Metode moderne de diagnosticare a infecției cu HIV. Utilizarea testului Combibest în diagnosticarea HIV La ce să vă așteptați de la rezultatele HIV

ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) a intrat în viață medicina practica altundeva în anii 60 ai secolului trecut. Sarcina lui inițială a fost studii histologiceîn scopuri științifice, care s-au redus la căutarea și identificarea structurii antigenice a celulelor unui organism viu.

Metoda ELISA se bazează pe interacțiunea antigenelor specifice (AT) și înrudite (AG) cu formarea unui complex antigen-anticorp, care este detectat folosind o enzimă. Acest fapt a condus oamenii de știință la ideea că metoda poate fi utilizată în scopuri de diagnostic pentru a identifica imunoglobuline specifice din diferite clase implicate în răspunsul imun la o anumită infecție. Și a fost o descoperire în diagnosticul clinic de laborator!

Metoda a început să fie utilizată în mod activ abia la începutul anilor 80, iar apoi în principal în instituții specializate. Primele analizoare ELISA au fost furnizate centrelor și stațiilor de transfuzii de sânge, spitalelor infecțioase și venerice, de când formidabilul SIDA, născut pe continentul african, a apărut la orizont alături de noi și s-a alăturat imediat infecțiilor „vechi”, a necesitat măsuri imediate de diagnosticare și căutând medicamente terapeutice care îl afectează.

Domeniul de aplicare al metodei ELISA

Posibilitățile imunotestelor enzimatice sunt cu adevărat extinse. Acum este greu de imaginat cum se poate face fără astfel de studii, care sunt folosite literalmente în toate ramurile medicinei. Se pare că ELISA poate face în oncologie? Se dovedește că se poate. Și multe. Capacitatea analizei de a găsi markeri specifici unor specii neoplasme maligne, sta la baza depistare precoce tumori, când în alt mod nu este încă determinată din cauza dimensiunilor reduse.

Diagnosticarea clinică modernă de laborator (CDL), pe lângă markerii tumorali, are un arsenal semnificativ de panouri pentru ELISA și le utilizează pentru a diagnostica diferite afecțiuni patologice (procese infecțioase, tulburări hormonale) și monitorizarea medicamentelor farmaceutice pentru a identifica efectul acestora asupra organismului pacientului și, de altfel, nu numai asupra omului. În prezent, imunotestul enzimatic este utilizat pe scară largă în serviciul veterinar, deoarece „frații noștri mai mici” sunt și ei sensibili la multe boli, de care, uneori, suferă foarte mult.

Prin urmare, ELISA, datorită sensibilității și specificității sale, poate determina dintr-o probă de sânge prelevată dintr-o venă:

  • Starea hormonală (hormoni glanda tiroidași glandele suprarenale, hormoni sexuali);
  • Prezența unui virus și infectie cu bacterii(HIV, B și C, chlamydia, sifilis și, precum și multe alte boli cauzate de microorganisme patogene);
  • Urme de activitate vitală a microorganismelor care au inițiat procesul infecțios, care s-a încheiat cu succes și a trecut la stadiul de formare a unui răspuns imun la acest agent patogen. Astfel de urme, adică anticorpi, în multe cazuri rămân în circulație în sânge pentru viață, ceea ce protejează o persoană de reinfectare.

Care este esența IF?

Metoda imunologică enzimatică face posibilă determinarea nu numai a prezenței agentului patogen în sine (analiza calitativă), ci și a conținutului său cantitativ în serul sanguin al pacientului.

Doza virală sau bacteriană afectează în mod semnificativ cursul procesului infecțios și, prin urmare, rezultatul acestuia analiza cantitativa nu ultimul rol in diagnosticul si tratamentul bolilor in diferite forme si etapele.

Cu toate acestea, cunoscând testele imunosorbente legate de enzime ca metodă ELISA, nici nu ne gândim cum reușește să acopere o gamă atât de largă de microorganisme care locuiesc pe planeta noastră, dintre care multe reprezintă o amenințare directă pentru sănătatea și viața oamenilor și animalelor. Cert este că ELISA are multe opțiuni (necompetitive și competitive - directe și indirecte), fiecare dintre ele își rezolvă propria problemă și, astfel, permite o căutare țintită.

Pentru detectarea imunoglobulinelor dintr-una sau alta clasă, se utilizează un panou tradițional de polistiren cu 96 de godeuri (tabletă), în godeurile cărora proteinele recombinante adsorbite sunt concentrate în fază solidă. Anticorpii sau antigenii care au intrat în godeul cu ser de sânge găsesc un obiect „familiar” și formează un complex cu acesta (AG - AT), care, fixat de conjugatul enzimatic, se va manifesta ca o schimbare a culorii sondei. la citirea rezultatelor.

Imunotestul enzimatic se efectuează pe sisteme de testare cu o anumită specificitate, realizate în laboratoare speciale și echipate cu toate componentele de reacție necesare. Studiile pot fi efectuate folosind șaibe („șaibe”) și spectrofotometre de citire, unde în majoritatea cazurilor implica munca manuala. Pe mașinile complet automate, eliberând asistentul de laborator de instilare monotonă, spălare și alte sarcini de rutină, desigur, este mai rapid și mai convenabil să lucrezi, dar nu toate laboratoarele își pot permite un astfel de lux și continuă să lucreze în mod vechi - pe dispozitive semiautomate.

