การตรวจเลือดเพื่อหาเม็ดเลือดแดง ปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดง (HRA) ผลการวิเคราะห์และการตีความ

RHA ขึ้นอยู่กับความสามารถของเซลล์เม็ดเลือดแดงในการเกาะติดกันเมื่อมีการดูดซับแอนติเจนบางชนิด สารแขวนลอยและน้ำคร่ำ สารแขวนลอยของเยื่อ chorioallantoic ของเอ็มบริโอไก่ สารแขวนลอยและสารสกัดจากวัฒนธรรมหรืออวัยวะของสัตว์ที่ติดเชื้อไวรัส และวัสดุติดเชื้อพื้นเมืองใช้เป็นวัสดุทดสอบสำหรับการเกิดเม็ดเลือดแดง RGA ไม่ใช่ทางเซรุ่มวิทยาเนื่องจากมันเกิดขึ้นโดยไม่ต้องมีส่วนร่วมของซีรั่มภูมิคุ้มกันและใช้เพื่อเลือกการเจือจางการทำงานของแอนติเจนสำหรับการแสดง RGA หรือการมีอยู่ของแอนติเจน (ไวรัส) ในวัสดุทดสอบ (ตัวอย่างเช่นสำหรับไข้หวัดใหญ่) ปฏิกิริยานี้ใช้เซลล์เม็ดเลือดแดงของสัตว์ นก และมนุษย์ในกลุ่มเลือด I (0)

ในการตั้งค่า RGA โดยประมาณ จะมีการหยดเซลล์เม็ดเลือดแดงแขวนลอย 5% และวัสดุทดสอบหนึ่งหยดลงบนสไลด์แก้วและผสมให้เข้ากัน หากผลลัพธ์เป็นบวกหลังจากผ่านไป 1-2 นาทีจะสังเกตเห็นการเกาะกลุ่มกันของเม็ดเลือดแดงที่ตกตะกอนด้วยตาเปล่า

ในการตั้งค่า RGA ในแถวที่กางออกในหลุมของแผ่นโพลีสไตรีน จะมีการเตรียมการเจือจางของวัสดุทดสอบเพิ่มขึ้นสองเท่าในสารละลายทางสรีรวิทยาในปริมาตร 0.5 มล. เพิ่มเซลล์เม็ดเลือดแดงแขวนลอย 0.5 มล. 0.25 - 1% ลงในหลอดทดลองทั้งหมด ผลลัพธ์จะถูกนำมาพิจารณาหลังจากการตกตะกอนของเม็ดเลือดแดงในกลุ่มควบคุมอย่างสมบูรณ์ (เซลล์เม็ดเลือดแดง + น้ำเกลือ) ปฏิกิริยาจะถูกนำมาพิจารณาโดยธรรมชาติของตะกอนเม็ดเลือดแดง ในกรณีที่เป็นบวก ระดับของการเกาะติดกันจะถูกทำเครื่องหมายด้วยเครื่องหมายบวก ปฏิกิริยาที่ดูเหมือนฟิล์มบาง ๆ ของเซลล์เม็ดเลือดแดงเหนียวที่ปกคลุมด้านล่างของหลอดทดลอง (ร่ม) ได้รับการประเมินด้วยข้อดีสี่ประการ ปฏิกิริยาที่มีช่องว่างในภาพยนตร์นั้นจะมีเครื่องหมายบวกสามประการ ขอบของเซลล์เม็ดเลือดแดงเหนียวนั้นมีเครื่องหมายบวกสองอันตะกอนเซลล์เม็ดเลือดแดงที่ตกตะกอนล้อมรอบด้วยโซนของเม็ดเลือดแดงที่เกาะติดกันสอดคล้องกับหนึ่งบวก ตะกอนของเม็ดเลือดแดงที่กำหนดไว้อย่างชัดเจนซึ่งแยกไม่ออกจากกลุ่มควบคุมบ่งชี้ว่าไม่มีการเกาะติดกัน ค่าไตเตอร์ถือเป็นการเจือจางสูงสุดของวัสดุทดสอบที่ทำให้เกิดการเกาะติดกันของเม็ดเลือดแดงสองบวก

หากผลลัพธ์ของ RHA เป็นบวก การศึกษาจะดำเนินต่อไปโดยกำหนดประเภทของไวรัสที่แยกได้โดยใช้ปฏิกิริยายับยั้งการสร้างเม็ดเลือดแดงกับซีรั่มเฉพาะประเภท

RTGA ขึ้นอยู่กับคุณสมบัติของแอนติซีรัมในการยับยั้งการสร้างเม็ดเลือดแดงของไวรัส เนื่องจากไวรัสที่ถูกทำให้เป็นกลางโดยแอนติบอดีจำเพาะจะสูญเสียความสามารถในการเกาะติดกันของเซลล์เม็ดเลือดแดง สำหรับการพิมพ์ไวรัสเบื้องต้น จะใช้วิธีหยดบนกระจก เพื่อสร้างประเภทของไวรัสที่แยกได้อย่างชัดเจนและไทเทรตแอนติบอดีในซีรั่ม จึงใส่ RTGA แบบขยายลงในหลอดทดลองหรือหลุม เพื่อจุดประสงค์นี้ ซีรั่มเจือจางสองเท่าจะถูกเตรียมในสารละลายทางสรีรวิทยาและเทลงใน 0.25 มล. ในการเจือจางซีรั่ม ให้เติมสารที่มีไวรัสหนึ่งหยดและสารแขวนลอยของเซลล์เม็ดเลือดแดง 1% หนึ่งหยด

เมื่อใช้ RTGA เพื่อระบุประเภทของไวรัส จะใช้ซีรั่มเฉพาะประเภทซึ่งจะถูกเพิ่มลงในปริมาตรที่เท่ากันของการเจือจางการทำงานของแอนติเจน ประเภทของไวรัสที่แยกได้จะถูกกำหนดโดยซีรั่มภูมิคุ้มกันจำเพาะที่แสดงระดับแอนติบอดีต่อไวรัสนี้สูงสุด

RGA และ RTGA ใช้กันอย่างแพร่หลายในการวินิจฉัยการติดเชื้อไวรัส ( โรคไข้สมองอักเสบจากเห็บไข้หวัดใหญ่ ฯลฯ) เพื่อตรวจหาแอนติบอดีจำเพาะและระบุไวรัสจำนวนมากจากแอนติเจนของพวกมัน

ในห้องปฏิบัติการจะใช้ปฏิกิริยาการเกิดเม็ดเลือดแดงสองชนิดที่มีกลไกการออกฤทธิ์ต่างกัน

RGA แรกเป็นแบบซีรัมวิทยา ในปฏิกิริยานี้ เซลล์เม็ดเลือดแดงจะเกาะติดกันเมื่อมีปฏิกิริยากับแอนติบอดีที่เหมาะสม (ฮีแม็กกลูตินิน) ปฏิกิริยานี้ใช้กันอย่างแพร่หลายเพื่อระบุกลุ่มเลือด

RGA ที่สองไม่ใช่ทางเซรุ่มวิทยา โดยในการเกาะติดของเม็ดเลือดแดงไม่ได้เกิดจากการ

แอนติบอดี้แต่มีสารพิเศษที่เกิดจากไวรัส ตัวอย่างเช่น ไวรัสไข้หวัดใหญ่จะจับกลุ่มเซลล์เม็ดเลือดแดงของไก่และ หนูตะเภา,ไวรัสโปลิโอ-แกะเม็ดเลือดแดง ปฏิกิริยานี้ช่วยให้เราสามารถตัดสินว่ามีไวรัสอยู่ในเนื้อหาที่กำลังศึกษาอยู่หรือไม่

ปฏิกิริยาจะดำเนินการในหลอดทดลองหรือบนแผ่นพิเศษที่มีบ่อน้ำ วัสดุที่ทดสอบว่ามีไวรัสอยู่จะถูกเจือจางด้วยสารละลายไอโซโทนิกตั้งแต่ 1:10 ถึง 1:1280; เจือจางแต่ละครั้ง 0.5 มิลลิลิตรผสมกับสารแขวนลอยเซลล์เม็ดเลือดแดง 1-2% ในปริมาตรเท่ากัน ในการควบคุมให้ผสมเม็ดเลือดแดง 0.5 มล. กับ 0.5 มล สารละลายไอโซโทนิก- วางท่อไว้ในเทอร์โมสตัทเป็นเวลา 30 นาที และปล่อยเพลตไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 45 นาที

การบัญชีสำหรับผลลัพธ์หากปฏิกิริยาเป็นบวก ตะกอนของเซลล์เม็ดเลือดแดงที่มีขอบสแกลลอป (“ร่ม”) จะปรากฏขึ้นที่ด้านล่างของหลอดทดลองหรือบ่อ ซึ่งครอบคลุมทั้งด้านล่างของบ่อ ที่ ผลลัพธ์เชิงลบเซลล์เม็ดเลือดแดงก่อตัวเป็นตะกอนหนาแน่นและมีขอบเรียบ (“ปุ่ม”) ควรมีตะกอนชนิดเดียวกันอยู่ในการควบคุม ความรุนแรงของปฏิกิริยาแสดงด้วยเครื่องหมาย “+” ตัวไตเตรทของไวรัสคือการเจือจางสูงสุดของวัสดุที่เกิดการเกาะติดกัน

ปฏิกิริยาการยับยั้งการเกิดเม็ดเลือดแดง

นี้ ปฏิกิริยาทางซีรั่มซึ่งแอนติบอดี้ต้านไวรัสจำเพาะที่ทำปฏิกิริยากับไวรัส (แอนติเจน) ทำให้เป็นกลางและกีดกันความสามารถในการเกาะติดกันของเซลล์เม็ดเลือดแดงนั่นคือ ยับยั้งปฏิกิริยาการเกิดเม็ดเลือดแดง ปฏิกิริยานี้ช่วยให้คุณระบุประเภทและประเภทของไวรัสได้

การตั้งค่าปฏิกิริยาเซรั่มต้านไวรัส 0.25 มล. ผสมกับสารที่มีไวรัสในปริมาณเท่ากัน เขย่าส่วนผสมและวางไว้ในเทอร์โมสตัทเป็นเวลา 30 นาที หลังจากนั้นจึงเติมสารแขวนลอยเซลล์เม็ดเลือดแดง 1-2% 0.5 มิลลิลิตร

การบัญชีสำหรับผลลัพธ์ที่ ตำแหน่งที่ถูกต้องประสบการณ์ในการตรวจสอบซีรั่มและเม็ดเลือดแดงควรมี "ปุ่ม" - ไม่มีปัจจัยเกาะติดกันของเม็ดเลือดแดง ในการควบคุมแอนติเจนจะเกิด "ร่ม" - ไวรัสทำให้เกิดการเกาะติดกันของเม็ดเลือดแดง หากซีรั่มมีความคล้ายคลึงกับไวรัสที่กำลังศึกษาอยู่ จะมีการสร้าง "ปุ่ม" ขึ้นมา - ซีรั่มได้ทำให้ไวรัสเป็นกลางแล้ว

ปฏิกิริยาการเกิดเม็ดเลือดแดงทางอ้อม

ปฏิกิริยาฮีแมกกลูติเนชันทางอ้อม (พาสซีฟ) (RIHA) ขึ้นอยู่กับข้อเท็จจริงที่ว่าเซลล์เม็ดเลือดแดงหากแอนติเจนที่ละลายน้ำถูกดูดซับบนพื้นผิวของพวกมัน จะได้รับความสามารถในการเกาะติดกันเมื่อมีปฏิกิริยากับแอนติบอดีต่อแอนติเจนที่ถูกดูดซับ

การตั้งค่าปฏิกิริยาเซรั่มจะถูกให้ความร้อนเป็นเวลา 30 นาทีที่ 56 °C เจือจางตามลำดับในอัตราส่วน 1:10 - 1:1280 และเทลงในหลอดหรือหลุมขนาด 0.25 มล. โดยเติมเซลล์เม็ดเลือดแดง 2 หยดที่มีแอนติเจนที่ดูดซับอยู่ลงไป

การควบคุม:สารแขวนลอยของเม็ดเลือดแดงที่มีแอนติเจนที่ถูกดูดซับด้วยเซรั่มภูมิคุ้มกันที่เห็นได้ชัด, สารแขวนลอยของเม็ดเลือดแดงที่มีแอนติเจนที่ถูกดูดซับด้วยเซรั่มปกติ; ระบบกันสะเทือน เม็ดเลือดแดงปกติด้วยเซรั่มทดสอบ ในการควบคุมครั้งแรก ควรเกิดการเกาะติดกัน ในส่วนที่สองและสามไม่ควรเกิดขึ้น

คำถามทดสอบ

1. ผลการวิเคราะห์เอ็กซ์เรย์เชิงบวกบ่งชี้อะไรระหว่างเซลล์เม็ดเลือดแดงกับวัสดุที่กำลังทดสอบว่ามีไวรัสหรือไม่

2. ปฏิกิริยาการเกาะติดกันของเซลล์เม็ดเลือดแดงจะเกิดขึ้นหรือไม่หากมีการเติมไวรัสและซีรั่มที่เกี่ยวข้องลงไป ปฏิกิริยาที่เปิดเผยปรากฏการณ์นี้ชื่ออะไร?

