s infektivnim bolestima koji nisu povezani s HIV-om pokazali su lažni pozitivni rezultat pomoću P24.

Za procjenu specifičnosti testnog sustava korištena je standardna ploča negativnih uzoraka (OSO 42-28-214-94-02P, od.009). Specifičnost je bila 100%.

Stoga su studije pokazale da specifičnost ispitnog sustava "DS-IFA-anti-HIV 1,2-spektrom + AGR24 HIV 1" je 99% u proučavanju uzoraka krvnog seruma normalnih donatora i bolesnika s raznim zaraznim i somatske bolesti.

Dobiveni podaci pokazuju visoku dijagnostičku učinkovitost razvijenog sustava testiranja "DS-IFA-Anti-HIV 1.2 Spectrum + AG24 HIV 1". Ispitni sustav se može koristiti za otkrivanje antitijela za razdvajanje proteina HIV 1 i 2 tipa i 2 antigen R24 HIV1 kako bi se potvrdio pozitivan rezultat sustava ispitivanja probira koji detektiraju antitijela ili ispitne sustave koji su istovremeno detektiraju antitijela i antigen p24 HIV1. Testni sustav može se koristiti kao alternativni imunoblot test za potvrdu pozitivnih rezultata, kao i za studije dinamike antitijela na HIV i antigen P24 u različitim fazama infekcije.

Prednosti tijesta

1. Potvrđivanje imunovladinog testa formata tableta

2. Potvrda testa, kombiniranje određivanja spektra antitijela HIV 1, 2 i antigen P24 HIV 1

3. Detekcija antitijela svih IG klasa

4. Osjetljivost tijekom detekcije p24 najmanje 5 pg / ml

5. Omogućuje vam da smanjite broj neizvjesnih rezultata u usporedbi s imunoblotom

6. Vrijeme analize - 1 h 25 min (imunoblot - od 3 do 20 sati)

7. Vizualna procjena uvođenja svih komponenti i uzoraka.

1. imuno-imunimatski ispitni sustav za identifikaciju antitijela virusu ljudske imunodeficijencije (HIV) prvog i drugog tipa, prvog tipa skupine O i detekcije antigen p24 na virus ljudske imunodeficijencije prvog tipa p24, naznačen time da uključuje imunosorbent na temelju imunodeficijencije virusa antigen osobu koja predstavlja GP41 (ENV HIV-1 i HIV-2 skupine O), GP120 (ENV), P24 (GAG), P31 (POL), GP36 (ENV HIV-2), antitijela na HIV antigen 1 p24 i detektiranje reagensa, dok su gore spomenuti HIV antigeni i HIV antitijela sorped u različitim jažicama za enzimsko imunoatey.

2. Sustav ispitivanja imunofermenta u skladu s patentnim zahtjevom 1, naznačen time, da se sorpcija koristi 96-jažice polistiren ili neinstelularne ploče za enzimsko imunolaj.

Pravovremena dijagnoza HIV infekcije postaje iznimno važna mjera, jer prije početka liječenja može u velikoj mjeri unaprijed odrediti daljnji razvoj bolesti i proširiti život pacijenta. U posljednjih nekoliko godina uočeno je značajan napredak u području identificiranja ove strašne bolesti: naprednije, metode istraživanja dolaze za zamjenu starih testnih sustava, a njihova točnost značajno se povećava.

U ovom članku, mi ćemo reći o modernim metodama dijagnosticiranja HIV infekcije, što je korisno za pravodobno liječenje ovog problema i održavati normalnu kvalitetu života bolesti.

Tehnike dijagnostike HIV-a

U Rusiji se provodi standardni postupak za dijagnozu HIV infekcije, koja uključuje dvije razine:

• ELISA testni sustav (analiza probira);
• imunološki blot (IB).

Ostale tehnike mogu se primijeniti i na dijagnostiku:

• express testovi.

IFA testni sustav

U prvoj fazi dijagnostike, test probira (ELISA) se koristi za otkrivanje HIV infekcije, koja se temelji na HIV proteinima stvorenim u laboratorijima, snimanjem specifičnih antitijela generiranih u tijelu kao odgovor na infekciju. Nakon interakcije s reagensima (enzima), ispitni sustav mijenja boju indikatora. Zatim se ove promjene boje obrađuju na posebnom hardveru, koji određuje rezultat provedene analize.