Interpretarea rezultatelor ELISA este responsabilitatea medicului diagnostic de laborator, în timp ce proprietatea inerentă aproape tuturor reacțiilor imunochimice de a da răspunsuri fals-pozitive sau fals-negative este neapărat luată în considerare.

Video: imunotestul enzimatic modern

Rezultatele ELISA pe exemplul sifilisului

ELISA este potrivit pentru detectarea tuturor formelorși, în plus, este folosit în studiile de screening. Pentru utilizare de analiză sânge venos pacient luat pe stomacul gol. În lucrare se folosesc plăci cu o anumită specificitate (clase AT A, M, G) sau anticorpi totali.

Având în vedere că anticorpii din sifilis sunt produși într-o anumită secvență, ELISA poate răspunde cu ușurință la întrebarea când a apărut infecția și în ce stadiu se află procesul, iar decodificarea rezultatelor obținute poate fi prezentată în următoarea formă:

  • IgM indică durata procesului infecțios (poate apărea în timpul exacerbării bolilor inflamatorii cronice);
  • IgA afirmă că infecția a avut loc cu mai bine de o lună în urmă;
  • IgG indică faptul că infecția este în plină desfășurare sau tratament recent, care este ușor de aflat la colectarea anamnezei.

La testarea pentru sifilis, godeurile negative (și controlul negativ) vor rămâne incolore, în timp ce pozitivul (ca și controlul pozitiv) va prezenta o culoare galben strălucitor din cauza schimbării de culoare a cromogenului adăugat în timpul testului. Cu toate acestea, intensitatea culorii nu se potrivește întotdeauna cu controlul, adică poate fi puțin mai palid sau ușor gălbui. Acestea sunt rezultate îndoielnice, care, de regulă, sunt supuse reexaminării cu luarea în considerare obligatorie a indicatorilor cantitativi obținuți pe spectrofotometru, dar, în general, culoarea este direct proporțională cu numărul de complexe imune (antigeni și anticorpi legați). unul altuia).

Cele mai interesante dintre imunotestele enzimatice - ELISA pentru HIV

Analiza, poate mai mult decât altele, prezintă interes pentru o gamă largă de populație, deoarece încă nu se poate spune cu certitudine că multe probleme sociale(prostituție, dependență de droguri etc.). Din păcate, HIV afectează nu numai aceste secțiuni ale societății umane, te poți infecta în diferite circumstanțe care nu sunt legate de promiscuitatea sexuală sau consumul de droguri. Dar dacă este nevoie de un test HIV, atunci nu trebuie să vă fie teamă că toată lumea din jur va afla despre vizitarea unui astfel de laborator. Acum persoanele infectate cu HIV sunt protejate de lege, iar cei care au dubii pot apela la birouri anonime unde pot rezolva problema fara teama de publicitate si condamnare.

Imunotestul enzimatic utilizat pentru diagnosticarea infecției cu HIV este unul dintre testele standard primare, care, totuși, necesită conditii speciale deoarece subiectul este foarte sensibil.

Este logic să se efectueze ELISA pentru HIV după contact sexual, transfuzie de sânge, alte proceduri medicale care implică infecție și la sfârșitul perioadei de incubație („fereastră seronegativă”), dar trebuie avut în vedere că această perioadă de timp. nu este constantă. Se poate termina în 14-30 de zile, sau poate dura până la șase luni, astfel încât valoarea medie este considerată a fi un interval de la 45 la 90 de zile. Pe Sânge HIV trec în același mod ca și pentru alte infecții - dintr-o venă pe stomacul gol. Rezultatele vor fi gata în funcție de acumularea de material în laborator și volumul de lucru al acestuia (de la 2 la 10 zile), deși majoritatea laboratoarelor oferă un răspuns în aceeași zi sau în următoarea.

La ce se poate aștepta de la rezultatele HIV?

ELISA pentru infecția cu HIV detectează anticorpi la două tipuri de virus: HIV-1 (mai frecvent în Rusia și alte țări europene și asiatice) și HIV-2 (mai frecvent în Africa de Vest).

Sarcina HIV ELISA este de a căuta anticorpi de clasă G, care sunt detectați pe toate sistemele de testare, dar într-o perioadă ulterioară, și anticorpi de clasă A și M, detectați pe truse de testare recombinate de nouă generație, care fac posibilă detectarea anticorpilor pe cel mai primele etape (perioadă incubație– fereastra seronegativă). Următoarele răspunsuri pot fi de așteptat de la ELISA:

  1. Rezultat primar pozitiv: sângele este supus reverificării pe un sistem de testare de același tip, dar, dacă este posibil, de altă serie și de către o altă persoană (asistent de laborator);
  2. Repetă (+) sugerează gard nou sânge la un pacient cu un studiu al acestuia ca o analiză primară;
  3. Următorul rezultat pozitiv este supus unei analize de referință, care utilizează truse de testare foarte specifice (2-3 buc.);
  4. Un rezultat pozitiv în ambele (sau trei) sisteme este trimis pentru imunobblotare (același ELISA, dar efectuat în individual pe truse de testare cu specificitate deosebit de mare).

Concluzia despre infecția cu HIV se face numai pe baza imunoblotării. Se poartă o conversație cu persoana infectată în deplină confidențialitate. Dezvăluirea secretelor medicale în Rusia, precum și în alte țări, este supusă pedepsei penale.