งานภาคปฏิบัติครั้งที่ 12

ปฏิกิริยาการตรึงส่วนเสริม

ปฏิกิริยาการตรึงส่วนเติมเต็ม (FFR) ขึ้นอยู่กับข้อเท็จจริงที่ว่าสารเชิงซ้อนแอนติเจน-แอนติบอดีจำเพาะจะดูดซับ (จับ) ส่วนเสริมเข้ากับตัวมันเองเสมอ

ปฏิกิริยานี้ใช้กันอย่างแพร่หลายในการระบุแอนติเจนและการวินิจฉัยการติดเชื้อโดยเฉพาะอย่างยิ่งโรคที่เกิดจากสไปโรเชต (ปฏิกิริยา Wassermann) ริกเก็ตเซียและไวรัส

RKS เป็นปฏิกิริยาทางซีรัมวิทยาที่ซับซ้อน มันเกี่ยวข้องกับส่วนประกอบและระบบแอนติเจนและแอนติบอดีสองระบบ โดยพื้นฐานแล้วนี่คือปฏิกิริยาทางเซรุ่มวิทยาสองประการ

ระบบหลักที่ถูกต้องประกอบด้วยแอนติเจนและแอนติบอดี (ระบบหนึ่งเป็นที่รู้จัก แต่อีกระบบหนึ่งไม่รู้จัก) มีการเพิ่มส่วนเสริมจำนวนหนึ่งลงไป หากแอนติเจนและแอนติบอดีของระบบนี้ตรงกัน พวกมันจะเชื่อมโยงและผูกมัดคำชมเชย คอมเพล็กซ์ที่เกิดขึ้นจะกระจัดกระจายอย่างประณีตและมองไม่เห็น

ตรวจพบการก่อตัวของสารเชิงซ้อนนี้โดยใช้ระบบเม็ดเลือดแดงแตกหรือตัวบ่งชี้ที่สอง ประกอบด้วยเซลล์เม็ดเลือดแดงแกะ (แอนติเจน) และซีรั่มเม็ดเลือดแดงแตก (แอนติบอดี) ที่เกี่ยวข้อง เช่น คอมเพล็กซ์ภูมิคุ้มกันสำเร็จรูป ในระบบนี้ การสลายของเซลล์เม็ดเลือดแดงสามารถเกิดขึ้นได้เมื่อมีส่วนประกอบเสริมเท่านั้น ถ้าคอมพลิเมนต์ถูกผูกมัดโดยระบบแรก จากนั้นในระบบที่สองจะไม่มีภาวะเม็ดเลือดแดงแตกเพราะว่า ไม่มีส่วนเสริมฟรี การไม่มีภาวะเม็ดเลือดแดงแตก (เนื้อหาของหลอดมีเมฆมากหรือมีตะกอนของเม็ดเลือดแดงที่ด้านล่าง) จะถูกบันทึกเป็นผลบวกของ RSC

หากในระบบแรกแอนติเจนไม่สอดคล้องกับแอนติบอดี ภูมิคุ้มกันเชิงซ้อนจะไม่ก่อตัวและส่วนประกอบจะยังคงเป็นอิสระ คำชมเชยที่เหลือยังคงอยู่ในระบบที่สองทำให้เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตกผล RSC จะเป็นลบ (เนื้อหาของหลอดมีความโปร่งใส - "เลือดเคลือบ")

ส่วนประกอบ ปฏิกิริยาการตรึงเสริม:

1. แอนติเจน - มักจะ lysate, แยก, hapten,

ไม่ค่อยมีการแขวนลอยของจุลินทรีย์

2. แอนติบอดี - เซรั่มของผู้ป่วย

3. อาหารเสริม - เซรั่มหนูตะเภา

4. แอนติเจน - เม็ดเลือดแดงแกะ

5. แอนติบอดี - ฮีโมไลซินต่อเม็ดเลือดแดงแกะ

6. สารละลายไอโซโทนิก

เนื่องจาก RSK เข้าร่วม จำนวนมากส่วนประกอบที่ซับซ้อน

ก่อนอื่นจะต้องไตเตรทและทำปฏิกิริยาในปริมาณที่แน่นอนและในปริมาตรที่เท่ากัน: 0.5 หรือ 0.25 มักจะน้อยกว่า 0.2, 1.25 หรือ 1.0 มล. (ปริมาตรที่มากขึ้นจะให้ผลลัพธ์ที่แม่นยำยิ่งขึ้น) การไตเตรทส่วนประกอบของปฏิกิริยาจะดำเนินการในปริมาตรเดียวกันกับการทดลอง โดยแทนที่ส่วนผสมที่ขาดหายไปด้วยสารละลายไอโซโทนิก

1. ปฏิกิริยาฮีแม็กกลูติเนชัน

(อาร์จีเอ)

วิธีการตรวจจับและระบุไวรัสโดยอาศัยความสามารถของไวรัสบางชนิดในการคัดเลือกจับกลุ่มเซลล์เม็ดเลือดแดงของสัตว์บางชนิด

RGA ขึ้นอยู่กับปรากฏการณ์การยึดเกาะของเม็ดเลือดแดงซึ่งเกิดขึ้นภายใต้อิทธิพลของปัจจัยต่างๆ มีการเกิดเม็ดเลือดแดงทั้งทางตรงและทางอ้อม ในปฏิกิริยาการเกิดเม็ดเลือดแดงโดยตรง เซลล์เม็ดเลือดแดงจะเกาะติดกันเมื่อดูดซับเข้าไป แอนติเจนบางชนิดเช่นไวรัส

ใน การศึกษาทางซีรัมวิทยาปฏิกิริยายับยั้งการเกิดเม็ดเลือดแดงโดยตรงจะใช้เมื่อไวรัสที่แยกได้จากผู้ป่วยถูกทำให้เป็นกลางด้วยเซรั่มภูมิคุ้มกันจำเพาะ จากนั้นรวมกับเซลล์เม็ดเลือดแดง การไม่มี hemagglutination บ่งบอกถึงความสอดคล้องของไวรัสและซีรั่มภูมิคุ้มกันที่ใช้

ปฏิกิริยาของ hemagglutination ทางอ้อม (passive hemagglutination) จะสังเกตได้ในกรณีที่เม็ดเลือดแดงที่ได้รับการรักษาล่วงหน้า (ไว) แอนติเจนต่างๆเพิ่มเซรั่มภูมิคุ้มกันหรือเซรั่มผู้ป่วยที่มีแอนติบอดีที่เหมาะสม การติดกาวของเซลล์เม็ดเลือดแดงโดยเฉพาะเกิดขึ้นโดยมีการสร้างเม็ดเลือดแดงแบบพาสซีฟ

ปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดงแตกโดยอ้อมหรือเฉื่อยมีความไวและความจำเพาะเหนือกว่าวิธีทางซีรัมวิทยาอื่นๆ และใช้ในการวินิจฉัยการติดเชื้อที่เกิดจากแบคทีเรีย ริกเก็ตเซีย และโปรโตซัว

วิธีดำเนินการปฏิกิริยาฮีแม็กกลูติเนชันทางอ้อมประกอบด้วยหลายขั้นตอน ขั้นแรกเซลล์เม็ดเลือดแดงจะถูกล้างด้วยสารละลายไอโซโทนิกโซเดียมคลอไรด์จากนั้นหากจำเป็น (เมื่อใช้แอนติเจนโปรตีน) เซลล์จะได้รับการบำบัดด้วยสารละลายแทนนิน 1: 20,000 และไวต่อแอนติเจนที่ละลายน้ำได้ หลังจากล้างด้วยสารละลายไอโซโทนิกโซเดียมคลอไรด์บัฟเฟอร์ แอนติเจนของเม็ดเลือดแดงก็พร้อมใช้งาน ซีรั่มทดสอบจะถูกเจือจางด้วยสารละลายไอโซโทนิกของโซเดียมคลอไรด์ในหลอดทดลองหรือแผ่นพลาสติกพิเศษที่มีบ่อ จากนั้นจึงเติมการวินิจฉัยเม็ดเลือดแดงลงในการเจือจางแต่ละครั้งของซีรั่ม ผลของปฏิกิริยาฮีแมกกลูติเนชันทางอ้อมจะถูกนำมาพิจารณาโดยธรรมชาติของตะกอนเซลล์เม็ดเลือดแดงที่เกิดขึ้นที่ด้านล่างของหลอด ผลปฏิกิริยาที่เซลล์เม็ดเลือดแดงปกคลุมทั่วทั้งด้านล่างของหลอดเท่ากันถือว่าเป็นบวก ในปฏิกิริยาเชิงลบ เซลล์เม็ดเลือดแดงในรูปแบบของดิสก์ขนาดเล็กหรือ "ปุ่ม" จะอยู่ที่ตรงกลางด้านล่างของหลอดทดลอง

การใช้อาร์จีเอ

RGA ใช้สำหรับการบ่งชี้ (การตรวจจับ) ไวรัสในระหว่างการวินิจฉัยเบื้องต้น สำหรับการไตเตรทไวรัสตามคุณสมบัติการสร้างเม็ดเลือดแดง (การสร้างหน่วยการสร้างเม็ดเลือดแดง - AE)

การดูดซับไวรัส

พื้นฐานของปรากฏการณ์การเกาะติดกันที่เกิดจากไวรัสคือการดูดซับของไวรัสบนพื้นผิวของเซลล์เม็ดเลือดแดงพร้อมกับการติดกาว (การเกาะติดกัน) ของหลังและการตกตะกอน

แอนติเจนสำหรับ RGA

วัสดุใด ๆ (วัสดุทางพยาธิวิทยาในรูปแบบของสารแขวนลอยจากอวัยวะ วัสดุจาก EC ที่ติดเชื้อ การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ ฯลฯ) ซึ่งสงสัยว่ามีไวรัสจะถูกนำไปใช้เป็นแอนติเจนของ RGA วัสดุต้องเป็นของเหลวไม่มีอนุภาคขนาดใหญ่

การตั้งค่า RGA โดยประมาณ

ในการตั้งค่า RGA โดยประมาณ วัสดุที่มีไวรัสหนึ่งหยดจะถูกนำไปใช้กับสไลด์แก้วที่สะอาดและขจัดไขมันอย่างดี จากนั้นเติมเซลล์เม็ดเลือดแดงแขวนลอย 5% หนึ่งหยดลงไปแล้วผสมกับแท่งแก้ว

การประเมินปฏิกิริยาของ RGA

ประเมินปฏิกิริยาเป็นกากบาท (บวก) เมื่อประเมินปฏิกิริยาแบบกากบาท ให้ใส่ใจกับธรรมชาติของตะกอน หากเซลล์เม็ดเลือดแดงจับตัวเป็นชั้นบาง ๆ เท่า ๆ กันที่ด้านล่างของหลอดทดลอง (ในรูปของร่ม) ปฏิกิริยาจะเกิดขึ้นเป็นสี่กากบาท

2. ปฏิกิริยาการยับยั้งการเกิดเม็ดเลือดแดง- ปฏิกิริยาทางซีรัมวิทยาขึ้นอยู่กับความสามารถของแอนติบอดีในการป้องกันการเกาะติดกันของเม็ดเลือดแดงโดยไวรัสประเภท hemagglutinating (adenoviruses, arboviruses, enteroviruses บางชนิด, ไวรัสไข้หวัดใหญ่และ parainfluenza, โรคหัด, reoviruses) แอนติบอดีต้านไวรัสจำเพาะทำปฏิกิริยากับโมเลกุลฮีแม็กกลูตินินบนพื้นผิวของ virions ของไวรัสเหล่านี้ และปิดกั้นการจับกับโมเลกุลเสริมของเยื่อหุ้มเม็ดเลือดแดง

ใน เมื่อเร็วๆ นี้ปฏิกิริยานี้ใช้กันอย่างแพร่หลายในห้องปฏิบัติการไวรัสวิทยาทางคลินิกเพื่อกำหนดระดับของแอนติบอดีจำเพาะต่อไวรัสบางชนิด ตลอดจนเพื่อระบุทางซีรั่มวิทยาและพิมพ์ประเภทของไวรัสที่แยกได้จาก วัสดุทางคลินิกจากผู้ป่วย การใช้งานค่อนข้างจำกัดเนื่องจากการมีสารยับยั้งไวรัสที่ไม่เชิญชมในเลือดของมนุษย์รวมถึงแอนติบอดีตามธรรมชาติ - agglutinins

ปฏิกิริยาการยับยั้งการเกิดเม็ดเลือดแดง (HAI) แม้จะมีชื่อ แต่หลักการของปฏิกิริยาก็คล้ายกับค่า pH ของไวรัสในหลาย ๆ ด้าน เนื่องจากมันขึ้นอยู่กับความสามารถของ AT ในการผูกไวรัสต่าง ๆ และทำให้พวกมันเป็นกลาง ทำให้ไม่สามารถจับกลุ่มเซลล์เม็ดเลือดแดงได้ สายตาผลกระทบนี้แสดงออกมาใน "การยับยั้ง" ของการเกิดเม็ดเลือดแดง RTGA ใช้ในการวินิจฉัยการติดเชื้อไวรัสเพื่อระบุสารต้านฮีแม็กกลูตินินจำเพาะ และระบุไวรัสต่างๆ ด้วยฮีแม็กกลูตินิน ซึ่งแสดงคุณสมบัติของ Ag

ปฏิกิริยาการยับยั้งการเกิดเม็ดเลือดแดง

(RTGA)

วิธีการระบุไวรัสหรือการตรวจหาแอนติบอดีต่อไวรัสในเลือดของผู้ป่วยโดยอาศัยปรากฏการณ์การขาดการเกาะกันของเซลล์เม็ดเลือดแดงโดยยาที่มีไวรัสอยู่ในซีรั่มในเลือดที่มีภูมิต้านทานต่อไวรัส

ปฏิกิริยาการยับยั้งการเกิดเม็ดเลือดแดง กลไกและการนำไปใช้งานจริง

ไวรัสหลายชนิดมีความสามารถในการเกาะติดกันของเซลล์เม็ดเลือดแดงของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมและนกสายพันธุ์ที่กำหนดอย่างเคร่งครัด ดังนั้นไวรัสไข้หวัดใหญ่และคางทูมจะเกาะกลุ่มเม็ดเลือดแดงของไก่ หนูตะเภา และมนุษย์ และอะดีโนไวรัสจะเกาะกลุ่มเม็ดเลือดแดงของหนูและหนู ในการนี้ เพื่อตรวจหาในวัสดุของผู้ป่วยหรือการเพาะเลี้ยงเซลล์ เอ็มบริโอ และสัตว์ ปฏิกิริยาการเกิดเม็ดเลือดแดง(อาร์จีเอ) ในการทำเช่นนี้ให้เตรียมการเจือจางของวัสดุและของเหลวที่มีไวรัสเพิ่มขึ้นสองเท่าในหลุมของแผ่นโดยเติมสารแขวนลอยที่ล้างด้วยสารละลายไอโซโทนิกลงไป NaCl ของเม็ดเลือดแดง- เพื่อควบคุมการเกาะติดกันตามธรรมชาติ เซลล์เม็ดเลือดแดงจะถูกผสมกับสารละลาย NaCl ไอโซโทนิกในปริมาณที่เท่ากัน ของผสมจะถูกบ่มในเทอร์โมสตัทที่อุณหภูมิ 37°C หรือที่อุณหภูมิห้อง

ผลลัพธ์ของการวิเคราะห์ด้วยรังสีเอกซ์จะถูกนำมาพิจารณาโดยธรรมชาติของการเกาะติดกันของเม็ดเลือดแดงหลังจากผ่านไป 30–60 นาที ซึ่งโดยปกติแล้วพวกมันจะตกตะกอนโดยสมบูรณ์ในการควบคุม ปฏิกิริยาเชิงบวกจะแสดงด้วยเครื่องหมายบวก “++++” – ตะกอนในรูปของ “ร่ม”, “+++” – ตะกอนที่มีลูเมน, “++” – ตะกอนที่มีลูเมนขนาดใหญ่, “+” – ตะกอนตกตะกอนที่ล้อมรอบด้วยโซนของเม็ดเลือดแดงยู่ยี่ และ “–” – ตะกอนของเม็ดเลือดแดงที่กำหนดไว้อย่างชัดเจนเช่นเดียวกับในรูปของ “ปุ่ม” เช่นเดียวกับในส่วนควบคุม

เนื่องจากเป็นเฉพาะกลุ่ม RGA จึงไม่สามารถระบุชนิดของไวรัสได้ พวกเขาจะถูกระบุโดยใช้ ปฏิกิริยาการยับยั้งการสร้างเม็ดเลือดแดง(อาร์ทีจีเอ). ในการตั้งค่า มีการใช้ซีรั่มต้านไวรัสภูมิคุ้มกันที่รู้จักกันดี ซึ่งเจือจางด้วยความเข้มข้นที่ลดลงสองเท่าในสารละลายโซเดียมคลอไรด์ไอโซโทนิกแล้วเทลงในบ่อ เติมของเหลวที่มีไวรัสในปริมาณเท่ากันในการเจือจางแต่ละครั้ง การควบคุมคือการแขวนลอยของไวรัสในสารละลายไอโซโทนิกโซเดียมคลอไรด์ แผ่นที่มีส่วนผสมของซีรั่มและไวรัสจะถูกเก็บไว้ในเทอร์โมสตัทเป็นเวลา 30 นาทีหรือที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 2 ชั่วโมงจากนั้นจึงเพิ่มเซลล์เม็ดเลือดแดงที่แขวนลอยลงในแต่ละแผ่น หลังจากผ่านไป 30 นาที จะพิจารณาระดับไตเตอร์ของซีรั่มที่ทำให้ไวรัสเป็นกลาง (เช่น การเจือจางสูงสุด) ซึ่งทำให้เกิดความล่าช้าในการเกาะติดกันของเม็ดเลือดแดง