Takvi testovi IFA mogu pokazati rezultat nakon nekoliko tjedana nakon uvođenja HIV infekcije. Ova analiza ne određuje prisutnost virusa, već otkriva proizvodnju antitijela. Ponekad, u ljudskom tijelu, proizvodnja antitijela za HIV započinje nakon 2 tjedna polje infekcije, ali većina ljudi se proizvode u kasnijim rokovima, nakon 3-6 tjedana.

Postoje četiri generacije IFA testova s \u200b\u200brazličitim osjetljivosti. U posljednjih nekoliko godina često se koriste testni sustavi III i IV generacije, koji se temelje na sintetskim peptidima ili rekombinantnim proteinima i imaju veću specifičnost i točnost. Oni se mogu koristiti za dijagnosticiranje infekcije HIV-a, praćenja HIV-a prevladavanja i sigurnosti prilikom provjere donora krvi. Točnost IFA testnih sustava III i IV generacije je 93-99% (osjetljiviji testovi koji se proizvode u zapadnim zemljama - 99%).

Za izvršenje IFA testa uzima se 5 ml krvi od pacijentovih vena. Između posljednjeg obroka i analize treba potrajati najmanje 8 sati (u pravilu, izvodi se ujutro na prazan želudac). Takav test se preporučuje da ne uzimaju ne ranije od 3 tjedna nakon navodne infekcije (na primjer, nakon nezaštićenog spolnog odnosa s novim seksualnim partnerom).

Rezultati IFA testova dobivaju se nakon 2-10 dana:

• negativan rezultat: ukazuje na nedostatak HIV infekcije i ne zahtijeva pristup stručnjaku;
• false Negativni rezultat: Može se uočiti u ranim uvjetima infekcije (do 3 tjedna), na kasnijim fazama AIDS-a s izraženim suzbijanjem imuniteta i nepravilno provedenom pripravom krvi;
• lažno-pozitivni rezultat: Može se uočiti u određenim bolestima i nepravilno provedenom pripravkom krvi;
• pozitivan rezultat: ukazuje na infekciju HIV infekcije, zahtijeva IB i cirkulaciju pacijenta stručnjaku u Centru za AIDS.

Zašto IFA test daje lažne pozitivne rezultate?

Lažno-pozitivni rezultati IFA testova na HIV mogu se promatrati s nepravilnom obradom krvi ili u bolesnika s takvim uvjetima i bolestima:

• multipli mijelom;
• zarazne bolesti koje su izazvale virus Epstein-Barr;
• stanje nakon;
• autoimune bolesti;
• protiv pozadine trudnoće;
• stanje nakon cijepljenja.

Uz gore opisane uzroke krvi mogu biti prisutni nespecifične međusmjerne antitijele, čija proizvodnja nije izazvana HIV infekcijom.

U posljednjih nekoliko godina, učestalost lažnih pozitivnih rezultata značajno se smanjila zbog korištenja generiranja sustava ispitivanja III i IV, koji sadrži osjetljiviji peptidni i rekombinantni proteini (oni se sintetiziraju s in vitro genetskom inženjeringom). Nakon početka upotrebe takvih IFA testova, učestalost lažnih pozitivnih rezultata značajno se smanjila i iznosi oko 0,02-0,5%.

Identifikacija lažno pozitivnog rezultata ne znači da je osoba zaražena HIV-om. U takvim slučajevima, koji preporučuje drugi IFA test (potrebna iv generacija).

Krv pacijenta šalje se u referentni ili arbitražni laboratorij s bilješkom "Ponovite" i istražuje se na generiranju IFA test sustava IV. Ako je rezultat nove analize negativan, onda se prvi rezultat prepoznaje kao pogrešan (lažno pozitivan) i IB se ne provodi. S pozitivnim ili sumnjivim rezultatom, tijekom drugog testa, pacijent je nužno dodijeljen da provodi IB nakon 4-6 tjedana da potvrdi ili opovrgne HIV infekciju.