Analizele pentru chlamydia și citomegalovirus prin imunotest enzimatic au câștigat, de asemenea, o popularitate deosebită, datorită faptului că vă permit să determinați momentul infecției, stadiul bolii și eficacitatea măsurilor terapeutice.

În timpul introducerii, este posibil să se observe și apariția anticorpilor de diferite clase.în diferite faze ale unei stări patologice cauzate de un agent infecțios:

  • IgM poate fi detectată încă de la șapte zile după infecție;
  • IgA indică faptul că infecția trăiește în organism de mai mult de o lună;
  • IgG confirmă diagnosticul de chlamydia, ajută la monitorizarea tratamentului și la determinarea eficacității acestuia. Trebuie remarcat faptul că anticorpii de clasa G rămân și circulă în organism indiferent de durata bolii, prin urmare, pentru interpretarea corectă a analizei trebuie luate în considerare valorile de referință​​​(normele) care, prin modul, sunt diferite pentru fiecare CDL: ținând cont de marca sistemului de testare și de specificul reactivilor incluși în set. Valorile standard sunt introduse în formularul de lângă rezultatul ELISA.

Cât despre, aici este puțin diferit: anticorpii de clasa M apar după aproximativ o lună și jumătate, adică un rezultat pozitiv (IgM +) devine în faza infecției primare sau în timpul reactivării infecție latentăși rămâne așa de la 4 luni la șase luni.

Prezența anticorpilor de clasa G este caracteristică pentru debutul primar infecție acută sau reinfectare. Analiza arată că virusul este prezent, dar nu oferă informații despre stadiul procesului infecțios. Între timp, determinarea normei titrului IgG cauzează, de asemenea, dificultăți, deoarece depinde în întregime de starea imunitară persoană anume, care însă se stabilește prin detectarea imunoglobulinelor de clasa G. Având în vedere acest comportament al anticorpilor, la diagnosticarea CMVI, devine necesară evaluarea capacității anticorpilor de clasa G de a interacționa cu CMV pentru a-l „neutraliza” apoi (AT aviditate). Pe stadiul inițial Bolile IgG se leagă foarte slab la antigenele virusului (aviditate scăzută) și abia apoi încep să manifeste activitate, prin urmare, putem vorbi despre o creștere a avidității anticorpilor.

Despre avantajele imunotestului enzimatic putem vorbi mult timp, deoarece această metodă a reușit să rezolve multe probleme de diagnostic folosind doar sânge venos. Nu este nevoie de lungi așteptări, griji și probleme cu luarea materialului pentru cercetare. În plus, sistemele de testare pentru ELISA continuă să se îmbunătățească, iar ziua în care testul va oferi o fiabilitate de 100% a rezultatului nu este departe.

Video: film educațional al Universității Medicale de Stat din Moscova. Sechenov despre elementele de bază ale ELISA


Proprietarii brevetului RU 2283497:

Invenția se referă la domeniul biotehnologiei și medicinei. Sistemul de testare imunoenzimatică pentru identificarea spectrului de anticorpi împotriva virusului imunodeficienței umane (HIV) de primul și al doilea tip, primul tip de grup O și detectarea antigenului pentru virusul imunodeficienței umane de primul tip p24 include un imunosorbant pe bază de pe antigenele virusului imunodeficienței umane reprezentând gp41 (env HIV-1 și HIV-2 grupa O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), anticorpi la antigenul HIV 1 p24 , și reactivi de detecție, în timp ce antigenii HIV și anticorpii HIV de mai sus sunt absorbiți în diferite godeuri de plăci pentru imunotestul enzimatic, iar plăci de polistiren cu 96 de godeuri pliabile sau neretractabile sunt utilizate pentru sorbție. Invenția asigură o sensibilitate sporită, simplificare, excluderea subiectivității evaluării rezultatelor. 1 z.p. f-ly, 10 tab., 1 ill.

Invenția se referă la domeniul biotehnologiei și medicinei. Utilizare: detectarea diferențiată a tuturor claselor de anticorpi specifici la proteinele virusului imunodeficienței umane 1 și 2, HIV 1 grup O și antigen HIV 1 p24.

Esență: obținerea unui sistem de testare imunoenzimatică pentru identificarea spectrului de anticorpi de toate clasele la proteine ​​individuale și HIV 1 și 2, HIV 1 grup O și HIV 1 p24 antigen în serul sanguin (plasmă), imunoglobulinele și produsele din sânge în vederea identificării spectrul de anticorpi la HIV 1 și 2, HIV 1 grup O, detectarea antigenului HIV 1 p24 și confirmarea rezultatelor de screening pozitive sau nedeterminate pentru anticorpii HIV 1 și 2, HIV 1 grup O și antigen HIV 1 p24.

DESCRIEREA INVENŢIEI

Diagnosticul de laborator al infecției cu HIV se bazează pe trei domenii: a) indicarea HIV și a componentelor acestuia; b) detectarea anticorpilor la HIV; c) determinarea modificărilor sistemului imunitar. Printre metode existente diagnostic de laborator cel mai frecvent serologic - detectarea anticorpilor la antigenele virusului.