RTGA ใช้ในการวินิจฉัยโรคทางซีรัมวิทยาของโรคไวรัส โดยเฉพาะไข้หวัดใหญ่และอะดีโน การติดเชื้อไวรัส- ควรใช้ในลักษณะเดียวกับ RN โดยมีซีรั่มที่จับคู่กัน การเพิ่มขึ้นสี่เท่าของแอนติบอดีไทเทอร์ในซีรั่มที่สองเป็นการยืนยันการวินิจฉัยโดยสันนิษฐาน

3. การศึกษาทางเซรุ่มวิทยาช่วยให้คุณทำการวินิจฉัยหากตรวจพบแอนติบอดีจำเพาะในซีรั่มของผู้ป่วย สำหรับปฏิกิริยาทางซีรั่มจะใช้ซีรั่มคู่ซึ่งรับประทานในวันแรกนับจากเริ่มมีอาการและ 1 ถึง 3 สัปดาห์ต่อมา แต่ศึกษาพร้อมกัน การเพิ่มขึ้นของแอนติบอดีไทเทอร์ 4 เท่าหรือมากกว่านั้นมีนัยสำคัญในการวินิจฉัย RTGA, RN, RSK, RTGads, RIF, RIA, ELISA ใช้กับแอนติเจน (การวินิจฉัย) ที่เตรียมจากสายพันธุ์อ้างอิงของไวรัสที่เกี่ยวข้อง

4. จับคู่ - หมายความว่าเลือดจะถูกถ่ายสองครั้งในช่วงเวลาหนึ่ง โดยการเพิ่มระดับแอนติบอดีจะพิจารณาว่ามีการติดเชื้อเกิดขึ้น หากแอนติบอดีไทเทอร์ไม่เปลี่ยนแปลงแสดงว่าแอนติบอดีเหล่านี้อยู่ในร่างกายมาเป็นเวลานานไม่มีการติดเชื้อครั้งใหม่

ค่าวินิจฉัยที่ยิ่งใหญ่ที่สุดคือการศึกษาซีรั่มคู่ที่นำมาจากสัตว์ตั้งแต่เริ่มต้นและสิ้นสุดของโรค (โดยมีช่วงเวลา 14-21 วัน) ซีรั่มจะถูกรวบรวมในหลอดปลอดเชื้อและเก็บไว้สำหรับการทดสอบ

คำอธิบาย

ชุดตรวจวินิจฉัยโรคพาร์โวไวรัสในสุกรออกแบบมาเพื่อตรวจหาแอนติเจนของพาร์โวไวรัสในสารแขวนลอย อวัยวะภายในทารกในครรภ์ที่แท้งด้วยปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดงแตก (HRA) และแอนติบอดีจำเพาะในเลือดของสุกร เช่นเดียวกับลูกสุกรแรกเกิด (ก่อนได้รับน้ำนมเหลือง) ในปฏิกิริยายับยั้งเม็ดเลือดแดง (HIA)

ปฏิกิริยานี้ดำเนินการโดยใช้วิธีไมโครในหลุมของแผ่นโพลีสไตรีน

แผ่นโพลีสไตรีน 96 หลุมสำหรับปฏิกิริยาทางภูมิคุ้มกัน

แอนติเจนที่ทำให้หมดฤทธิ์จำเพาะซึ่งมีฤทธิ์ในการสร้างเม็ดเลือดแดงอย่างน้อย 1:128;

เซรั่มเฉพาะที่มีฤทธิ์ใน RTGA ไม่ต่ำกว่า 1:256;

เซรั่มปกติ (ควบคุมเชิงลบ)

เวลาวิเคราะห์:

RGA - 2.5-3.5 ชั่วโมง, RTGA - 3.5-4.5 ชั่วโมง (ไม่คำนึงถึงเวลาในการเตรียมสื่อการเรียน)

หลักการของวิธีการ:

ปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดงแตก (HRA) ขึ้นอยู่กับการติดกาวของเซลล์เม็ดเลือดแดงที่แขวนลอยอยู่ในของเหลวภายใต้อิทธิพลของคุณสมบัติการสร้างเม็ดเลือดแดงของไวรัสและการก่อตัวของตะกอนหลวมในรูปแบบของร่ม สาระสำคัญของ RTHA คือการต่อต้านคุณสมบัติการสร้างเม็ดเลือดแดงของไวรัสด้วยแอนติบอดีจำเพาะที่มีอยู่ในซีรั่มเลือดซึ่งเป็นผลมาจากการที่เซลล์เม็ดเลือดแดงไม่ติดกันและพวกมันตกลงไปที่ด้านล่างทำให้เกิดตะกอนหนาแน่นในรูปแบบของ ปุ่ม.

สภาพการเก็บรักษา

ชุดอุปกรณ์ถูกเก็บไว้ในที่แห้ง และป้องกันไม่ให้ถูกแสง ที่อุณหภูมิ 2 ถึง 8°C

เมื่อละลายส่วนประกอบของชุดอุปกรณ์สามารถเก็บแช่แข็งไว้ได้ 1 เดือน ไม่อนุญาตให้นำไปแช่แข็งซ้ำ

ดีที่สุดก่อนวันที่

เซลล์เม็ดเลือดแดง (หรืออนุภาคน้ำยาง) ที่มีแอนติเจนดูดซับอยู่จะทำปฏิกิริยากับแอนติบอดีที่สอดคล้องกันในซีรั่มเลือด ซึ่งทำให้เซลล์เม็ดเลือดแดงเกาะกันและหลุดออกไปที่ด้านล่างของหลอดทดลองหรือเซลล์ในรูปของสแกลลอป ตะกอน.

ในปฏิกิริยาเชิงลบ เซลล์เม็ดเลือดแดงจะอยู่ในรูปของปุ่มปฏิกิริยาการเกาะติดกัน

สามารถทำได้ในเวอร์ชันไมโครในเซลล์ของเพลต 96 หลุมสำหรับการศึกษาทางภูมิคุ้มกันวิทยาที่มีก้นทรงกรวย เติม PBS 0.05 มล. (pH 7.2-7.4) ลงในหลุมของจาน และเตรียมซีรั่มเลือดทดสอบที่เจือจางสองเท่าตั้งแต่ 1:2 ขึ้นไป จากนั้นเติมสารแขวนลอยของเซลล์เชื้อรา 0.005 มิลลิลิตรลงในแต่ละเซลล์ที่ความเข้มข้น 100,000 เซลล์เชื้อราต่อ 1 มิลลิลิตร เขย่าแท็บเล็ตอย่างระมัดระวังและเก็บไว้ในเทอร์โมสตัทที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 2 ชั่วโมง จากนั้นที่ 4°C เป็นเวลา 16-18 ชั่วโมง เซรั่มเลือดปกติ (เชิงลบ) และ PBS ถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบ

ผลลัพธ์ของปฏิกิริยาจะถูกนำมาพิจารณาโดยใช้กล้องจุลทรรศน์และการมองเห็นและถูกกำหนดเป็นไม้กางเขนตามรูปแบบต่อไปนี้:

(++++) - การล้างของเหลวโดยสมบูรณ์และการก่อตัวของเกาะติดกันที่ด้านล่างของบ่อในรูปแบบของ "ร่ม" กลับด้าน เมื่อเขย่า "ร่ม" จะแตกเป็นสะเก็ด

(+++) - การล้างของเหลวที่ไม่สมบูรณ์และ "ร่ม" ที่กำหนดไว้อย่างชัดเจน

(++) - การล้างของเหลวที่เห็นได้ชัดเจน "ร่ม" แสดงออกมาในระดับปานกลาง

(+) - การล้างของเหลวที่แทบจะสังเกตไม่เห็น "ร่ม" แสดงออกอย่างอ่อนแอ;

(-) - ผลลัพธ์เชิงลบ ของเหลวยังไม่ถูกล้าง มีตะกอนในรูปแบบของปุ่มที่ด้านล่างของบ่อ ด้วยการเขย่าเบา ๆ ทำให้เกิดระบบกันสะเทือนที่สม่ำเสมอ

การเจือจางครั้งสุดท้ายของซีรั่มทดสอบซึ่งมีการเกาะติดกันของไม้กางเขนอย่างน้อยสองครั้ง (++) ถูกนำมาใช้เป็นไทเทอร์แอนติบอดีหลักการ RTGA

แต่แอนติบอดีมีปฏิกิริยากับแอนติเจนในอัตราส่วนเชิงปริมาณที่กำหนดไว้อย่างเคร่งครัด ดังนั้น เพื่อให้ไวรัสจำนวนหนึ่งถูกกีดกันจากความสามารถในการสร้างเม็ดเลือดแดงของมัน จึงจำเป็นต้องมีแอนติบอดีขั้นต่ำจำนวนหนึ่ง และเนื่องจากองค์ประกอบหนึ่งของ RTHA ไม่เป็นที่รู้จักอยู่เสมอ ปฏิกิริยาจึงต้องอยู่ในชุดของ หลอดทดลองที่มีปริมาณแอนติบอดีต่างกันและมีไวรัสในปริมาณเท่ากัน หรือในทางกลับกัน ซึ่งสามารถทำได้โดยการเจือจางซีรั่มที่แตกต่างกันและการเจือจางของไวรัสที่เท่ากัน หรือการเจือจางของไวรัสที่แตกต่างกันและการเจือจางของซีรั่มที่เท่ากัน

RTGA ช่วยให้คุณสามารถแก้ไขปัญหาต่อไปนี้: กำหนดระดับของแอนติบอดีต่อไวรัส hemagglutinating ในซีรั่ม; ระบุไวรัส hemagglutinating ที่ไม่รู้จักจากซีรั่มที่รู้จัก กำหนดระดับความสัมพันธ์ของแอนติเจนของไวรัสทั้งสองชนิด

ข้อดีของ RTGA:เทคนิคเรียบง่าย ความเร็ว ไม่ต้องผ่านการฆ่าเชื้อ มีความเฉพาะเจาะจง ต้นทุนต่ำ ข้อเสีย: RTGA ทำได้เฉพาะกับไวรัสที่มีการสร้างเม็ดเลือดแดงเท่านั้น

หลักการของการไทเทรตแอนติบอดีใน RTGAเป็นดังนี้:

– เตรียมการเจือจางของเซรั่มทดสอบต่อเนื่องกัน (โดยปกติจะเป็น 2 เท่า) ในปริมาตรที่เท่ากัน (ปกติคือ 0.25 หรือ 0.2 มล.)

– ในการเจือจางแต่ละครั้ง ให้เติมไวรัสโฮโมโลกัสในปริมาณเท่ากันในไทเทอร์ 4 HAE

– ส่วนผสมจะถูกเก็บไว้เป็นระยะเวลาหนึ่งที่อุณหภูมิที่กำหนด (สำหรับไวรัสโรคนิวคาสเซิล 40–60 นาทีที่อุณหภูมิห้อง)

– เติมสารแขวนลอย 1% ของเม็ดเลือดแดงที่ถูกล้างในปริมาณเท่ากันลงในส่วนผสมทั้งหมด

– หลังจากได้รับสัมผัสแล้ว การประเมินภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในแต่ละสารผสมจะถูกประเมินเป็นไม้กางเขน

ปฏิกิริยารวมถึงการควบคุมซีรั่ม ไวรัส และเม็ดเลือดแดง

การเจือจางในซีรั่มสูงสุดที่ยังคงยับยั้งการสร้างเม็ดเลือดแดงได้อย่างสมบูรณ์นั้นถือเป็นตัวบ่งชี้ระดับแอนติบอดีในซีรั่มนี้

การใช้ปฏิกิริยาดูดซับเลือดในไวรัสวิทยา

อาร์จีเอดีการดูดซับเลือด - การเชื่อมต่อของเม็ดเลือดแดงกับพื้นผิวของเซลล์ที่ได้รับผลกระทบจากไวรัส - ถูกค้นพบครั้งแรกโดย Vogel และ Shchelokov (1957) เกี่ยวกับการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อที่ติดเชื้อไวรัสไข้หวัดใหญ่ ปรากฏการณ์นี้ขึ้นอยู่กับความสัมพันธ์ระหว่างตัวรับไวรัสที่อยู่บนพื้นผิวของเซลล์ที่ได้รับผลกระทบกับตัวรับเม็ดเลือดแดง ซึ่งนำไปสู่การยึดเกาะซึ่งกันและกันคล้ายกับปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดง ข้อดีของปฏิกิริยานี้คือปฏิกิริยาจะเป็นบวกก่อนที่จะเกิดการเปลี่ยนแปลงทางไซโตพาธีที่ชัดเจนในเซลล์ที่ติดเชื้อ

เทคนิค RGAdเป็นดังนี้ ในวันที่ 3-4 หลังจากการติดเชื้อของเซลล์ จะมีการนำหลอดสองหลอดที่มีการเพาะเลี้ยงเซลล์เดียวกัน หลอดหนึ่งติดสารที่มีไวรัส และหลอดที่สองคือการควบคุม ของเหลวเพาะเลี้ยงจะถูกระบายออกจากทั้งสองหลอดและเติมเม็ดเลือดแดงที่ล้างแล้ว 2-3 หยดลงในทั้งสอง ทั้งสองหลอดถูกปล่อยทิ้งไว้ประมาณ 5-10 นาทีเพื่อให้เซลล์เม็ดเลือดแดงอยู่บนพื้นผิวของเซลล์ (วางในแนวนอนบนโต๊ะ) จากนั้นค่อย ๆ ล้างด้วยน้ำเกลือแล้วตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ (กำลังขยายต่ำ) ในหลอดควบคุม เซลล์เม็ดเลือดแดงจะถูกเอาออกทั้งหมดด้วยน้ำเกลือ และเซลล์เม็ดเลือดแดงที่เหลือบางส่วนจะลอยไปตามของเหลว หากเซลล์เม็ดเลือดแดงในหลอดที่ติดเชื้อไม่ได้ถูกเอาออกด้วยน้ำเกลือและไม่ลอย แต่เกาะติดกับพื้นผิวของเซลล์ RGAd ควรได้รับการพิจารณาว่าเป็นบวก

ขึ้นอยู่กับไวรัสและชนิดของเซลล์ การจัดเรียงเซลล์เม็ดเลือดแดงสามารถเป็นสามเท่า:

– เซลล์เม็ดเลือดแดงจะถูกดูดซับเฉพาะบริเวณขอบชั้นเซลล์ในรูปของ “สร้อยคอ” (ไวรัส) โรคระบาดแอฟริกาหมู);

– เซลล์เม็ดเลือดแดงอยู่บนชั้นเซลล์ในจุดโฟกัสหรือกระจุก (ไวรัสไข้หวัดใหญ่)

– เม็ดเลือดแดงกระจายตัวอยู่บนชั้นเซลล์ (ไวรัส parainfluenza)