Imunološki blot

Konačna dijagnoza HIV infekcije može se instalirati tek nakon primitka pozitivnog rezultata imunološkog blotiranja (IB). Koristi nitroceluloznu traku na kojoj se primjenjuju virusni proteini.

Ograda krvi za IB se izvodi od vena. Zatim je podvrgnut posebnoj obradi i proteinima sadržanim u svom serumu odvojeni su u posebnom gelu prema njihovom punjenju i molekulske mase (manipulacija se provodi na posebnoj opremi pod utjecajem električnog polja). Nitroceluloza se nameće gel u serumu u krvi i blokiranju ("oštećenja") u posebnoj komori. Traka se obrađuje i ako postoje antitijela za HIV u korištenim materijalima, oni su povezani s antigenskim prugama na IB i manifestiraju se kao linije.

IB se smatra pozitivnim ako:

• prema američkim kriterijima CDC-a - postoje dvije ili tri retka GP41, P24, GP120 / GP160;
• prema kriterijima američke FDA - na traci postoje dvije linije P24, P31 i linija GR41 ili GR120 / GR160.

U 99,9% slučajeva pozitivan rezultat IB ukazuje na infekciju HIV-a.

U odsutnosti linija - IB je negativan.

Prilikom identificiranja linija s GR160, GR120 i GR41- ib je upitno. Ovaj rezultat se može otkriti na:

• onkološke bolesti;
• trudnoća;
• Česte transfuze krvi.

U takvim slučajevima preporuča se izvođenje ponovnog studija pomoću skupa druge tvrtke. Ako, nakon dodatne IB, rezultat ostaje sumnjiv, onda je potrebno promatrati šest mjeseci (IB se održava svakih 3 mjeseca).

Reakcija lančane polimeraze

Test na PCR može odrediti RNA virusa. Njegova osjetljivost je dovoljno visoka i omogućuje vam da identificirate HIV infekciju nakon 10 dana nakon infekcije. U nekim slučajevima PCR može dati lažne pozitivne rezultate, jer njegova visoka osjetljivost može reagirati na antitijela na druge infekcije.

Ova dijagnostička tehnika je skupa, zahtijeva posebnu opremu i visoke kvalifikacije stručnjaka. Ovi razlozi ne dopuštaju ga da ga provede s masovnim testiranjem stanovništva.

PCR se primjenjuje u takvim slučajevima:

• identificirati HIV u novorođenčadi koji su rođeni iz majki zaraženih HIV-a;
• identificirati HIV u "prozorskom razdoblju" ili s sumnjivim IB;
• kontrolirati koncentraciju HIV-a u krvi;
• za istraživanje krvi donatora.

Samo na PCR testu, HIV nije napravljen, već se provodi kao dodatna dijagnostička metoda za rješavanje kontroverznih situacija.

Izraziti metode

Express testovi čiji se rezultati mogu vrednovati nakon 10-15 minuta postali su jedna od inovacija u dijagnostici HIV-a. Najučinkovitiji i točniji rezultati dobivaju se pomoću imunokromatografskih testova na temelju načela kapilarnog toka. Oni su posebne trake na kojima se primjenjuje krv ili druge proučavane tekućine (slina, urin). Ako postoje antitijela za HIV, 10-15 minuta kasnije, pojavljuju se boja i kontrolna traka na testu - pozitivan rezultat. Uz negativan rezultat - pojavljuje se samo kontrolna traka.

Kao nakon IFA testova, rezultati ekspresnih testova moraju se potvrditi IB analizom. Tek nakon što se to može dijagnosticirati HIV infekcije.

Postoje izraziti setovi za kućno testiranje. Test Orasure Technologies1 (SAD) odobrila je FDA, prodana bez recepta i može se koristiti za identifikaciju HIV-a. Nakon testiranja, u slučaju pozitivnog rezultata, pacijent se preporučuje da prođe anketu u specijaliziranom centru za potvrdu dijagnoze.

Preostale domaće testove još nisu odobreni od strane FDA-e, a njihov rezultat može biti vrlo sumnjivo.

Unatoč činjenici da su Express testovi inferiorni prema IFA testovima IV generacija, oni se naširoko koriste za dodatno ispitivanje stanovništva.