Pentru a detecta anticorpii în infecția cu HIV, testul imunosorbent legat de enzime (ELISA) și imunoblotting (IB) sunt utilizate în principal. ELISA se bazează pe imobilizarea antigenelor virale pe plăci, care leagă anticorpii pacientului, iar complexul antigen-anticorp este detectat folosind anticorpi monoclonali de șoarece conjugați cu peroxidază de hrean la imunoglobulinele umane G și M. Metoda este destul de specifică și sensibilă și permite detectarea anticorpilor specifici virusului la 95% dintre pacienți. Restul de 5% din cazuri apar în stadiile incipiente ale infecției, când sunt încă puțini anticorpi în serul sanguin, sau în fazele terminale ale bolii, când organismul nu mai este capabil să sintetizeze anticorpi din cauza unei epuizări accentuate. sistem imunitar. Rezultatele ELISA fals pozitive sunt, de asemenea, posibile, în principal la pacienții cu boli autoimune și oncologice, precum și la infecțiile cauzate de virusul Eshptein-Barr. În acest caz, apare o reacție încrucișată a anticorpilor la factorul reumatoid, Virusul Epstein-Barr sau la determinanții antigenici care sunt similari cu proteinele complexului major de histocompatibilitate clasa 1 și 2 (HLA-4 și DQW3) și au capacitatea de a se lega de antigenele HIV. Rezultate fals pozitive sunt adesea observate la femeile însărcinate și la vârstnici. Hemoliza, lipemia, contaminarea bacteriană a serurilor pot fi, de asemenea, cauza unor rezultate nesigure.

În acest sens, au fost propuse și utilizate o serie de metode pentru a testa specificitatea rezultatelor detectării anticorpilor. Dintre aceste metode, cea mai frecvent utilizată reacție este „immune blot” în modificarea „Western Blot”. Esența metodei este următoarea: în prima etapă, proteinele HIV sunt separate în funcție de greutatea moleculară folosind electroforeza pe gel de poliacrilamidă. Apoi se efectuează transferul electroforetic de la gelul de poliacrilamidă la suprafață. membrana de nitroceluloza. Antigenii transferați în acest mod sunt detectați pe membrană prin analiză indirectă: membrana este incubată cu materialul de testat; anticorpii conținuti se leagă de antigenele HIV transferate pe o membrană de nitroceluloză, apoi benzile de membrană sunt incubate cu conjugatul; când se formează un complex antigen-anticorp, conjugatul se atașează de acesta, după spălarea din conjugat și incubarea cu substratul, are loc colorarea acelor secțiuni de nitroceluloză acolo unde are loc formarea complexului antigen-anticorp-conjugat. Desenul prezintă exemple de rezultate pozitive, slab pozitive și negative ale imunoblot.

În serul persoanelor infectate cu HIV-1 și HIV-2, se găsesc anticorpi la următoarele proteine ​​(p) și glicoproteine ​​(gp): Tabel A.

Tabelul B prezintă criteriile de evaluare a rezultatelor blotting imun recomandat de OMS și Centrul Rus pentru Prevenirea și Controlul SIDA.

Pe baza criteriilor OMS, serurile sunt considerate pozitive dacă anticorpii la oricare două proteine ​​ale anvelopei HIV-1 sunt detectați prin metoda IB. Dacă există o reacție doar cu una dintre proteinele învelișului (gp160, gp120, gp41), în combinație cu o reacție cu alte proteine ​​sau fără aceasta, rezultatul este considerat îndoielnic. Potrivit Centrului Federal Științific și Metodologic al Ministerului Sănătății al Federației Ruse pentru Prevenirea și Controlul SIDA, este posibil să se interpreteze serurile ca pozitive chiar și în prezența anticorpilor la o singură proteină de acoperire.

Detectarea anticorpilor la antigenul p24 poate indica perioada de debut a seroconversiei, deoarece anticorpii la această proteină apar primii. Reacțiile pozitive cu proteinele gag și pol fără o reacție cu proteinele env pot reflecta stadiul de seroconversie timpurie, precum și indica prezența infecției cu HIV-2 sau o reacție nespecifică.

Utilizarea imunoblotării ca metodă expertă pentru diagnosticarea HIV are o serie de dezavantaje semnificative:

1. Imposibilitatea confirmării depistarii antigenului p24 al HIV 1 în cazul utilizării testelor care determină simultan antigenul și anticorpii HIV, ceea ce face inadecvată (fără sens) utilizarea testelor de screening pentru depistarea simultană a antigenului și a anticorpilor. la HIV (Ordinul Ministerului Sănătății al Federației Ruse nr. 292 din 30.07.2001: „pentru a examina donatorii în stațiile de transfuzie de sânge, este necesar să se utilizeze sisteme de testare care detectează atât antigenul, cât și anticorpii HIV”).

2. Detectarea anticorpilor numai din clasa IgG. Este imposibil să se confirme pe deplin rezultatele pozitive obținute folosind teste de generația a 3-a și a 4-a (revelând anticorpi IgGși IgM).

3. Subiectivitatea interpretării punctajului testului, mai ales în cazurile de rezultate „dubioase” și „nedeterminate” și în etapele inițiale seroconversie (benzile detectabile de pe membranele de nitroceluloză în aceste cazuri sunt neclare, abia vizibile cu ochiul liber și atunci când se evaluează persoane diferite sunt adesea dezacorduri).

4. Imposibilitatea automatizării cuantificare rezultatele analizei.

5. Sensibilitate mai mică comparativ cu ELISA.

6. Fragilitatea depozitării (în timpul depozitării, benzile de membrană de nitroceluloză se estompează și nu pot constitui o confirmare obiectivă a detectării sau nedetecției HIV în cazuri controversate).

7. Dificultate în stabilirea reacției și depozitării (benzile de membrană de nitroceluloză sunt foarte fragile și se sparg adesea).