ไวรัสแต่ละตัวสามารถดูดซับเซลล์เม็ดเลือดแดงของสัตว์บางชนิดได้

การวินิจฉัยทางเซรุ่มวิทยาของโรคไวรัสโดยการเพิ่มระดับแอนติบอดีในซีรั่มเลือดคู่

ปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดงแตก (HRA) และปฏิกิริยายับยั้งเม็ดเลือดแดงแตก (HIR) กลไก ส่วนประกอบ และการประยุกต์ใช้ปฏิกิริยา

ปฏิกิริยา hemagglutination ขึ้นอยู่กับปรากฏการณ์ของการติดกาวของเซลล์เม็ดเลือดแดงซึ่งเกิดขึ้นภายใต้อิทธิพลของปัจจัยต่างๆ มีการเกิดเม็ดเลือดแดงทั้งทางตรงและทางอ้อม

ขั้นแรกเซลล์เม็ดเลือดแดงจะถูกล้างด้วยสารละลายไอโซโทนิกโซเดียมคลอไรด์จากนั้นหากจำเป็น (เมื่อใช้แอนติเจนโปรตีน) เซลล์จะได้รับการบำบัดด้วยสารละลายแทนนิน 1: 20,000 และไวต่อแอนติเจนที่ละลายน้ำได้ หลังจากล้างด้วยสารละลายไอโซโทนิกโซเดียมคลอไรด์บัฟเฟอร์ แอนติเจนของเม็ดเลือดแดงก็พร้อมใช้งาน

ซีรั่มทดสอบจะถูกเจือจางด้วยสารละลายไอโซโทนิกของโซเดียมคลอไรด์ในหลอดทดลองหรือแผ่นพลาสติกพิเศษที่มีบ่อ จากนั้นจึงเติมการวินิจฉัยเม็ดเลือดแดงลงในการเจือจางแต่ละครั้งของซีรั่ม ผลของปฏิกิริยาฮีแมกกลูติเนชันทางอ้อมจะถูกนำมาพิจารณาโดยธรรมชาติของตะกอนเซลล์เม็ดเลือดแดงที่เกิดขึ้นที่ด้านล่างของหลอด ผลปฏิกิริยาที่เซลล์เม็ดเลือดแดงปกคลุมทั่วทั้งด้านล่างของหลอดเท่ากันถือว่าเป็นบวก ในกรณีที่เกิดปฏิกิริยาเชิงลบ เซลล์เม็ดเลือดแดงในรูปของดิสก์ขนาดเล็กหรือ "ปุ่ม" จะอยู่ที่ตรงกลางด้านล่างของหลอดทดลอง

ส่วนประกอบหลักของ RP:

ก) แอนติเจนที่ละลายน้ำได้

B) แอนติบอดีจำเพาะ (ซีรั่ม)

(RTGA) เป็นวิธีการระบุไวรัสหรือตรวจหาแอนติบอดีต่อไวรัสในเลือดของผู้ป่วย โดยอาศัยปรากฏการณ์การไม่มีการจับกลุ่มกันของเซลล์เม็ดเลือดแดงโดยยาที่มีไวรัสอยู่ในซีรั่มในเลือดที่มีภูมิต้านทานต่อไวรัส
ขึ้นอยู่กับการปิดล้อมการปราบปรามแอนติเจนของไวรัสโดยแอนติบอดีในซีรั่มภูมิคุ้มกันซึ่งเป็นผลมาจากการที่ไวรัสสูญเสียความสามารถในการจับกลุ่มเซลล์เม็ดเลือดแดง

RTGA ใช้ในการวินิจฉัยโรคไวรัสหลายชนิด สาเหตุที่ทำให้เกิดโรค (ไวรัสไข้หวัดใหญ่ โรคหัด หัดเยอรมัน โรคไข้สมองอักเสบจากเห็บ ฯลฯ ) สามารถจับกลุ่มเม็ดเลือดแดงของสัตว์ต่างๆ
กลไก.การพิมพ์ไวรัสดำเนินการโดยใช้ปฏิกิริยายับยั้งการสร้างเม็ดเลือดแดง (HAI) พร้อมชุดซีรั่มเฉพาะประเภท ผลลัพธ์ของปฏิกิริยาจะถูกนำมาพิจารณาโดยไม่มีการเกิดเม็ดเลือดแดง ชนิดย่อยของไวรัส A ที่มีแอนติเจน H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 เป็นต้น

สามารถสร้างความแตกต่างใน RTGA ด้วยชุดซีรั่มเฉพาะประเภทที่คล้ายคลึงกัน

ที่แกนกลาง ปฏิกิริยาการเกิดเม็ดเลือดแดง เป็นปรากฏการณ์ของการยึดเกาะของเม็ดเลือดแดงซึ่งเกิดขึ้นภายใต้อิทธิพลของปัจจัยต่างๆ

มีการเกิดเม็ดเลือดแดงทั้งทางตรงและทางอ้อม
ในปฏิกิริยาการเกิดเม็ดเลือดแดงโดยตรง เซลล์เม็ดเลือดแดงจะเกาะติดกันเมื่อมีการดูดซับแอนติเจนบางชนิด เช่น ไวรัส ลงไป
ในการศึกษาทางซีรั่มวิทยา จะใช้ปฏิกิริยายับยั้งการสร้างเม็ดเลือดแดงโดยตรง เมื่อไวรัสที่แยกได้จากผู้ป่วยถูกทำให้เป็นกลางด้วยเซรั่มภูมิคุ้มกันจำเพาะ จากนั้นรวมกับเซลล์เม็ดเลือดแดง

การไม่มี hemagglutination บ่งบอกถึงความสอดคล้องของไวรัสและซีรั่มภูมิคุ้มกันที่ใช้

ปฏิกิริยา hemagglutination ทางอ้อม (passive hemagglutination) จะสังเกตได้ในกรณีที่ซีรั่มภูมิคุ้มกันหรือซีรั่มของผู้ป่วยที่มีแอนติบอดีที่เหมาะสมถูกเพิ่มเข้าไปในเซลล์เม็ดเลือดแดงที่ได้รับการรักษาก่อนหน้านี้ (ไว) ด้วยแอนติเจนต่างๆ

การติดกาวของเซลล์เม็ดเลือดแดงโดยเฉพาะเกิดขึ้นโดยมีการสร้างเม็ดเลือดแดงแบบพาสซีฟ

วิธีดำเนินการปฏิกิริยาฮีแม็กกลูติเนชันทางอ้อมประกอบด้วยหลายขั้นตอน

หลังจากล้างด้วยสารละลายไอโซโทนิกโซเดียมคลอไรด์บัฟเฟอร์ แอนติเจนของเม็ดเลือดแดงก็พร้อมใช้งาน ซีรั่มทดสอบจะถูกเจือจางด้วยสารละลายไอโซโทนิกของโซเดียมคลอไรด์ในหลอดทดลองหรือแผ่นพลาสติกพิเศษที่มีบ่อ จากนั้นจึงเติมการวินิจฉัยเม็ดเลือดแดงลงในการเจือจางแต่ละครั้งของซีรั่ม

ผลของปฏิกิริยาฮีแมกกลูติเนชันทางอ้อมจะถูกนำมาพิจารณาโดยธรรมชาติของตะกอนเซลล์เม็ดเลือดแดงที่เกิดขึ้นที่ด้านล่างของหลอด ผลปฏิกิริยาที่เซลล์เม็ดเลือดแดงปกคลุมทั่วทั้งด้านล่างของหลอดเท่ากันถือว่าเป็นบวก ในปฏิกิริยาเชิงลบ เซลล์เม็ดเลือดแดงในรูปแบบของดิสก์ขนาดเล็กหรือ "ปุ่ม" จะอยู่ที่ตรงกลางด้านล่างของหลอดทดลอง

ปฏิกิริยาการยับยั้งการเกิดเม็ดเลือดแดง- ปฏิกิริยาทางซีรัมวิทยาขึ้นอยู่กับความสามารถของแอนติบอดีในการป้องกันการเกาะติดกันของเม็ดเลือดแดงโดยไวรัสประเภท hemagglutinating (adenoviruses, arboviruses, enteroviruses บางชนิด, ไวรัสไข้หวัดใหญ่และ parainfluenza, โรคหัด, reoviruses)

แอนติบอดีต้านไวรัสจำเพาะทำปฏิกิริยากับโมเลกุลฮีแม็กกลูตินินบนพื้นผิวของ virions ของไวรัสเหล่านี้ และปิดกั้นการจับกับโมเลกุลเสริมของเยื่อหุ้มเม็ดเลือดแดง

เมื่อเร็วๆ นี้ ปฏิกิริยานี้ถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในห้องปฏิบัติการไวรัสวิทยาทางคลินิก เพื่อตรวจวัดระดับของแอนติบอดีจำเพาะต่อไวรัสบางชนิด รวมถึงการจำแนกทางซีรั่มวิทยาและการพิมพ์ไวรัสที่แยกได้จากวัสดุทางคลินิกจากผู้ป่วย

การใช้งานค่อนข้างจำกัดเนื่องจากการมีสารยับยั้งไวรัสที่ไม่เชิญชมในเลือดของมนุษย์รวมถึงแอนติบอดีตามธรรมชาติ - agglutinins

ปฏิกิริยาการทำให้เป็นกลางคือปฏิกิริยายับยั้งการสร้างเม็ดเลือดแดง (HRI)

ใช้ RTGA:
- สำหรับไวรัสซีโรไทป์
- สำหรับการวินิจฉัยการติดเชื้อ
มีสองวิธีในการตั้งค่า:
— วิธีการหยดบนกระจก (ปฏิกิริยาโดยประมาณ) ใช้สำหรับการตรวจซีโรโคปีไวรัส
- ขยายในหลอดทดลอง

กลไก.

ไวรัสบางชนิด (เช่น ไข้หวัดใหญ่) มีฮีแม็กกลูตินิน ซึ่งทำให้เกิดการเกาะติดกันของเซลล์เม็ดเลือดแดงของสัตว์ต่างๆ ขึ้นอยู่กับชนิดของไวรัส

เมื่อมีแอนติบอดีในซีรั่ม - antihemagglutinins จะสังเกตการยับยั้งการทำงานของไวรัส
RTGA
วัตถุประสงค์: การสร้างซีโรไทป์ของไวรัสไข้หวัดใหญ่ชนิดเอ

ส่วนประกอบ:
1. วัสดุที่ศึกษาคือของเหลว allantoic ของตัวอ่อนไก่
2. ซีรั่มเฉพาะการวินิจฉัยโรคไข้หวัดใหญ่ชนิดเฉพาะ
3. สารแขวนลอยเม็ดเลือดแดงไก่ 5%
4.

น้ำเกลือ.

ปฏิกิริยาเกิดขึ้นบนกระจกโดยใช้วิธีการหยด หยดซีรั่มเพื่อการวินิจฉัย 1 หยดและวัสดุทดสอบลงบนกระจก ผสม จากนั้นเติมสารแขวนลอยเซลล์เม็ดเลือดแดง 1 หยด ด้วยปฏิกิริยาเชิงบวกจะสังเกตเห็นรอยแดงที่เป็นเนื้อเดียวกันและด้วยปฏิกิริยาเชิงลบเกล็ดสีแดงจะหลุดออกมา (การเกิดเม็ดเลือดแดง)

ก่อนหน้า31323334353637383940414243444546ถัดไป

ลักษณะของไวรัสไข้หวัดใหญ่ ระบาดวิทยาและการวินิจฉัยโรคไข้หวัดใหญ่ การใช้ RTGA เพื่อสร้างซีโรไทป์ของไวรัสไข้หวัดใหญ่ การเตรียมการป้องกันและรักษาเฉพาะทาง

ไข้หวัดใหญ่หรือไข้หวัดใหญ่ - เฉียบพลัน โรคติดเชื้อโดดเด่นด้วยความเสียหายต่อเยื่อเมือกของส่วนบน ระบบทางเดินหายใจ, ไข้, มึนเมาทั่วไป, การหยุดชะงักของระบบหัวใจและหลอดเลือดและระบบประสาท

ไข้หวัดใหญ่มีแนวโน้มที่จะเกิดการแพร่ระบาดและการแพร่กระจายของโรคระบาดเนื่องจากโรคติดต่อและความแปรปรวนสูง

ลักษณะของเชื้อโรค เชื้อโรค - ไวรัสไข้หวัดใหญ่เป็นของครอบครัว Orthomyxoviridae, สกุล Influenzavirus A, B และ Influenzavirus C ไวรัสไข้หวัดใหญ่เป็นไวรัส RNA ไวรัสไข้หวัดใหญ่ชนิด A ถูกแยกได้ในปี พ.ศ. 2476 โดย W. Smith, K. Andrews และ P. Laidlaw ในปี พ.ศ. 2483 ต.

การประยุกต์วิธีฮีแม็กกลูติเนชั่นในไวรัสวิทยา

Francis และ R. Magill ได้แยกไวรัสไข้หวัดใหญ่ชนิด B ในปี พ.ศ. 2492 R. Taylor - ประเภท C ในรัสเซีย ไวรัสไข้หวัดใหญ่ตัวแรกถูกแยกได้ในปี พ.ศ. 2479 โดย A. A. Smorodintsev และจัดเป็นประเภท A. สัณฐานวิทยา ไวรัสไข้หวัดใหญ่มีรูปร่างเป็นทรงกลม (รูปลูกบอล) - 80 - 120 นาโนเมตรซึ่งมักมีรูปร่างเป็นใยน้อยกว่า ประกอบด้วย: 1) แกนกลาง - นิวคลีโอแคปซิดของสมมาตรแบบขดลวด (เส้นตรงเส้นเดี่ยว "-" ของ RNA + โปรตีนแคปซิด); 2) เมมเบรนชั้นใต้ดิน - เมมเบรนไลโปโปรตีนด้านนอก - supercapsid

บนพื้นผิวของเปลือกมีไกลโคโปรตีน (ในรูปแบบของเดือยและวิลลี่) 2 ประเภท: 1) เฮแม็กกลูตินิน - ส่งเสริมการยึดติดกับตัวรับเซลล์; 2) neuraminidase - ส่งเสริมการปล่อยไวรัสออกจากเซลล์ การเพาะปลูก สำหรับการเพาะเลี้ยง จะใช้เอ็มบริโอไก่ การเพาะเลี้ยงเซลล์ทริปซิไนซ์ขั้นต้น และบางครั้งใช้สัตว์ทดลอง

รุ่นที่สะดวกที่สุดคือตัวอ่อนไก่อายุ 10-12 วัน ช่วยให้คุณได้รับไวรัสในปริมาณมากซึ่งจำเป็นในการผลิตวัคซีนและยาต้านแบคทีเรีย

การติดเชื้อจะดำเนินการในโพรงอัลลอนโทอิก, เข้าไปในเยื่อหุ้มเซลล์ chorion-allontoic, เข้าไปในโพรงน้ำคร่ำ, เข้าไปในน้ำคร่ำ การมีอยู่ของไวรัสในเอ็มบริโอไก่ถูกตรวจพบโดยปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดงแตก โครงสร้างแอนติเจน ไวรัสมีแอนติเจนภายใน - S และแอนติเจนที่พื้นผิว: HA-hemagglutinin และ NA-neuraminidase S-antigen เป็นแบบจำเพาะกลุ่มซึ่งพบได้ทั่วไปในทุกประเภท ตามแอนติเจนนี้ ไวรัสไข้หวัดใหญ่แบ่งออกเป็นประเภท A, B และ C นี่คือแอนติเจนที่เสริมการตรึงและเสถียร (ไม่เปลี่ยนแปลง)