Možete proći testove kako biste identificirali infekciju HIV-a u bilo kojoj poliklinici, CRH ili u specijaliziranim centrima za AIDS. U Rusiji se provode apsolutno povjerljivi ili anonimno. Svaki pacijent može računati na dobivanje medicinskih ili psiholoških savjeta prije ili nakon analize. Morat ćete platiti HIV testove samo u komercijalnim medicinskim ustanovama, a oni su ispunjeni u javnim klinikama i bolnicama.

O tome kako možete zaraziti infekcijom HIV-a i koje postoje mitovi o mogućnostima da postanu zaraženi, čitati

Najveća distribucija danas u svijetu je primljena od strane AIDS - virus od subferiolije retrovirusa, oni se također nazivaju lentivirus ili "spori". Doista, u ljudskom tijelu počinju pokazivati \u200b\u200baktivnost nakon relativno dugo vremena, oko 10 godina.

Postoji imunodeficijencija prvog i drugog tipa. Ali možete sigurno govoriti o širenju prvog tipa virusa. Pronalaženje u krvi i pridruživanje kavezu koji je odgovoran za imunitet, virus se počinje brzo umnožavati. Dok CD4 molekula, koja je odgovorna za njegovo priznanje, identificira lukav neprijatelja, on ima vremena za zarazu cijelog organizma. Dakle, prije je dijagnosticirati, to su veće šanse za pacijenta da se pravovremeno liječe i žive duže.

Ako osoba ima razlog za provjeru za AIDS, to bi trebalo odmah napraviti. Najčešće, osnova takve dijagnoze je definicija antitijela na imunodeficijenciju - proteine \u200b\u200bkoji se javljaju kao reakcija na prisutnost virusa, i počinju se formirati u razdoblju od 1,5 do 6 mjeseci od mogućeg infekcije. Prema tome, to je prikladnije podvući dijagnozu nakon tog razdoblja.

Količina antitijela određuje se pomoću analize koja se naziva ime imunoferment (ELISA). Ova metoda je pouzdana, relativno je točna i vrlo osjetljiva, ovi pokazatelji su preko 99, 5%. Farmaceutski tržište nudi brojne dijagnostičke testove za ELISA: HIV commision, anti-HIV 1 2, anti-HIV, anti-HIV combibest, kombinirani anti-HIV 1 2 D 0172. Ovi testni sustavi pripadaju trećoj generaciji. Nedostatak tih reagensa: Oni ne otkrivaju uvijek bolest u ranim uvjetima. Osoba je već virusni prijevoznik, potencijalno je opasno za partnere, ali antitijela u krvi još nisu prisutna.

Kompleti su uglavnom opremljeni brojem testova za 12 * 8 ili 192 anti-HIV testove. Ne preporučuje se da ih koristite sami. U opisu lijekova ukazuje na to da je njihova glavna svrha identificirati količinu antitijela za AIDS obje vrste. I također identificirati antitijela svih razreda za AIDS. Ako nema antitijela, to znači da se bolest ne dijagnosticira.

Četvrta generacija testova "vidi", osim antitijela i AIDS antigena, oni mogu otkriti infekciju ranije od treće generacije. Za usporedbu: HIV antigen je u krvi, počevši od 5. dana, a prva antitijela ne izgledaju ranije nego za mjesec dana. HIV 1, 2 AG / AC (Komle 1) i HIV 1, 2 AG / AT (SET 2) pripadaju testovima 4. generacije. Uzimanje prednost skupa tih reagensa, detektiraju se antitijela za tip 1, 2 i antigen P24, istražujući serum ili plazmu ljudske krvi. Mnoge zemlje koriste ELISA testiranje 4 generacije, koje također također uzrokuju naziv antigen / antitijela, skraćeno - agat.

Ispitivanje se provodi anonimno.

Opis

Priprema

Indikacije

Tumačenje rezultata

Opis

Metoda definicije Analiza imuno enzim (ELISA).

Materijal pod studijem Krv u serumu

Dostupno odlazak u kuću

Kombinirana detekcija antitijela na HIV tipove 1 i 2 i 2 i antigen R24 HIV, visokokvalitetni test.