8. Costul ridicat al truselor IS.

Reactiv cunoscut, care este un kit pentru determinarea simultană a antigenelor și anticorpilor la același agent patogen, inclusiv HIV (DE 4236189 F1, 28.04.1994). Cu toate acestea, nu este dezvăluit un sistem de testare care să permită diagnosticarea infecției cu HIV în diferite stadii.

Obiectivul prezentei invenții este de a obține un sistem de testare prin care să fie posibilă confirmarea rezultatelor pozitive sau îndoielnice ale testelor de screening pentru anticorpi la HIV 1 și 2, HIV 1 grup O și HIV 1 p24 antigen folosind teste pentru detectarea simultană a antigene și anticorpi.

Propus solutie tehnica se realizează printr-un sistem de testare imunoenzimatică pentru identificarea spectrului de anticorpi împotriva virusului imunodeficienței umane (HIV) de primul și al doilea tip, primul tip de grup O și detectarea antigenului p24 la virusul imunodeficienței umane din primul tip p24, caracterizat prin aceea că include un imunosorbant pe bază de antigene ai virusului imunodeficienței umane, reprezentând gp41 (env HIV-1 și HIV-2 grupa O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), anticorpi la antigenul HIV 1 p24 și reactivi de detecție, în timp ce antigenii HIV și anticorpii HIV de mai sus sunt adsorbiți în diferite godeuri de plăci pentru imunotestul enzimatic.

În plus, pentru sorbție sunt utilizate plăci de polistiren cu 96 de godeuri pliabile sau nepliabile pentru imunotestul enzimatic.

Rezultatul tehnic obținut prin prezenta invenție este posibilitatea confirmării rezultatelor pozitive pentru anticorpii HIV 1 și 2, HIV 1 grup O și HIV 1 antigen p24, sensibilitate ridicată, posibilitatea interpretării automate a rezultatelor, ceea ce elimină subiectivitatea evaluarea, ușurința efectuării testului, mai puțin decât cu seturile IS de cost existente.

Această soluție tehnică diferă de cele cunoscute:

1. Utilizați ca placă purtătoare în fază solidă pentru reacții imunologice.

2. Utilizarea simultană a anticorpilor la p 24 HIV și a unui set de antigene HIV ca absorbant.

Invenţia este ilustrată prin următorul exemplu.

Principiul activ al sistemului de testare dezvoltat „DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + AG p24 HIV 1” sunt:

Imunosorbent - antigene recombinante similare cu proteinele structurale HIV-1: gp41 (env HIV-1 si HIV 1 grupa O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), HIV-2: gp36 (env) si monoclonal anticorpi de șoarece la antigenul HIV 1(p24) adsorbiți separat pe benzi dintr-o placă pliabilă din polistiren.

Pentru prepararea utilizării imunosorbente:

1. HIV-1 gp41 este o proteină produsă de tulpina E. Coli nr. AHIV 103.

2. HIV-1 gp120 este o proteină produsă de tulpina E. Coli nr. AHIV 109.

3. HIV-1 p24 - proteină produsă de tulpina E. Coli nr. AHIV 105.

4. HIV-1 p31 - proteină produsă de tulpina E. Coli nr. AHIV 108.

5. HIV-2 p36 - proteină produsă de tulpina E. Coli nr. AHIV 106.

Conjugat 1, liofilizat sau lichid, anticorpi monoclonali de șoarece la antigenul HIV1 p24, conjugați cu biotină.

1. Conjugați 2, liofilizat sau lichid, un amestec de antigene recombinante similare cu proteinele structurale ale HIV-1: gp41 (env HIV-1 și HIV 1 grupa O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (po1). ); HIV-2: gp36 (env) conjugat cu biotină;

2. Conjugatele 3, 4 - liofilizate sau lichide - streptavidină marcată cu peroxidază de hrean;

În cursul studiilor preliminare, s-a ales proiectarea sistemului de testare, s-a elaborat tehnologia de preparare a componentelor acestuia și s-au optimizat condițiile pentru efectuarea imunotestului enzimatic.

La instalarea ELISA în sistemul de testare „DS - ELISA - ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + Ag p24 HIV 1”, se adaugă 25 μl de conjugat-1 în godeurile plăcii cu anticorpi adsorbiți la p24 și în godeurile cu antigene adsorbite - 25 µl conjugat-2. Schema de reacție este prezentată mai jos. Apoi, în fiecare godeu se adaugă 25 μl de probă de testat. Totodată, în godeurile cu antigeni culoarea se schimbă de la portocaliu la roz, iar în godeul cu anticorpi, de la verde la gri. Amestecul este incubat timp de 45 de minute la 37°C pe un agitator (sau 1 oră la 37°C într-un termostat). Apoi, fără spălare, se adaugă 50 μl de conjugat-3 în godeurile tabletei pentru determinarea antigenului p24 și 50 μl de conjugat-4 se adaugă în godeurile pentru determinarea anticorpilor. După incubare timp de 20 min la 37°C pe un agitator (sau 30 min la 37°C într-un termostat), placa este spălată și dezvoltată cu amestecul de substrat. Timp total de reacție 1 oră 25 minute (sau 1 oră 50 minute). Antigenul p24 prezent în proba de testat se leagă de anticorpi monoclonali la p24, iar anticorpii specifici formează un complex cu antigeni recombinanți de pe placă. Complexul imun anti-p24 cu p24 rezultat este detectat cu conjugați anti-p24-biotină, apoi cu streptavidin-peroxidază, iar complexele imune Ag-HIV cu At-HIV sunt detectate cu conjugatul Ag-biotină, apoi cu streptavidin-peroxidază. .