แอนติเจน HA และ NA เป็นแอนติเจนที่จำเพาะ แอนติเจน HA ทำให้เกิดการสร้างแอนติบอดีที่ทำให้ไวรัสเป็นกลางและการยึดเกาะของเซลล์เม็ดเลือดแดง

แอนติเจน NA ทำให้เกิดการก่อตัวของแอนติบอดีที่ช่วยต่อต้านไวรัสบางส่วน

ไวรัสประเภท B มีความแปรปรวนน้อยกว่า ในขณะที่ประเภท C มีความเสถียรสูง

คุณสมบัติเป็นพิษ พิษของไวรัสต่อร่างกาย ( ปวดศีรษะ, ปวดกล้ามเนื้อ, อุณหภูมิ, อาการหวัด) เกิดจากโปรตีนของไวรัส (อนุภาคของไวรัสนั้นเอง) การดำเนินการนี้มีความเฉพาะเจาะจงอย่างเคร่งครัดและจะถูกทำให้เป็นกลางโดยเซรั่มภูมิคุ้มกันชนิดหรือชนิดย่อยหรือเซรั่มที่เหมาะสมของผู้ที่หายจากโรคเท่านั้น ความต้านทาน. ไวรัสไข้หวัดใหญ่ไวต่อรังสียูวี สารฆ่าเชื้อ (ฟอร์มาลิน แอลกอฮอล์ ฟีนอล คลอรามีน) และตัวทำละลายไขมัน

ในสภาพแวดล้อมที่เป็นของเหลว พวกมันจะตายที่อุณหภูมิ 50 - 60°C เป็นเวลาหลายนาที ที่อุณหภูมิห้องในอากาศ ไวรัสจะคงคุณสมบัติในการติดเชื้อไว้ได้หลายชั่วโมง พวกมันจะคงอยู่ได้นานเมื่อแห้ง และเมื่อแช่แข็ง (-70°C) พวกมันไม่เพียงแต่จะอยู่ได้นานเท่านั้น แต่ยังไม่สูญเสียความรุนแรงอีกด้วย

ความอ่อนแอของสัตว์ ใน สภาพธรรมชาติไวรัสประเภท A ส่งผลกระทบต่อมนุษย์และสัตว์ (ม้าและหมูได้รับผลกระทบ) ในขณะที่ไวรัสประเภท B และ C ส่งผลกระทบต่อมนุษย์เท่านั้น ในบรรดาสัตว์ทดลอง หนูขาว พังพอนแอฟริกัน หนูแฮมสเตอร์ซีเรีย, ลิง

โรคในสัตว์มีลักษณะเฉพาะคือปอดถูกทำลาย มีไข้ และอาจส่งผลให้สัตว์ตายได้ ระบาดวิทยาของโรค แหล่งที่มาของการติดเชื้อคือผู้ป่วยที่มีรูปแบบเด่นชัดทางคลินิกหรือไม่แสดงอาการ คนป่วยจะปล่อยไวรัสเข้าไป สิ่งแวดล้อมเมื่อไอ พูดคุย จาม มีหยดน้ำลาย น้ำมูก เสมหะ อยู่แล้วในช่วงระยะฟักตัว

ผู้ป่วยจะติดเชื้อได้ 24 ชั่วโมงก่อนเริ่มแสดงอาการหลัก และก่อให้เกิดอันตรายจากโรคระบาดภายใน 48 ชั่วโมงหลังจากการหายตัวไป

กลไกการส่งผ่านเป็นแบบแอโรเจน เส้นทางการส่งสัญญาณเป็นแบบทางอากาศ ความอ่อนแอของผู้คนต่อโรคไข้หวัดใหญ่นั้นสูงมาก ทุกคนจะป่วย กลุ่มอายุส่วนใหญ่จะอยู่ใน เวลาฤดูหนาว- เด็กและผู้สูงอายุจะอ่อนแอที่สุด ชื่อของโรคสะท้อนให้เห็นถึงลักษณะเฉพาะของระบาดวิทยา: ไข้หวัดใหญ่จากภาษาฝรั่งเศส กริปเปอร์ - คว้า, ไข้หวัดใหญ่ - จากภาษาอิตาลี Influenza di freddo - อิทธิพลของความหนาวเย็น

ในบรรดาโรคทางเดินหายใจเฉียบพลันทั้งหมด ไข้หวัดใหญ่เป็นโรคที่แพร่หลายและรุนแรงที่สุด โรคระบาดและโรคระบาดไข้หวัดใหญ่ส่งผลกระทบต่อประชากรโลกมากถึง 30-50% หรือมากกว่านั้น ก่อให้เกิดความเสียหายอย่างใหญ่หลวงต่อสุขภาพและเศรษฐกิจของประเทศ คำอธิบายเกี่ยวกับโรคระบาดไข้หวัดใหญ่ครั้งแรกเกิดขึ้นตั้งแต่ศตวรรษที่ 12-14 การเกิดโรคระบาดใหญ่และโรคระบาดใหญ่มีสาเหตุมาจากไวรัสไข้หวัดใหญ่ชนิด A ซึ่งมีสาเหตุมาจากความแปรปรวนของไวรัสสูงและสัมพันธ์กับการเกิดขึ้นของชนิดย่อยใหม่อันเป็นผลมาจากการเปลี่ยนแปลงของแอนติเจน

ระหว่างการระบาดใหญ่ การระบาดจะเกิดขึ้นทุกๆ 1.5-2 ปี ซึ่งเกี่ยวข้องกับการเคลื่อนตัวของแอนติเจนของไวรัส ในปีพ.ศ. 2461 การระบาดใหญ่ของไข้หวัดใหญ่สเปน (มีผู้เสียชีวิต 1.5 พันล้านคน เสียชีวิต 20 ล้านคน) มีสาเหตุมาจากไวรัสไข้หวัดใหญ่สายพันธุ์ A1 ซึ่งได้รับการจดทะเบียนครั้งแรกในสเปน การระบาดใหญ่นี้ครอบคลุมประชากรเกือบทั้งหมดของโลก โรคนี้มีลักษณะโดยการพัฒนาของโรคปอดบวมเลือดออกรุนแรงมากโดยมีอัตราการเสียชีวิตเป็นประวัติการณ์ (มากถึง 1% ของทุกกรณี)

ในปี พ.ศ. 2500 การระบาดใหญ่ของ "เอเชีย" (มีผู้เสียชีวิต 2 พันล้านคน) มีสาเหตุมาจากชนิดย่อยใหม่ - ชนิดย่อย A2 ในปี พ.ศ. 2511 การระบาดใหญ่ของ “ฮ่องกง” (ประชากร 1 พันล้านคนล้มป่วย) มีสาเหตุมาจากชนิดย่อยที่เพิ่งเกิดขึ้นใหม่ - ชนิดย่อย A3 ตามกฎแล้ว ตัวเลือกใหม่ไวรัสจะแทนที่ตัวแปรที่หมุนเวียนก่อนหน้านี้จากประชากรมนุษย์

แต่ในปี 1977 หลังจากหยุดไป 20 ปี ประเภท A1 ก็ "กลับมา" โดยไม่คาดคิด ซึ่งนำไปสู่การแพร่ระบาดครั้งใหญ่ ผลที่ตามมาคือเชื้อไวรัสไข้หวัดใหญ่ที่ถูกแทนที่ยังคงมีอยู่ และอาจทำให้เกิดการแพร่ระบาดอีกครั้งได้ในช่วงเวลาหนึ่ง ไวรัสประเภท B ทำให้เกิดโรคระบาดในท้องถิ่น แต่ประเภท C ไม่ทำให้เกิดโรคระบาด กลไกการเกิดโรคและภาพทางคลินิกของโรค ประตูทางเข้าคือทางเดินหายใจส่วนบน ไวรัสบุกรุกเซลล์เยื่อบุผิวของเยื่อเมือกและขยายตัวในเซลล์เหล่านี้

ผลกระทบของไวรัสต่อเซลล์เยื่อบุผิวทำให้เกิดเนื้อร้ายและการทำลายล้าง (การปฏิเสธ) ของเยื่อบุผิวซึ่งเป็นผลมาจากการที่เยื่อเมือกสามารถซึมผ่านของไวรัสและแบคทีเรียได้ พวกมันเจาะเลือดและแพร่กระจายไปทั่วร่างกาย” Viremia มาพร้อมกับรอยโรคหลาย ๆ ประการของ endothelium ของเส้นเลือดฝอยที่มีการซึมผ่านของพวกมันเพิ่มขึ้น

ใน กรณีที่รุนแรงการตกเลือดอย่างกว้างขวางจะสังเกตได้ในปอด กล้ามเนื้อหัวใจตาย และอวัยวะในเนื้อเยื่อ ผลิตภัณฑ์สลายตัวของเซลล์ที่เสียหายและโปรตีนของไวรัสได้ พิษบน อวัยวะต่างๆและระบบอวัยวะ สารพิษของไวรัสกดระบบประสาทส่วนกลางอย่างรุนแรงและแม้ว่ากระบวนการนี้จะใช้เวลาไม่นาน (3 - 5 วัน) แต่ผู้ป่วยยังคงอ่อนแอลงเป็นเวลานานและมีการติดเชื้อทุติยภูมิร่วมกับร่างกายที่อ่อนแอและเกิดภาวะแทรกซ้อน: โรคปอดบวมไข้หวัดใหญ่ , ปอดบวมน้ำแบบเฉียบพลัน, ไตถูกทำลาย , หัวใจ, หลอดลม

ภาวะแทรกซ้อนที่พบบ่อยของโรคไข้หวัดใหญ่คือโรคปอดบวมจากแบคทีเรีย (กลุ่ม B streptococci) ในช่วงที่มีการระบาดของไข้หวัดใหญ่สเปน ผู้คนส่วนใหญ่เสียชีวิตจากโรคปอดบวมจากแบคทีเรีย

ในการเกิดโรคของไข้หวัดใหญ่ไม่เพียง แต่ความมึนเมาเท่านั้นที่สำคัญ แต่ยังรวมถึงการแพ้ตลอดจนการละเมิดคุณสมบัติการทำงานของเซลล์ภูมิคุ้มกันบกพร่องด้วยการพัฒนาภูมิคุ้มกันบกพร่อง ระยะฟักตัว- หลายชั่วโมง - 1-3 วัน มีลักษณะเป็นเฉียบพลัน อุณหภูมิเพิ่มขึ้นถึง 37.5 - 38 ° C มึนเมาทั่วไป แสดงอาการไม่สบาย ปวดศีรษะ ปวดใน ลูกตา, กระบวนการอักเสบทางเดินหายใจที่มีความรุนแรงต่างกัน (โรคจมูกอักเสบ, กล่องเสียงอักเสบ, หลอดลมอักเสบ, หลอดลมอักเสบ)

ภาวะไข้ไข้หวัดใหญ่โดยไม่มีภาวะแทรกซ้อนเป็นเวลา 5-6 วัน ภูมิคุ้มกัน หลังจาก ความเจ็บป่วยที่ผ่านมาภูมิคุ้มกันเฉพาะประเภทและความเครียดเกิดขึ้นซึ่งจัดทำโดยปัจจัยเซลล์และร่างกายที่จำเพาะและไม่จำเพาะ คุ้มค่ามากมีแอนติบอดี Ig A ภูมิคุ้มกันข้ามไม่พัฒนา หลังจากป่วยด้วยโรคไข้หวัดใหญ่ชนิด A1 คุณสามารถเป็นโรคไข้หวัดใหญ่ชนิด A2 ได้ หลังจากไวรัสประเภท B ภูมิคุ้มกันจะอยู่ได้ 1-2 ปี หลังจากไวรัสประเภท B - 3-5 ปี

เฉยๆ ภูมิคุ้มกันตามธรรมชาติ- ในเด็กอายุไม่เกิน 8 - 11 เดือน เนื่องจากความแปรปรวนของแอนติเจนของไวรัสสูง การฟื้นตัวจึงไม่นำไปสู่การพัฒนาภูมิคุ้มกันที่มั่นคงต่อการติดเชื้อซ้ำ

การวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการ วัสดุที่กำลังศึกษา: รอยเปื้อนจากเยื่อเมือกของโพรงจมูก, น้ำมูกไหลจากโพรงจมูก, ชิ้นส่วนของปอด, สมอง ในกรณีที่เสียชีวิต

วิธีการวินิจฉัย: 1) วิธีไซโตริโนสโคป - การตรวจหาการรวมเซลล์ภายในเซลล์ที่เฉพาะเจาะจงกับไวรัส - เมื่อย้อมด้วย pyoctanin ภายใต้กล้องจุลทรรศน์จะมองเห็นการรวมสีแดงสดของไวรัสไข้หวัดใหญ่ในเซลล์ของเยื่อบุผิวปรับเลนส์; 2) วิธีการทางไวรัสวิทยา - การแยกไวรัสไข้หวัดใหญ่ออกจากร่างกายมนุษย์โดยการติดเชื้อตัวอ่อนไก่ด้วยไม้กวาดจากช่องจมูกของผู้ป่วย การบ่งชี้ (การมีอยู่) ของไวรัสดำเนินการโดยใช้ RGA (ไวรัสไข้หวัดใหญ่เกาะติดกันเม็ดเลือดแดงของมนุษย์และสัตว์ต่าง ๆ ) การระบุไวรัสจะดำเนินการเป็นระยะ: ชนิดถูกกำหนดใน RSC, ชนิดย่อยของ hemagglutinin ถูกกำหนดใน RGA และชนิดย่อย neuraminidase ถูกกำหนดในปฏิกิริยาการยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ 3) วิธีการทางเซรุ่มวิทยา - การตรวจหาการเพิ่มขึ้นของไทเทอร์ (4 เท่า) ของแอนติบอดีจำเพาะในซีรัมเลือดของผู้ป่วยโดยใช้ RSC, RTGA, RN ในการเพาะเลี้ยงเซลล์, ปฏิกิริยาการตกตะกอนในเจล, ELISA; 4) วิธีการทางชีวภาพ - การติดเชื้อในช่องปากของหนู - การฉีดสารเข้าไปในปอดภายใต้การดมยาสลบอีเทอร์ หนูตายหลังจาก 2-3 วันอันเป็นผลมาจากโรคปอดบวม 5) การวินิจฉัยอย่างรวดเร็ว - การตรวจหาแอนติเจนของไวรัสโดยใช้ RIF

การรักษาและการป้องกัน

เพื่อป้องกันและรักษาในระยะแรกของโรคมนุษย์ เม็ดเลือดขาวอินเตอร์เฟอรอน(ในจมูก) ใน วัตถุประสงค์ทางการแพทย์ใช้ ยาต้านไวรัส- เรแมนทาดีน (ไข้หวัดใหญ่ชนิด A), อะดาโพรมีน, ไวรัสโซล และยากระตุ้นภูมิคุ้มกัน - ไดบาโซล, โพรดิจิโอซาน, เลวามิโซล

ในกรณีของโรคไข้หวัดใหญ่รุนแรงโดยเฉพาะในเด็กจะใช้อิมมูโนโกลบูลินต้านไข้หวัดใหญ่ของผู้บริจาคเช่นเดียวกับยา - สารยับยั้งโปรตีเอสของเซลล์ (Gordox, Contrical, aminocaproic acid)

การป้องกันพิเศษ ใช้ยาต้านไวรัสและสารกระตุ้นภูมิคุ้มกันต่อไปนี้ รวมถึงวัคซีนทั้งที่มีชีวิตและปิดการใช้งาน: 1) วัคซีนโมโนที่มีชีวิตสำหรับ การบริหารช่องปาก- สายพันธุ์ไวรัสที่แพร่กระจายอยู่ในปัจจุบันถูกลดทอนลง (A1, A3 และ B) แสดงภูมิคุ้มกันที่ยิ่งใหญ่ที่สุด 2) วัคซีนไวรัสทั้งตัวจากสายพันธุ์ไวรัสที่ถูกยับยั้งโดยฟอร์มาลดีไฮด์หรือรังสียูวี 3) วัคซีนไข้หวัดใหญ่หน่วยย่อยจากแอนติเจนที่พื้นผิวเท่านั้น - แอนติเจน HA และ NA (มีปฏิกิริยาน้อยที่สุด)

เพื่อให้ได้วัคซีน ไวรัสจะถูกเพาะเลี้ยงในเอ็มบริโอไก่และในเซลล์เอ็มบริโอไก่

เมื่อมีการฉีดวัคซีนในพื้นที่และ ภูมิคุ้มกันทางร่างกาย- การฉีดวัคซีนจะดำเนินการในช่วงเวลา ความเสี่ยงที่ยิ่งใหญ่ที่สุดการพัฒนาของโรคระบาด ส่วนใหญ่จะมีไว้สำหรับคนอายุน้อยกว่าและผู้สูงอายุ การใช้วัคซีนที่ฆ่าแล้วจำเป็นต้องมีการฉีดวัคซีนซ้ำทุกปี ประสิทธิภาพไม่เกิน 60 - 70%

เพราะ เนื่องจากมักสังเกตการเปลี่ยนแปลงของแอนติเจนของเชื้อโรคจึงสามารถกำหนดชุดของแอนติเจนของไวรัสที่เกี่ยวข้องสำหรับการสร้างภูมิคุ้มกันได้หลังจากเริ่มมีการระบาดของโรคเท่านั้น

ตั๋ว 15.

ปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดง (HRA)

RGA แรกเป็นแบบซีรัมวิทยา ในปฏิกิริยานี้ เซลล์เม็ดเลือดแดงจะเกาะติดกันเมื่อมีปฏิกิริยากับแอนติบอดีที่เหมาะสม (ฮีแม็กกลูตินิน)

ปฏิกิริยานี้ใช้กันอย่างแพร่หลายเพื่อระบุกลุ่มเลือด

แอนติบอดี้แต่มีสารพิเศษที่เกิดจากไวรัส ตัวอย่างเช่น ไวรัสไข้หวัดใหญ่เกาะกลุ่มกันกับเซลล์เม็ดเลือดแดงของไก่และหนูตะเภา และไวรัสโปลิโอเกาะกลุ่มกันกับเซลล์เม็ดเลือดแดงของแกะ ปฏิกิริยานี้ช่วยให้เราสามารถตัดสินว่ามีไวรัสอยู่ในเนื้อหาที่กำลังศึกษาอยู่หรือไม่

ปฏิกิริยาจะดำเนินการในหลอดทดลองหรือบนแผ่นพิเศษที่มีบ่อน้ำ

วัสดุที่ทดสอบว่ามีไวรัสอยู่จะถูกเจือจางด้วยสารละลายไอโซโทนิกตั้งแต่ 1:10 ถึง 1:1280; เจือจางแต่ละครั้ง 0.5 มิลลิลิตรผสมกับสารแขวนลอยเซลล์เม็ดเลือดแดง 1-2% ในปริมาตรเท่ากัน ในการควบคุม ผสมเม็ดเลือดแดง 0.5 มิลลิลิตรกับสารละลายไอโซโทนิก 0.5 มิลลิลิตร วางท่อไว้ในเทอร์โมสตัทเป็นเวลา 30 นาที และปล่อยเพลตไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 45 นาที

ปฏิกิริยาการยับยั้งการเกิดเม็ดเลือดแดง

หากผลลัพธ์เป็นลบ เซลล์เม็ดเลือดแดงจะก่อตัวเป็นตะกอนหนาแน่นและมีขอบเรียบ (“ปุ่ม”) ควรมีตะกอนชนิดเดียวกันอยู่ในการควบคุม

ความรุนแรงของปฏิกิริยาแสดงด้วยเครื่องหมาย “+” ตัวไตเตรทของไวรัสคือการเจือจางสูงสุดของวัสดุที่เกิดการเกาะติดกัน

ปฏิกิริยาการยับยั้งการเกิดเม็ดเลือดแดง

นี่คือปฏิกิริยาทางซีรั่มวิทยาซึ่งแอนติบอดีจำเพาะของไวรัสที่ทำปฏิกิริยากับไวรัส (แอนติเจน) จะทำให้เป็นกลางและกีดกันความสามารถในการเกาะติดกันของเซลล์เม็ดเลือดแดงเช่น

e. ยับยั้งปฏิกิริยาการเกิดเม็ดเลือดแดง ปฏิกิริยานี้ช่วยให้คุณระบุประเภทและประเภทของไวรัสได้

การบัญชีสำหรับผลลัพธ์หากทำการทดลองอย่างถูกต้อง ควรมีการสร้าง "ปุ่ม" ในการควบคุมซีรัมและเม็ดเลือดแดง - ไม่มีปัจจัยที่เกาะติดกันของเม็ดเลือดแดง ในการควบคุมแอนติเจนจะเกิด "ร่ม" - ไวรัสทำให้เกิดการเกาะติดกันของเม็ดเลือดแดง

หากซีรั่มมีความคล้ายคลึงกับไวรัสที่กำลังศึกษาอยู่ จะมีการสร้าง "ปุ่ม" ขึ้นมา - ซีรั่มได้ทำให้ไวรัสเป็นกลางแล้ว

ปฏิกิริยาการเกิดเม็ดเลือดแดงทางอ้อม

การตั้งค่าปฏิกิริยา

เซรั่มจะถูกให้ความร้อนเป็นเวลา 30 นาทีที่ 56 °C เจือจางตามลำดับในอัตราส่วน 1:10 - 1:1280 และเทลงในหลอดหรือหลุมขนาด 0.25 มล. โดยเติมเซลล์เม็ดเลือดแดง 2 หยดที่มีแอนติเจนที่ดูดซับอยู่ลงไป

การควบคุม:สารแขวนลอยของเม็ดเลือดแดงที่มีแอนติเจนที่ถูกดูดซับด้วยเซรั่มภูมิคุ้มกันที่เห็นได้ชัด, สารแขวนลอยของเม็ดเลือดแดงที่มีแอนติเจนที่ถูกดูดซับด้วยเซรั่มปกติ; สารแขวนลอยของเซลล์เม็ดเลือดแดงปกติด้วยเซรั่มทดสอบ

ในการควบคุมครั้งแรก ควรเกิดการเกาะติดกัน ในส่วนที่สองและสามไม่ควรเกิดขึ้น

คำถามทดสอบ

2. ปฏิกิริยาการเกาะติดกันของเซลล์เม็ดเลือดแดงจะเกิดขึ้นหรือไม่หากมีการเติมไวรัสและซีรั่มที่เกี่ยวข้องลงไป

ปฏิกิริยาที่เปิดเผยปรากฏการณ์นี้ชื่ออะไร?

งานภาคปฏิบัติครั้งที่ 12

ปฏิกิริยาการตรึงส่วนเสริม

ปฏิกิริยาการตรึงส่วนเติมเต็ม (CFR) ขึ้นอยู่กับข้อเท็จจริงที่ว่าสารเชิงซ้อนแอนติเจน-แอนติบอดีจำเพาะจะดูดซับ (จับ) ส่วนเสริมเข้ากับตัวมันเองเสมอ

RKS เป็นปฏิกิริยาทางซีรัมวิทยาที่ซับซ้อน

มันเกี่ยวข้องกับส่วนประกอบและระบบแอนติเจนและแอนติบอดีสองระบบ โดยพื้นฐานแล้วนี่คือปฏิกิริยาทางเซรุ่มวิทยาสองประการ

ตรวจพบการก่อตัวของสารเชิงซ้อนนี้โดยใช้ระบบเม็ดเลือดแดงแตกหรือตัวบ่งชี้ที่สอง

ประกอบด้วยเซลล์เม็ดเลือดแดงแกะ (แอนติเจน) และซีรั่มเม็ดเลือดแดงแตก (แอนติบอดี) ที่เกี่ยวข้อง เช่น คอมเพล็กซ์ภูมิคุ้มกันสำเร็จรูป ในระบบนี้ การสลายของเซลล์เม็ดเลือดแดงสามารถเกิดขึ้นได้เมื่อมีส่วนประกอบเสริมเท่านั้น ถ้าคอมพลิเมนต์ถูกผูกมัดโดยระบบแรก จากนั้นในระบบที่สองจะไม่มีภาวะเม็ดเลือดแดงแตกเพราะว่า

ไม่มีส่วนเสริมฟรี การไม่มีภาวะเม็ดเลือดแดงแตก (เนื้อหาของหลอดมีเมฆมากหรือมีตะกอนของเม็ดเลือดแดงที่ด้านล่าง) จะถูกบันทึกเป็นผลบวกของ RSC

ส่วนประกอบ ปฏิกิริยาการตรึงเสริม:

แอนติเจน - มักจะ lysate, แยก, hapten,

ไม่ค่อยมีการแขวนลอยของจุลินทรีย์

2. แอนติบอดี - เซรั่มของผู้ป่วย

3. อาหารเสริม - เซรั่มหนูตะเภา

แอนติเจน - เซลล์เม็ดเลือดแดงแกะ

5. แอนติบอดี - ฮีโมไลซินต่อเม็ดเลือดแดงแกะ

6. สารละลายไอโซโทนิก

เนื่องจาก RSC มีส่วนประกอบที่ซับซ้อนจำนวนมาก

ข้อมูลที่เกี่ยวข้อง:

ค้นหาบนเว็บไซต์:

ขึ้นอยู่กับความจริงที่ว่าเซลล์เม็ดเลือดแดงซึ่งแอนติเจนถูกดูดซับไว้ก่อนหน้านี้ได้รับความสามารถในการเกาะติดกันเมื่อมีซีรั่ม (แอนติบอดี) ที่คล้ายคลึงกัน

ในกรณีนี้เซลล์เม็ดเลือดแดงทำหน้าที่เป็นพาหะที่มีปัจจัยเฉพาะซึ่งการเกาะติดกันเกิดขึ้นอันเป็นผลมาจากปฏิกิริยาของแอนติเจน + แอนติบอดี

เซลล์เม็ดเลือดแดงที่อยู่บนพื้นผิวซึ่งมีแอนติเจนเกาะติดแน่นเรียกว่า erythrocyte antigen Diagnosticum หรือเซลล์เม็ดเลือดแดงที่ไวต่อแอนติเจน

RNGA - แอนติบอดีอีกประเภทหนึ่งถูกดูดซับบนพื้นผิวของเม็ดเลือดแดงและการเกาะติดกันตามมาจะเกิดขึ้นต่อหน้าแอนติเจนที่คล้ายคลึงกัน

ในกรณีนี้เม็ดเลือดแดงดังกล่าวเรียกว่า erythrocyte antibody Diagnosticum หรือเม็ดเลือดแดงซึ่งมีความไวต่อแอนติบอดี

จากแนวทางระเบียบวิธีขั้นพื้นฐานทั้งสองนี้ การปรับเปลี่ยน RNGA จำนวนมากได้รับการพัฒนาและใช้งาน ดังนั้นจึงใช้อนุภาคน้ำยางมาตรฐานขนาดเล็กเป็นตัวพา

ปฏิกิริยาการยับยั้งการเกิดเม็ดเลือดแดง (HAI)

ในกรณีนี้ ปฏิกิริยานี้เรียกว่า ปฏิกิริยาการเกาะติดกันของยาง (RLA) หรือถูกนำมาใช้ สแตฟิโลคอคคัส ออเรียส- ปฏิกิริยาการแข็งตัวของเลือด ฯลฯ โดยปกติแล้วในสถานประกอบการอุตสาหกรรมชีวภาพจะมีการเตรียมการวินิจฉัยเม็ดเลือดแดงและประสบการณ์หลักของ RNGA จะดำเนินการในห้องปฏิบัติการวินิจฉัย

การเตรียมการวินิจฉัยเม็ดเลือดแดงมีขั้นตอนต่อไปนี้:

การตรึงเซลล์เม็ดเลือดแดงด้วยฟอร์มาลดีไฮด์หรือกลูตาริกหรืออะคริลิกอัลดีไฮด์
เซลล์เม็ดเลือดแดงที่ได้รับการบำบัดดังกล่าวจะถูกเก็บไว้เป็นเวลานาน บ่อยครั้งที่มีการใช้เม็ดเลือดแดงจากแกะ, มนุษย์, ไก่ ฯลฯ เพื่อจุดประสงค์นี้
การรักษาเม็ดเลือดแดงคงที่ด้วยสารละลายแทนนิน เป็นผลให้เซลล์เม็ดเลือดแดงได้รับความสามารถในการดูดซับโปรตีน (ไวรัสและแอนติบอดี) บนพื้นผิวอย่างถาวร
ความไวของเม็ดเลือดแดง tanized โดยไวรัสหรือแอนติบอดี

ควรสังเกตว่าวิธีการเตรียมการวินิจฉัยเม็ดเลือดแดงสำหรับการติดเชื้อไวรัสนั้นแตกต่างกัน

ขั้นตอนการดำเนินการ RNGA เพื่อตรวจจับและกำหนดแอนติบอดีไทเทอร์มีดังนี้:

เม็ดเลือดแดงที่ไวต่อแอนติเจนในปริมาณเท่ากันจะถูกเพิ่มในการเจือจางซีรั่ม 2 เท่าติดต่อกัน
ส่วนผสมทิ้งไว้ 2-3 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องหรือ 16-18 ชั่วโมงที่ 4 °C
คำนึงถึงผลลัพธ์
หากซีรั่มมีแอนติบอดีต่อไวรัสซึ่งมีความไวต่อเซลล์เม็ดเลือดแดงจะสังเกตการเกิดเม็ดเลือดแดงซึ่งประเมินเป็นไม้กางเขน

แอนติบอดีไทเทอร์ในซีรั่มถือเป็นการเจือจางซีรั่มสูงสุดที่ยังคงให้การเกิดเม็ดเลือดแดงแตกอย่างน้อยสองครั้ง

RNGA มาพร้อมกับการควบคุมที่เกี่ยวข้องทั้งหมด โดยปกติแล้วปฏิกิริยาจะดำเนินการโดยใช้วิธีไมโคร

RNGA ช่วยให้คุณสามารถแก้ไขปัญหาการวินิจฉัยต่อไปนี้:

ตรวจหาแอนติบอดีและตรวจสอบระดับไทเทอร์ในซีรัมในเลือดโดยใช้การวินิจฉัยแอนติเจนของเม็ดเลือดแดงที่รู้จัก
ตรวจจับและระบุไวรัสที่ไม่รู้จักโดยใช้การวินิจฉัยแอนติบอดีของเม็ดเลือดแดงที่รู้จัก