Pažnja. Uz pozitivne i sumnjive reakcije, rok za izdavanje rezultata može se povećati na 10 radnih dana. HIV (virus ljudske imunodeficijencije), uzrokujući AIDS (stečena sindrom imunodeficijencije) - pripada obitelji retrovirusa. S osobom na osobu kada se koristi kontaminirane igle i šprice za intravensku primjenu lijeka ili terapijski postupci, s seksualnim kontaktima kao što je hetero i homoseksualac. Prijenos virusa može se dogoditi kada se prelijeva zaražena krv i njezinih proizvoda, donacije organa ili sjemenki, medicinski radnici - kada se ubrizgavaju zaraženim igalima ili alatima. HIV infekcija je moguća za prijenos iz djetetove zaražene majke (vertikalni put), iako moderne metode prevencije koristeći antiretrovirusnu terapiju, pri ispunjavanju svih preporuka, smanjuju takav rizik za minimum.

Proces interakcije između virusa s stanicom uključuje brojne faze: vezanje virusa s stanicom, otpustite ga iz ljuske, penetracije u citoplazmu, sintezu DNA za virusnu RNA, ugrađuje virusnu DNA u stanicu domaćina genom. Nakon toga počinje latentna faza infekcije. U takvom stanju, dokazivanje DNK može postojati neko vrijeme bez pokazivanja aktivnosti i bez utjecaja na vitalnu aktivnost stanice domaćina. Nema ekspresije virusnih proteina, ne postoji imunološki odgovor na virus. HIV protutijela, karakterizirajući imunološki odgovor tijela, pojavljuju se nakon aktivacije virusne DNA i početak aktivnog uzgoja virusa. Trajanje latentnog razdoblja ovisi o nizu čimbenika, uključujući pojedinačne genetske značajke tijela.

HIV protutijela mogu se pojaviti od drugog tjedna nakon infekcije; Njihov se sadržaj povećava za 2-4 tjedna i održava se tijekom godina. U 90-95% onih zaraženih, pojavljuju se u prva tri mjeseca nakon infekcije, 5-9% - u razdoblju od tri do šest mjeseci, u 0,5-1% - kasnije.

U prvim tjednima infekcije, čak i prije pojave antitijela na virus (tj. Prije servo-konverzije), u uzorcima seruma ili plazme, može se identificirati prisutnost HIV antigena, uključujući i kapsidni protein p24. Kasnije, nakon serokonverzije, obično postaje neodređeno.

Kombinirani sustavi za testiranje 4. generacije, koji uključuju HIV AG / AB Combo test (arhitekt, Abbott), otkrivaju i antitijela na HIV 1 i 2 vrste i HIV antigen R24, što omogućuje rano otkrivanje infekcije. Posebne karakteristike testa invitro screening koji se koristi u laboratoriju za detekciju infekcije HIV treba pripisati visokim specifičnosti istraživanja (\u003e 99,5%); 100% osjetljivost na antitijela karakteristična za razdoblje serokonverzije i osjetljivost ispitivanja na P24 antigen od oko 18 pg / ml.

Postupak za provođenje laboratorijskog istraživanja o HIV-u strogo je reguliran nalozima Ministarstva zdravstva Ruske Federacije i uključuje korak probira (kvalifikacijskog) studija o prisutnosti antitijela na HIV Imununine (IFA) dopuštene za uporabu, i Faza provjere (potvrđivanje) detaljnije studije u laboratoriju Centra za AIDS. Treba napomenuti da čak i najbolji probir IFA sustavi ne jamče 100% specifičnost, to jest, postoji određena vjerojatnost dobivanja nespecifičnih, lažnih pozitivnih rezultata povezanih s osobitostima pacijentovog krvnog seruma. Stoga, pozitivan rezultat pregleda IFA-e možda neće biti potvrđen u ispitivanjima potvrde, nakon čega će pacijent dati negativan ili neodređeni rezultat. Uz neodređeni rezultat potvrde studije, testiranje se treba ponoviti u dinamici u 2-3 tjedna.

Laboratorijska dijagnoza HIV infekcije kod djece rođenih iz majki zaraženih HIV-om ima vlastite karakteristike. U njihovoj krvi, do 18 mjeseci od trenutka rođenja može cirkulirati majčinske antitijela na HIV (klasa IgG). Nepostojanje antitijela na HIV u novorođenčadi ne znači da virus nije prodrljan kroz placentnu barijeru. Djeca majki zaraženih HIV-om podliježu laboratorijskim i dijagnostičkim istraživanjima za 36 mjeseci nakon rođenja.