Schema de stabilire a reacției.

Contabilitatea rezultatelor se efectuează spectrofotometric la două lungimi de undă: 450/620-680 nm cu instrumentul setat la „aer”. Să luăm în considerare rezultatele la o lungime de undă de 450 nm.

Rezultatele analizei sunt luate în considerare dacă valorile medii ale densității optice (OD) în godeurile cu K- nu sunt mai mari de 0,2, în godeurile cu K+ - nu mai puțin de 1,0. OP crit. calculat prin formula:

OP crit. gp41 = cf. valoare OP K-(gp41)+0,15

OP crit. gp120 = cf. valoare OP K-(gp120)+0,15

OP crit. p24 = cf. valoare OP K-(р24)+0,15

OP crit. p31 = cf. valoare OP K-(р31)+0,15

OP crit. gp36 = cf. valoare OP K-(gp36)+0,15

OP crit. Ag p24 = cf. valoare OD la- (Ag p24)+0,04

unde 0,15 și 0,04 sunt coeficienți stabiliți prin metoda de prelucrare statistică la producător. În procesul de dezvoltare a sistemului de testare s-au folosit următoarele:

1. Probe de ser de sânge de la donatori sănătoși (n=610).

2. Probe de ser de sânge de la pacienți cu diverse boli infecțioase nu este asociat cu HIV (IRA, pneumonie, amigdalită, herpetică și infecție cu citomegalovirus, sifilis, chlamydia, hepatită virală A, B și C (n=224)).

3. Probe de ser de sânge de la pacienți cu diverse boli necontagioase- leziuni, boli a sistemului cardio-vascular, oncologie (n=35).

4. Probele de ser de sânge ale femeilor însărcinate (n=40).

5. Probe de ser de sânge, seropozitive în ELISA și confirmate în imunoblot (n=428).

6. Probe de ser cu rezultat pozitiv obținut în sistemele de testare imunoenzimatică pentru determinarea simultană a anticorpilor HIV 1,2 și a antigenului p24 și rezultat nedeterminat de imunoblot (n=123).

7. Panoul intern de seruri care conțin și nu conțin anticorpi la HIV 1.2, testate pe imunotestele enzimatice înregistrate de Ministerul Sănătății al Federației Ruse și imunoblot (n=21).

8. Standard „STANDARD ANTIGEN HIV 1”, „BIO RAD”, Franța, cat. Nr. 72217, care este un antigen obţinut dintr-un lizat viral.

9. Standardul intern al întreprinderii. O probă care conține antigen p 24 la o concentrație de 200 pg/ml, obținută dintr-un lizat viral și titrată conform „HIV 1 ANTIGEN STANDARD” companie „BIO RAD”, Franța, cat. Nr. 72217.

10. Panou standard de seruri care conțin anticorpi la virusul imunodeficienței umane de primul tip (HIV 1) - OSO 42-28-212-93-02P, Uniunea Medico-Biologică, Novosibirsk.

11. Panou standard de seruri care conțin anticorpi la virusul imunodeficienței umane de al doilea tip (HIV 2) - OSO-42-28-216-02P, Uniunea Medico-Biologică, Novosibirsk.

12. Panou standard de seruri care nu conțin anticorpi împotriva virusului imunodeficienței umane de primul tip și de al doilea (HIV 1, 2) - OSO-42-28-214-94-02P, Uniunea Medico-Biologică, Novosibirsk.

Evaluarea sensibilității sistemului de testare pentru detectarea antigenului p24 a fost efectuată folosind Standardul „HIV I ANTIGEN STANDARD”, „BIO RAD”, Standardul Intern al întreprinderii. Folosind Standardul Intern, s-au preparat 4 diluții consecutive de 2 ori de la 40 pg/mL la 5 pg/mL cu plasmă normală de la donator fără anticorpi la HIV 1, 2 ca diluant. Cea mai mică cantitate de antigen detectabil a fost luată ca criteriu de sensibilitate. Datele obținute sunt prezentate în tabelul 1.

Pentru a evalua sensibilitatea sistemului de testare pentru detectarea anticorpilor specifici, s-au folosit panouri standard de probe care conțin anticorpi împotriva virusului imunodeficienței umane (HIV 1, 2) (OSO 42-28-212-93-02P p.012, OSO). 42-28-216- 02P (HIV 2) p.003).

Datele obținute sunt prezentate în tabelele 3, 4.


Eficiența de diagnosticare a sistemului de testare „DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1” a fost comparată cu sistemele de testare „Jenscrin-HIV-Ag/Am” (Bio-Rad), „DIA-HIV 1/2" (Diaprof-Med), "Vironostics of HIV Uniform II Ag/Am" (Biomerioux), "Recombinant-HIV1.2 DSM" (MBS), "Amercard Anti-HIV-1.2 K" (Amercard) , " HIV-1, HIV-2-ELISA-Avicenna" (Avicenna). În acest scop, probele de ser din panoul interior au fost testate în toate testele indicate. Rezultatele prezentate în Tabelul 5 indică eficiența diagnostică ridicată a „DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1”.