ข้อดีของ RNGA: ความไวสูง ความเรียบง่ายของเทคนิคการจัดตำแหน่ง และความเร็วในการตอบสนอง

อย่างไรก็ตามเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องทราบว่ามีปัญหาอย่างมากในการเตรียมการวินิจฉัยเม็ดเลือดแดงที่เสถียร (ขึ้นอยู่กับความบริสุทธิ์ของส่วนประกอบที่ใช้อย่างมากความจำเป็นในการเลือกโหมดการตรึงการทำให้เป็นแทนและความไวของเม็ดเลือดแดงสำหรับไวรัสแต่ละประเภท)

หากคุณพบข้อผิดพลาด โปรดเลือกส่วนของข้อความแล้วกด Ctrl+Enter

เพื่อนร่วมชั้น

ใช้เซลล์เม็ดเลือดแดงหรือวัสดุสังเคราะห์ที่เป็นกลาง (เช่น อนุภาคยาง) บนพื้นผิวที่ดูดซับแอนติเจน (แบคทีเรีย ไวรัส เนื้อเยื่อ) หรือแอนติบอดี

การเกาะติดกันเกิดขึ้นเมื่อมีการเติมซีรั่มหรือแอนติเจนที่เหมาะสม เซลล์เม็ดเลือดแดงที่ไวต่อแอนติเจนเรียกว่า antigenic erythrocyte Diagnosticum และใช้ในการตรวจจับและไทเทรตแอนติบอดี เม็ดเลือดแดงไวต่อแอนติบอดี เรียกว่าอิมมูโนโกลบูลินเม็ดเลือดแดงวินิจฉัยและใช้ในการตรวจหาแอนติเจน

ปฏิกิริยา การเกิดเม็ดเลือดแดงแบบพาสซีฟใช้ในการวินิจฉัยโรคที่เกิดจากแบคทีเรีย ( ไข้ไทฟอยด์และไข้รากสาดเทียม โรคบิด โรคแท้งติดต่อ กาฬโรค อหิวาตกโรค ฯลฯ) โปรโตซัว (มาลาเรีย) และไวรัส (ไข้หวัดใหญ่ การติดเชื้ออะดีโนไวรัส, ไวรัสตับอักเสบ B, โรคหัด, โรคไข้สมองอักเสบจากเห็บ, ไครเมีย ไข้เลือดออกฯลฯ) ตลอดจนตรวจฮอร์โมนบางชนิดเพื่อระบุตัวตน ภูมิไวเกินอดทนเพื่อ ยาและฮอร์โมนเช่นเพนิซิลลินและอินซูลิน

ปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดงแบบพาสซีฟ (RPHA)

การทดสอบการสร้างเม็ดเลือดแดงแบบพาสซีฟเป็นวิธีการที่ละเอียดอ่อนในการวินิจฉัยทางเซรุ่มวิทยา และใช้สำหรับการวินิจฉัยทั้งในระยะเริ่มแรกและแบบย้อนหลัง ตลอดจนเพื่อระบุสถานะภูมิคุ้มกันของผู้ที่ได้รับวัคซีน ในผู้ป่วยที่เป็นโรคทิวลาเรเมีย มักจะตรวจพบแอนติบอดีในช่วงปลายสัปดาห์ที่ 1 หรือ 2 ของโรค หลังจากผ่านไป 1-1.5 เดือน RPHA titers จะถึงระดับสูงสุด (1: 100,000-1: 20,000 ซึ่งมักจะสูงกว่านั้นน้อยกว่า) หลังจากนั้น ลดลงเหลือระดับ 1:100-1:200 จะถูกบันทึกไว้ เวลานาน.

ในผู้ที่ได้รับการฉีดวัคซีน แอนติบอดีจะถูกตรวจพบอย่างต่อเนื่องเช่นกัน อย่างไรก็ตาม ใน titers ที่ต่ำกว่า จะต้องไม่เกิน 1:2000-1:5000 1-1.5 เดือนหลังการฉีดวัคซีน และคงอยู่หลายปีที่ระดับต่ำที่ 1:20-1:80

แอนติเจนสำหรับการแสดงระยะ RPHA คือ tularemia erythrocyte Diagnosticum (antigenic)

ยานี้เป็นเซลล์เม็ดเลือดแดงแกะที่ถูกทำให้เป็นฟอร์มาลินซึ่งมีความไวต่อแอนติเจนของทิวลาเรเมียซึ่งมีจำหน่ายในรูปแบบของเหลวและแห้ง การเตรียมของเหลว - สารแขวนลอย 10% ของเซลล์เม็ดเลือดแดงในสารละลายฟอร์มาลดีไฮด์ที่มีความเข้มข้น 10% การเตรียมไลโอฟิไลซ์แบบแห้งเป็นการแขวนลอยเซลล์เม็ดเลือดแดง 10% แห้งแบบสุญญากาศโดยไม่มีสารกันบูด ก่อนใช้งานให้เจือจางตามคำแนะนำบนฉลาก ในการทำปฏิกิริยาในแผ่นโพลีสไตรีนจะใช้ยาทั้งสองชนิดที่ความเข้มข้น 2.5% และเมื่อทำปฏิกิริยาในไมโครปริมาตร - ที่ความเข้มข้น 0.5%

เทคนิคการตั้งค่า RPGA

ซีรั่มทดสอบจะถูกเจือจาง น้ำเกลือ 1:5 (1:10) และอุ่นที่อุณหภูมิ 56 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 30 นาที

ปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดงแตก (HRA) และ

หลังจากนี้ เพื่อกำจัดแอนติบอดีที่แตกต่างกับเม็ดเลือดแดงแกะ ซีรั่มจะได้รับการบำบัดด้วยการแขวนลอย 50% ของเม็ดเลือดแดงแกะที่ฟอร์มาลินไนซ์ โดยเพิ่มเซลล์เม็ดเลือดแดงในอัตรา 2 หยด (0.05 มล.) ต่อเซรั่ม 1 มล. แล้วผสมให้เข้ากันโดยเขย่า

ซีรั่มจะถูกปล่อยทิ้งไว้จนกว่าเม็ดเลือดแดงจะตกตะกอนอย่างสมบูรณ์ หรือถูกปั่นแยกหลังจากผ่านไปหนึ่งชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง หลังจากนั้นจึงพร้อมสำหรับการตรวจ

ของเหลวเจือจางจะถูกเทลงในปริมาตร 0.5 มล. ลงในบ่อหนึ่งแถวบนแผ่นโพลีสไตรีน

ในระหว่างการศึกษาซีรั่มเบื้องต้น แนะนำให้ทดสอบโดยการตั้งค่าปฏิกิริยาในแถวสั้นๆ ของเพลต (6 หลุม) หากตรวจพบแอนติบอดีในชุดสั้น ซีรั่มจะถูกทดสอบซ้ำในการเจือจางชุดยาว (12 หลุม)

หลังจากเทของเหลวเจือจางแล้ว ให้เติมซีรั่มทดสอบ 0.5 มล. ในการเจือจาง 1:5 ลงในหลุมแรกของแต่ละแถว (สั้นหรือยาว) จากนั้นให้ไตเตรทซีรั่มในปริมาณเท่ากันด้วยการเจือจางสองเท่า ดังนั้น การเจือจางในซีรั่มจะได้รับในชุดสั้นตั้งแต่ 1:10 ถึง 1:320 และในชุดยาวตั้งแต่ 1:10 ถึง 1:20480 หลังจากการไตเตรทซีรั่ม จะมีการเพิ่มสารแขวนลอย 2.5% ของเม็ดเลือดแดงไวแสงหนึ่งหยด (0.05 มล.) ลงในแต่ละหลุม

เนื้อหาของแผ่นจะถูกเขย่าอย่างทั่วถึงจนได้สารแขวนลอยที่เป็นเนื้อเดียวกัน จานจะถูกทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องบนพื้นผิวโต๊ะที่อยู่นิ่ง การบันทึกปฏิกิริยาเบื้องต้นจะดำเนินการหลังจาก 2-3 ชั่วโมง การกำหนดไตเตอร์ขั้นสุดท้ายจะเกิดขึ้นหลังจากการตกตะกอนของเซลล์เม็ดเลือดแดงในบ่ออย่างสมบูรณ์ มีการควบคุมต่อไปนี้สำหรับปฏิกิริยา: 1) ทดสอบเซรั่มเจือจาง 1:10 ในปริมาตร 0.5 มล. + 1 หยดของสารแขวนลอย 2.5% ของเม็ดเลือดแดงที่ไม่ไวต่อความรู้สึก; 2) ของเหลวเจือจางในปริมาตร 0.5 มล. + 1 หยดของสารแขวนลอย 2.5% ของเม็ดเลือดแดงที่ไม่ไวต่อความรู้สึก 3) ของเหลวเจือจางในปริมาตร 0.5 มล. + 1 หยดของเม็ดเลือดแดงที่ไวต่อสารแขวนลอย 2.5%

การควบคุมทั้งหมดควรให้ปฏิกิริยาเชิงลบอย่างชัดเจน

การบัญชีและการประเมิน RPGA ปฏิกิริยาได้รับการประเมินตามรูปแบบต่อไปนี้:

1) อย่างรวดเร็ว ปฏิกิริยาเชิงบวก(++++) - เซลล์เม็ดเลือดแดงตกลงไปที่ด้านล่างของรูในชั้นคู่ในรูปแบบของ "ร่ม" ซึ่งมักจะมีขอบสแกลลอปละลาย

2) ปฏิกิริยาเชิงบวก (+++) - เซลล์เม็ดเลือดแดงครอบคลุมอย่างน้อย 2/3 ของก้นบ่อ

3) ปฏิกิริยาเชิงบวกเล็กน้อย (++) - เกาะติดกันมีขนาดเล็กและตั้งอยู่ตรงกลางบ่อ

4) ปฏิกิริยาที่น่าสงสัย (+) - รอบตะกอนของเม็ดเลือดแดงที่อยู่ตรงกลางของบ่อจะมีเม็ดเกาะติดกันแต่ละเม็ด

5) ลบ (-) - ที่ด้านล่างของรูเซลล์เม็ดเลือดแดงจะอยู่ในรูปแบบของ "ปุ่ม" หรือวงแหวนเล็ก ๆ ที่มีขอบเรียบและคมชัด

ระดับของซีรั่มจะถูกนำมาพิจารณาตามการเจือจางครั้งสุดท้ายของซีรั่มซึ่งให้ปฏิกิริยาที่ชัดเจนมาก (อย่างน้อยสามบวก)

การเจือจาง 1:100 ขึ้นไปถือเป็นไตเตอร์ในการวินิจฉัย อย่างไรก็ตาม เช่นเดียวกับในกรณีของ RA จำเป็นต้องติดตามการเพิ่มขึ้น

RPHA สำหรับทิวลาเรเมียค่อนข้างเฉพาะเจาะจงและตรวจพบปฏิกิริยาข้ามบางอย่างกับซีรั่มบรูเซลโลซิสเท่านั้น การวินิจฉัยแยกโรคเป็นไปได้ด้วยความสูงของไทเทอร์ใน RPGA ซึ่งสูงกว่าแอนติเจนที่คล้ายคลึงกันอย่างมีนัยสำคัญ

เทคนิคการตั้งค่า RPHA ในไมโครวอลุ่ม

RPGA สามารถทำได้ในปริมาตรขนาดเล็กโดยใช้เครื่องไตเตรทแบบ Takachi (หรือไมโครเพลทก้นกลมที่มีไมโครปิเปต) ซึ่งช่วยให้สามารถไทเทรตวัสดุในปริมาตร 25 μl และ 50 μl เทคนิคปฏิกิริยาและลำดับของการดำเนินการทั้งหมดจะเหมือนกับเมื่อศึกษาในแผ่นโพลีสไตรีน อย่างไรก็ตาม ควรระลึกไว้เสมอว่าความไวของวิธีการไมโครมักจะเจือจางเพียงครั้งเดียว (เช่น

2 เท่า) ต่ำกว่าวิธีมาโคร

ในการตั้งค่าปฏิกิริยาในไมโครไทเทรต จะมีการเติมของเหลวเจือจางในปริมาตร 50 ไมโครลิตรลงในแต่ละหลุมโดยใช้ปิเปตหยด จากนั้น เมื่อใช้เครื่องไทเทรตที่มีหัวขนาด 50 ไมโครลิตร เซรั่มทดสอบจะถูกรวบรวมโดยการจุ่มส่วนหัวลงไป

ตรวจสอบให้แน่ใจว่าของเหลวเต็มหัวเครื่องไทเทรตแล้ว เครื่องไตเตรทที่มีซีรั่มจะถูกถ่ายโอนไปยังหลุมแรกและตั้งไว้หลายหลุมในแนวตั้ง การเคลื่อนไหวแบบหมุนในทั้งสองทิศทาง จากนั้นเครื่องไตเตรทจะถูกถ่ายโอนไปยังหลุมถัดไป และทำการปรับเปลี่ยนซ้ำ การไตเตรทสามารถดำเนินการพร้อมกันได้หลายแถว หลังจากการไตเตรททั้งซีรีส์ เครื่องไตเตรทจะถูกล้างด้วยน้ำกลั่น (เปลี่ยน 2 ส่วน) โดยการหมุน จากนั้นน้ำจะถูกเอาออกจากศีรษะโดยใช้สำลีแล้วเผาบนเปลวไฟจากหัวเตา

หลังจากการไตเตรท ให้เติมของเหลววินิจฉัยเม็ดเลือดแดง 25 ไมโครลิตรลงในหลุม

ความเข้มข้นของการวินิจฉัยสำหรับ RPHA ใน microvolumes ควรเป็น 0.5% (เช่นการแขวนลอยของเซลล์เม็ดเลือดแดง 2.5% จะถูกเจือจางเพิ่มเติม 5 ครั้ง) หลังจากเพิ่มเซลล์เม็ดเลือดแดงแล้ว ควรเขย่าแผ่นเล็กน้อยจนได้สารแขวนลอยที่เป็นเนื้อเดียวกัน สามารถบันทึกผลลัพธ์ได้ภายใน 1-1.5 ชั่วโมง ซึ่งเป็นข้อได้เปรียบที่สำคัญของ RPGA ในไมโครไทเตอร์

นอกจากนี้ เทคนิคนี้ต้องใช้ส่วนผสมของปฏิกิริยาและซีรั่มทดสอบทั้งหมดในปริมาณเล็กน้อย

ปฏิกิริยาถูกนำมาพิจารณาตามรูปแบบต่อไปนี้:

1) “+” - การเกิดเม็ดเลือดแดงโดยสมบูรณ์ซึ่งเซลล์เม็ดเลือดแดงตกลงไปที่ด้านล่างของบ่อในชั้นที่เท่ากันในรูปแบบของ "ร่ม" ซึ่งครอบครองอย่างน้อย 2/3 ของด้านล่าง

2) “+-” - การเกิดเม็ดเลือดแดงบางส่วนซึ่งเซลล์เม็ดเลือดแดงตกลงไปที่ด้านล่างในรูปแบบของวงแหวนหลวมขนาดเล็ก

3) “-” – ไม่มีภาวะเม็ดเลือดแดงแตกเมื่อเซลล์เม็ดเลือดแดงตกลงไปที่ด้านล่างในรูปแบบของปุ่มหรือวงแหวนเล็ก ๆ ที่มีขอบเรียบ