Priprema

Posebna priprema nije potrebna. Krv ne uzima ranije od 4 sata nakon posljednjeg obroka. Mogu se pronaći opće preporuke za pripremu istraživanja. Preporučljivo je provesti studiju o detekciji antigena i antitijela na HIV ne ranije od dva tjedna nakon moguće infekcije, a ponavljajući ga kroz tri i šest tjedana u slučaju negativnog rezultata. Registracija zahtjeva za istraživanje u LLC "Invitro" provodi se na putovnici ili dokumentu, zamjenjujući ga (migracijska kartica, privremena registracija na mjestu prebivališta, potvrdu o službenicima, certifikat iz tablice putovnice s gubitkom putovnice, registracijskoj kartici računovodstva iz hotela). Prikazani dokument nužno mora sadržavati informacije o privremenoj ili trajnoj registraciji na području Ruske Federacije i fotografije. U odsutnosti putovnice (dokument koji ga zamjenjuje), pacijent ima pravo izdavati anonimnu primjenu za isporuku biomaterijala. Uz anonimno ispitivanje, zahtjev i klijent koji je primio od klijenta, broj biomaterijala dodjeljuje se broj koji je poznat pacijentu, a medicinsko osoblje, koje je napravio red. ! Rezultati istraživanja koje se izvode anonimno ne mogu se podnijeti za hospitalizaciju, profesionalne inspekcije i ne podliježu registraciji u pištolju.

Oznaka za imenovanje

• Povećanje limfnih čvorova više od dva područja.
• Leukopenija s limfopenijom.
• Noćno znojenje.
• Oštri gubitak težine nejasnom razlogu.
• Proljev više od tri tjedna nejašnjeg razloga.
• Groznica nejasna uzroka.
• Planiranje trudnoće.
• Preoperativna priprema, hospitalizacija.
• Otkrivanje sljedećih infekcija ili njihovih kombinacija: tuberkuloza, mastistička toksoplazmoza, često rekurentna herpesvirusna infekcija, unutarnji organi kandidijaza, re-neuralgija herpes-zoster, uzrokovane mikoplazmom, pneumatskim ili legionelcima pneumonije.
• Sarcoma Caposhi u mladoj dobi.
• Slučajni spolni kontakti.

Tumačenje rezultata

Tumačenje rezultata istraživanja sadrži informacije o liječniku i nije dijagnoza. Informacije iz ovog odjeljka ne mogu se koristiti za samodijagnostiku i samoobradu. Točna dijagnoza donosi liječnik koristeći i rezultate ovog istraživanja i potrebne informacije iz drugih izvora: anamneze, rezultate drugih istraživanja, itd.

Mjerne jedinice u neovisnom laboratoriju Invitro: test kvalitete. Oblik obrazaca oblika: U odsutnosti antitijela na HIV 1 i 2 i antigen P24, odgovor je "negativan". U slučaju detekcije antitijela do HIV-a ili antigena u enzibima probira, uzorak seruma šalje se na potvrdu imunoblot metode u centru grada AIDS-a, što potvrđuje pozitivne i nesigurne rezultate.

Pozitivan rezultat:

1. Infekcija HIV-a;
2. lažni pozitivan rezultat koji zahtijeva ponovljeno ili dodatno istraživanje *);
3. studija je neformativna u djece mlađe od 18 godina, rođena iz majki zaraženih HIV-om.

* Specifičnost sustava ispitivanja probira antitijela na HIV 1 i 2 i HIV AG / Combo, Abbott (HIV AG / AB Combo, Abbott), prema proizvođaču reagensa, iznosi oko 99,6% u općoj populaciji i u skupini bolesnika s potencijalnim smetnji (HBV, HCV, Rubeola, Hav, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E. coli, Chl.trach, itd, autoimune patologije (uključujući reumatoidni artritis, prisutnost antinuklearnih antitijela), Trudnoća, trudnoća, trudnoća, povišeni IgG, IGM, monoklonska gamapapaty, hemodijaliz, više hemotransphus).