Studiile de sensibilitate ale sistemului de testare „DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1” au fost efectuate și cu serurile de sânge ale pacienților confirmați în imunoblot ca HIV pozitivi. Au fost testate un total de 428 de probe din aceste seruri. Au fost obținute mai multe opțiuni pentru detectarea anticorpilor la diferite proteine ​​HIV și antigen p24. Rezultatele sunt prezentate în tabelul 6.

Tabelul 6

Rezultatele detectării anticorpilor la diferite proteine ​​HIV 1 și antigen p24 la testarea serurilor HIV 1 pozitive (n=428)

% detecțieProfilul proteic
anti-gr41anti-gr120anti-r24anti-r31p24
51,1% + + + + -
35,3% + - + + -
4% + - + - -
3,3% + - - + -
1,4% + - - + +
1,2% + + + + +
1,2% + + - + +
0,9% + - + + +
0,7% + - + - +
0,5% + - - - +
0,2% + + - - +
0,2% + + - - -
% detectarea anticorpilor la proteine ​​individuale sau Ag p24100% 53,9% 93,2% 94,4% 6,1%

La testarea probelor HIV 1 pozitive, 3% din seruri au arătat reacție pozitivă cu gp36 (env HIV 2). MP/OPcrit în aceste probe nu a depăşit 2,0. Datele noastre privind reactivitatea încrucișată a proteinelor învelișului extern ale HIV 1 (gp41) și HIV 2 (gp36) sunt în concordanță cu datele din literatură.

Interpretarea rezultatelor

Analiza testării serurilor HIV pozitive și a probelor din panourile standard și interne în „DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1” a făcut posibilă elaborarea criteriilor de interpretare a rezultatelor acestui test. Criteriile recomandate sunt prezentate în Tabelul 7.

Pe baza acestor criterii, toate probele de ser HIV pozitive (n=428) au fost identificate ca pozitive în „DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV1”. Din cele 16 probe din panoul standard care conține anticorpi la HIV 1, 14 au fost determinate ca pozitive și 2 ca nedeterminate. Toate cele 8 probe din panoul standard care conţin anticorpi la HIV 2 au fost determinate a fi pozitive. Din cele 10 probe din panoul interior care conțin anticorpi la HIV 1, 7 au fost identificate ca pozitive și 3 ca nedeterminate.

Studiile de sensibilitate ale sistemului de testare „DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1” au fost efectuate și cu seruri de sânge ale pacienților cu rezultat pozitiv în sistemele de testare imunoenzimatică care detectează simultan anticorpii și antigenul p24, și nedeterminată în imunoblot . Au fost testate un total de 123 de astfel de probe. Datele sunt prezentate în tabelul 8.



La testarea serurilor cu un rezultat de imunoblot nedeterminat (n=123) în „DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1”, 72 de probe (58,5%) au arătat un rezultat pozitiv. Dintre acestea, 26 de seruri (21,1%) sunt pozitive numai pentru p24, 20 (16,3%) - numai pentru anticorpi, 16 (13%) - pentru p24 cu anticorpi la una dintre proteine, 10 (8,1%) - pe p24 cu anticorpi la două sau mai multe dintre proteine. Astfel, testarea numai pentru anticorpi (fără detectarea p24) ar duce la 30 de probe (24,4%) pozitive. Detectarea antigenului p24 în test a făcut posibilă determinarea a 42 de probe suplimentare (34,1%) ca pozitive.

Pentru a evalua specificitatea sistemului de testare, a fost utilizat un panou standard de seruri care nu conţine anticorpi la HIV 1, 2 (n=20); probe de ser de sânge de la donatori sănătoși (n=610), probe de ser de sânge de la pacienți cu diferite boli infecțioase (n=224) neasociate cu HIV; probe de ser sanguin de la pacienti cu diverse boli netransmisibile - leziuni, afectiuni ale sistemului cardiovascular, oncologie (n=35); probe de ser sanguin de la femei gravide (n=40). Au fost testate un total de 929 de probe. O probă din serurile de sânge ale donatorilor sănătoși a arătat un rezultat fals pozitiv - au fost detectați anticorpi la gp41 și p24. 7 probe de ser de sânge de la donatori sănătoși și 2 probe de ser de sânge de la pacienți cu boli infecțioase neasociate cu HIV au arătat un rezultat fals pozitiv pentru p24.

Pentru a evalua specificitatea sistemului de testare, a fost utilizat un panou standard de probe negative (OSO 42-28-214-94-02p, p. 009). Specificitatea a fost de 100%.

Astfel, studiile efectuate au arătat că specificitatea sistemului de testare „DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1” este de 99% în studiul probelor de ser sanguin de la donatori normali și la pacienți cu diferite infecții. și boli somatice.

Datele obținute arată eficiența diagnostică ridicată a sistemului de testare dezvoltat „DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1”. Sistemul de testare poate fi utilizat pentru a detecta anticorpi la proteinele individuale ale HIV tip 1 și 2 și antigenul HIV1 p24 pentru a confirma un rezultat pozitiv al screening-ului cu sisteme de testare care detectează anticorpi sau sisteme de testare care detectează simultan anticorpii și antigenul HIV1 p24. Sistemul de testare poate fi utilizat ca un test alternativ de imunoblot pentru a confirma rezultatele pozitive, precum și pentru a studia dinamica anticorpilor la HIV și a antigenului p24 pentru diferite etape infectii.