ความจำเพาะ ผลลัพธ์ที่เป็นบวกที่ได้รับใน RPHA สามารถทดสอบได้โดยใช้ปฏิกิริยาสามองค์ประกอบ - ปฏิกิริยาการยับยั้ง hemagglutination แบบพาสซีฟ (RPHA)

เทคนิคการตั้งค่า RTPGA

ปฏิกิริยานี้ใช้เพื่อยืนยันความจำเพาะของผลลัพธ์ RPGA เชิงบวก เมื่อมีข้อสงสัยหรือมีความสนใจทางระบาดวิทยาเป็นพิเศษ กลไกของปฏิกิริยาคือการยับยั้งเฉพาะของการเกิดเม็ดเลือดแดงเมื่อเติมสารแขวนลอยของแบคทีเรียทิวลาเรเมียที่ถูกฆ่าลงในซีรั่มทดสอบ ส่วนประกอบสามอย่างที่มีปฏิกิริยาโต้ตอบในปฏิกิริยา: เซรั่มทดสอบ แอนติเจนของทิวลาเรเมียจำเพาะ และแอนติเจนของเม็ดเลือดแดงการวินิจฉัย RTPHA มักจะวางไว้ในแถว 7-8 หลุม

ขอแนะนำให้ติดตั้ง RPGA ซ้ำควบคู่ไปกับ RTPGA เทของเหลวเจือจาง 0.25 มล. ลงในหลุมสองแถว จากนั้นเติมเซรั่มทดสอบในปริมาตร 0.25 มล. ลงในหลุมแรกของทั้งสองแถวและทำการไตเตรทสองแถวที่เหมือนกัน เติมของเหลวเจือจาง 0.25 มล. ลงในหลุมทั้งหมดของแถวที่สอง และเติมสารแขวนลอยของแบคทีเรียทิวลาเรเมีย 0.25 มล. ลงในหลุมของแถวแรก

ใช้ Tularemia Diagnosticum (ประกอบด้วยแบคทีเรียทิวลาเรเมีย 25 พันล้านแบคทีเรียใน 1 มล.) เจือจางก่อนหน้านี้ 50 ครั้ง

สารแขวนลอยนี้ประกอบด้วยแบคทีเรีย 500 ล้านตัวใน 1 มล. หรือ 125 ล้านตัวในปริมาตร 0.25 มล. หลังจากเพิ่มแอนติเจนแล้ว จานจะถูกทิ้งไว้เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง หลังจากนั้นจึงเติมการวินิจฉัยเม็ดเลือดแดงหนึ่งหยด (0.05 มล.) ลงในหลุมทั้งหมดของทั้งสองแถว จานจะถูกเขย่าและทิ้งไว้บนพื้นผิวโต๊ะเรียบ

การบัญชีจะดำเนินการหลังจาก 2-3 ชั่วโมง

การบัญชีและการประเมินผลของ RTPGA หากซีรั่มทดสอบมีแอนติบอดีทิวลารีเมียที่จำเพาะ พวกมันจะถูกทำให้เป็นกลางโดยแอนติเจนที่เพิ่มเข้าไป และการเกิดเม็ดเลือดแดงแตกจะไม่เกิดขึ้นในแถวแรกของหลุม หรือหากมีระดับไทเทอร์ในซีรั่มสูง จะสังเกตการเกิดเม็ดเลือดแดงแตกในจำนวนที่น้อยกว่า (2-4) บ่อมากกว่าแถวเดียวกับ RPHA ในกรณีนี้ ความจำเพาะของผลลัพธ์ได้รับการยืนยันแล้ว

หากสังเกตการเกิดเม็ดเลือดแดงในทั้งสองแถว นั่นคือ หากผลลัพธ์ของ RTPGA และ RPGA ตรงกัน แสดงว่าไม่มีแอนติบอดีต่อทิวลาเรเมียในซีรั่มทดสอบ ในกรณีนี้ ผลลัพธ์หลักของ RPGA จะถือว่าไม่เฉพาะเจาะจง

เทคนิคการจัดเตรียม RTHG ในไมโครวอลุ่ม RTPGA เช่นเดียวกับ RPGA สามารถทำได้ในไมโครวอลุ่มโดยใช้ไมโครไทเตอร์ประเภท Takachi

ในการดำเนินการนี้ ให้เติมของเหลวเจือจาง 0.25 ไมโครลิตรลงในหลุมของไมโครเพลท โดยแบ่งเป็น 2 แถวๆ ละ 7-8 หลุม จากนั้น เติมซีรั่มทดสอบ 0.25 ไมโครลิตรและไทเทรตในทั้งสองแถวโดยใช้เครื่องไทเทรต หลังจากนั้นจะมีการเติมแอนติเจนของทิวลาเรเมีย 25 ไมโครลิตร (ความเข้มข้นของแบคทีเรียทิวลาเรเมีย 500 ล้านตัวใน 1 มล.) ในแต่ละหลุมในแถวแรกและเติมของเหลวเจือจาง 25 ไมโครลิตรในแถวที่สอง

จานจะถูกทิ้งไว้เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องหลังจากนั้นจึงเติมแอนติเจน zritrocytic Diagnosticum 25 ไมโครลิตร (ความเข้มข้น 0.5%) ลงในหลุมทั้งหมดของทั้งสองแถว

การบัญชีและการประเมินผลผลลัพธ์จะดำเนินการคล้ายกับปฏิกิริยาในปริมาตรขนาดใหญ่

วันที่เผยแพร่: 2015-02-03; อ่าน: 3176 | การละเมิดลิขสิทธิ์เพจ

studopedia.org - Studopedia.Org - 2014-2018 (0.003 วินาที)…

ฮีแม็กกลูติเนชั่น

การเกิดเม็ดเลือดแดง(จากภาษากรีก háima blood และ lat. agglutinatio ติดกาว) การติดกาวและการตกตะกอนของเซลล์เม็ดเลือดแดงภายใต้อิทธิพลของแบคทีเรีย ไวรัส สารพิษ ฯลฯ สามารถดูดซับบนพื้นผิวของเซลล์เม็ดเลือดแดงได้เช่นเดียวกับฮีแม็กกลูตินิน เซลล์เม็ดเลือดแดงของสัตว์ตัวหนึ่งสามารถจับกลุ่มกันโดยซีรั่มของสัตว์อีกตัวหนึ่งได้เนื่องจากมีไอโซฮีแม็กกลูตินิน (แอนติบอดี) ปกติอยู่ในนั้น การใช้ปฏิกิริยา ช.ติดตั้ง . ปรากฏการณ์ ช.ใช้ในการศึกษาทางจุลชีววิทยาและภูมิคุ้มกัน

มีทั้งทางตรงหรือทางแอคทีฟ และทางอ้อมหรือทางอ้อม ช.ตรง ช.เกิดจากผลโดยตรงของแบคทีเรียและไวรัสต่อเซลล์เม็ดเลือดแดง ช.ในกรณีนี้เฮแม็กกลูตินินโดยใช้เอนไซม์เมือกจะทำปฏิกิริยากับตัวรับเมือกโปรตีเอสที่อยู่บนพื้นผิวของเม็ดเลือดแดงทำให้เกิดการดูดซับของแอนติเจน ผลที่ตามมาคือสารแขวนลอยของเซลล์เม็ดเลือดแดง (เช่น ไก่) ทำให้เกิดตะกอนรูปร่มกว้างและมีขอบหยัก ปฏิกิริยานี้ไม่เฉพาะเจาะจงและเกิดขึ้นโดยปราศจากการมีส่วนร่วมของซีรั่มภูมิคุ้มกัน โดยตรง ช.ใช้ในการศึกษาทางซีรั่มวิทยาโดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อพิจารณาการเจือจางการทำงานของแอนติเจนที่ใช้ในปฏิกิริยาการยับยั้ง ช.ซึ่งขึ้นอยู่กับความล่าช้าของผลของการสร้างเม็ดเลือดแดงของแอนติเจนโดยซีรั่มจำเพาะของภูมิคุ้มกัน โดยตรง ช.นอกจากนี้ยังใช้สำหรับการวินิจฉัยโรคไวรัสบางชนิดเบื้องต้น (ไข้หวัดม้า โรคนก โรคนิวคาสเซิล ไข้หวัดใหญ่เป็ด) ทางอ้อม ช.(RNGA) ขึ้นอยู่กับความสามารถของเม็ดเลือดแดงที่ไวต่อแสง (โดยการดูดซับแอนติเจนที่อยู่บนเม็ดเลือดแดง) เพื่อจับกลุ่มกับแอนติบอดีที่คล้ายคลึงกันของซีรั่มภูมิคุ้มกัน เนื่องจากมีความอ่อนไหวและความจำเพาะทางอ้อมสูง ช.ใช้ในการวินิจฉัยโรคไวรัส แบคทีเรีย และโรคริคเก็ตเซียลหลายชนิด มีการปรับเปลี่ยนทางอ้อมหลายประการ ปฏิกิริยาการยับยั้ง ความล่าช้า การทำให้แอนติบอดีเป็นกลาง เป็นต้น ด้วยความช่วยเหลือของ RNGA และการดัดแปลงของมัน ทั้งแอนติบอดีในเลือดซีรั่มของสัตว์และมนุษย์ (โดยใช้เม็ดเลือดแดงที่ไวต่อแอนติเจนที่รู้จัก) และแอนติเจน (โดยใช้เม็ดเลือดแดงที่ไวต่อแอนติบอดีบางชนิด) สามารถตรวจพบได้ เซลล์เม็ดเลือดแดงที่ล้างแล้วจะใช้ในการทำปฏิกิริยาสัตว์ (ส่วนใหญ่มักเป็นเม็ดเลือดแดงของแกะและไก่) ความสามารถของเม็ดเลือดแดงในการดูดซับแอนติเจนโปรตีนโมเลกุลขนาดใหญ่จะเพิ่มขึ้นหลังจากการรักษาด้วยแทนนิน เพื่อเพิ่มอายุการเก็บของเซลล์เม็ดเลือดแดง พวกมันจะถูกเก็บรักษาไว้ด้วยฟอร์มาลดีไฮด์ การวินิจฉัยที่ได้รับจากเม็ดเลือดแดงที่เป็นทางการสามารถรักษากิจกรรมไว้ได้เป็นเวลานาน ด้วยความพร้อมในการวินิจฉัยเม็ดเลือดแดงสำเร็จรูป การกำหนดสูตรปฏิกิริยาจึงง่ายขึ้นอย่างมาก ในการปฏิบัติงานด้านสัตวแพทย์ RNGA ใช้เพื่อวินิจฉัยโรคสัตว์บางชนิด (ส่วนใหญ่เป็นไวรัส) โรคระบาดคลาสสิกนก โรคนิวคาสเซิล อีสุกอีใส ไข้หวัดม้า ไข้หวัดใหญ่สุกรและเป็ด โรคพูลโลโรซิส ไข้รากสาดใหญ่ในนก ฯลฯ ดูเพิ่มเติม

วรรณกรรม:
การวิจัยในห้องปฏิบัติการด้านสัตวแพทยศาสตร์, M. , 1971;
คู่มือวิธีวิจัยทางจุลชีววิทยาและไวรัสวิทยา, เอ็ด. M.O. Birger 2nd ed., M., 1973.

สัตวแพทย์ พจนานุกรมสารานุกรม- - อ.: "สารานุกรมโซเวียต". บรรณาธิการบริหาร วี.พี. ชิชคอฟ. 1981 .

คำพ้องความหมาย:

ดูว่า "HAEMAGGLUTINATION" ในพจนานุกรมอื่น ๆ คืออะไร:

การเกิดเม็ดเลือดแดง- การเกิดเม็ดเลือดแดง... หนังสืออ้างอิงพจนานุกรมการสะกดคำ

การเกิดเม็ดเลือดแดง- การอัดแน่นพจนานุกรมการรวมตัวกันของคำพ้องความหมายภาษารัสเซีย คำนาม hemagglutination จำนวนคำพ้องความหมาย: 2 agglutigation (3) ... พจนานุกรมคำพ้องความหมาย

ฮีแม็กกลูติเนชั่น- (จากการติดกาวฮีโม... และ lat. agglutinatio) การติดกาวและการตกตะกอนของเม็ดเลือดแดงที่แขวนลอยอยู่ในของเหลวภายใต้อิทธิพลของสารต่างๆ เช่น แอนติบอดี แบคทีเรีย หรือไวรัส ปฏิกิริยาฮีแม็กกลูติเนชันใช้สำหรับการวินิจฉัย... ... พจนานุกรมสารานุกรมขนาดใหญ่

การเกิดเม็ดเลือดแดง- กระบวนการติดกาวเซลล์เม็ดเลือดแดงเป็นมวลรวมที่มองเห็นได้ด้วยตาเปล่า G. เกิดจาก: 1) Abs ไปยังเม็ดเลือดแดงและ Ags เฮเทอโรฟิลิก; 2) แอนติเจนของแอนติเจนที่แปลกปลอมไปยังเม็ดเลือดแดงซึ่งถูกดูดซับบนพื้นผิว (ดูปฏิกิริยา Hemagglutination, พาสซีฟ); 3) ... พจนานุกรมจุลชีววิทยา

ฮีแม็กกลูติเนชั่น- HEMAGGLUTINATION การเกาะติดกัน (จับตัวเป็นก้อน) ของเซลล์เม็ดเลือดแดงเมื่อผสมกับซีรั่มที่คล้ายคลึงกัน หากเซลล์เม็ดเลือดแดงของมนุษย์ถูกแทนที่ด้วยซีรั่มจากบุคคลเดียวกัน เมื่อเขย่าจะได้สารแขวนลอยที่สม่ำเสมอ หากเม็ดเลือดแดงของคนๆ หนึ่ง… ... สารานุกรมการแพทย์ที่ยิ่งใหญ่

การเกิดเม็ดเลือดแดง- ปรากฏการณ์ที่เป็นรากฐานของวิธีการตรวจหาแอนติบอดี โดยอิงจากการเกาะติดกันของเม็ดเลือดแดงอันเป็นผลมาจากการจับกับแอนติเจนของเม็ดเลือดแดงเอง หรือกับแอนติเจนอื่น ๆ ที่ติดอยู่กับพื้นผิวของเม็ดเลือดแดงโดยไม่ได้ตั้งใจ.... ... คู่มือนักแปลทางเทคนิค- (heme + agglutination) การเกาะติดกันของเม็ดเลือดแดง ... พจนานุกรมทางการแพทย์ขนาดใหญ่

การเกิดเม็ดเลือดแดง- จากภาษากรีก haima blood และ lat. การติดกาวเกาะติดกัน) กระบวนการติดกาวและการตกตะกอนของเซลล์เม็ดเลือดแดงในภายหลัง เกิดจากฮีแม็กกลูตินิน (ดูฮีแม็กกลูตินิน) แบคทีเรีย และไวรัส สารที่สามารถดูดซับบน... ... สารานุกรมผู้ยิ่งใหญ่แห่งสหภาพโซเวียต

การเกิดเม็ดเลือดแดง- ติดกาว (เกาะติดกัน) ของเม็ดเลือดแดง มันพัฒนารวมถึงในระหว่างการถ่ายเลือดที่เข้ากันไม่ได้