BENEFICIILE TESTULUI

1. Formatul plăcii de confirmare a imunotestului enzimatic

2. Test de confirmare care combină spectrul de anticorpi HIV 1, 2 și antigenul HIV 1 p24

3. Detectarea anticorpilor din toate clasele de Ig

4. Sensibilitatea pentru detectarea p24 nu este mai mică de 5 pg/ml

5. Reduce rezultatele nedeterminate comparativ cu imunoblot

6. Timp de analiză - 1 oră 25 de minute (imunoblot - de la 3 la 20 de ore)

7. Evaluarea vizuală a introducerii tuturor componentelor și probelor.

1. Sistem de testare ELISA pentru identificarea spectrului de anticorpi la virusul imunodeficienței umane (HIV) de primul și al doilea tip, primul tip de grup O și detectarea antigenului p24 la virusul imunodeficienței umane de primul tip p24, caracterizat prin aceea că include un imunosorbant bazat pe antigenele virusului imunodeficienței gp41 (env HIV-1 și HIV-2 grupa O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), anticorpi la antigenul HIV 1 p24 și reactivii de detectare, în timp ce antigenele HIV de mai sus și anticorpii HIV sunt adsorbiți în diferite godeuri ale plăcilor pentru imunotestul enzimatic.

2. Sistem de testare ELISA conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că, pentru sorbţie, se folosesc plăci de polistiren pliabile sau nepliabile cu 96 de godeuri pentru imunotestul enzimatic.

Diagnosticul în timp util al infecției cu HIV devine o măsură extrem de importantă, deoarece tratamentul precoce poate determina în mare măsură dezvoltare ulterioară boli și prelungesc viața pacientului. ÎN anul trecut S-au făcut progrese semnificative în identificarea acestui lucru boală cumplită: vechile sisteme de testare sunt înlocuite cu altele mai avansate, metodele de examinare devin din ce în ce mai accesibile, iar acuratețea lor este semnificativ crescută.

În acest articol, vom vorbi despre metode moderne de diagnosticare a infecției cu HIV, care sunt utile de cunoscut pentru tratarea în timp util a acestei probleme și menținerea calității normale a vieții pacientului.

Metode de diagnosticare a HIV

În Rusia, pentru diagnosticarea infecției cu HIV, se efectuează o procedură standard, care include două niveluri:

  • Sistem de testare ELISA (analiza screening);
  • blotting imun (IB).

Se pot utiliza și alte metode de diagnostic:

  • teste exprese.

Sisteme de testare ELISA

În prima etapă a diagnosticului, un test de screening (ELISA) este utilizat pentru a detecta infecția cu HIV, care se bazează pe proteinele HIV create în laboratoare care captează anticorpi specifici produși în organism ca răspuns la infecție. După interacțiunea lor cu reactivii (enzimele) sistemului de testare, culoarea indicatorului se schimbă. În plus, aceste schimbări de culoare sunt procesate pe echipamente speciale, care determină rezultatul analizei efectuate.

Astfel de teste ELISA sunt capabile să arate rezultate în câteva săptămâni după introducerea infecției cu HIV. Această analiză nu determină prezența virusului, ci detectează producția de anticorpi împotriva acestuia. Uneori, în corpul uman, producția de anticorpi împotriva HIV începe după 2 săptămâni de la infecție, dar la majoritatea oamenilor aceștia sunt produși pentru mai mult de date ulterioare dupa 3-6 saptamani.

Există patru generații de teste ELISA cu sensibilități diferite. În ultimii ani s-au folosit mai frecvent sistemele de testare din generația III și IV, care se bazează pe peptide sintetice sau proteine ​​recombinate și au o specificitate și o acuratețe mai mare. Acestea pot fi utilizate pentru a diagnostica infecția cu HIV, pentru a monitoriza prevalența HIV și pentru a asigura siguranța la testarea sângelui donat. Precizia sistemelor de testare ELISA din generațiile III și IV este de 93-99% (testele mai sensibile sunt produse în țări Europa de Vest – 99%).

Pentru a efectua un test ELISA, se prelevează 5 ml de sânge din vena pacientului. Între ultima masă și analiză trebuie să fie cel puțin 8 ore (de regulă, se efectuează dimineața pe stomacul gol). Se recomandă ca un astfel de test să fie efectuat nu mai devreme de 3 săptămâni după presupusa infecție (de exemplu, după contactul sexual neprotejat cu un nou partener sexual).

Rezultatele testului ELISA se obțin după 2-10 zile:

  • rezultat negativ: indică absența infecției cu HIV și nu necesită trimitere la un specialist;
  • rezultat fals-negativ: poate fi observat în stadiile incipiente ale infecției (până la 3 săptămâni), în stadiile ulterioare ale SIDA cu supresie imună severă și cu prepararea necorespunzătoare a sângelui;
  • rezultat fals pozitiv: se poate observa în unele boli și în caz de pregătire necorespunzătoare a sângelui;
  • rezultat pozitiv: indică infecția cu HIV, necesită un IB și trimiterea pacientului la un specialist într-un centru SIDA.

De ce poate un test ELISA să dea rezultate fals pozitive?

Rezultatele fals pozitive ale unui test ELISA pentru HIV pot fi observate în cazul procesării necorespunzătoare a sângelui sau la pacienții cu astfel de afecțiuni și boli:

  • mielom multiplu;
  • boli infecțioase provocate de virusul Epstein-Barr;
  • stare dupa ;
  • boală autoimună;
  • pe fundalul sarcinii;
  • starea după vaccinare.

Din motivele descrise mai sus, anticorpii nespecifici cu reacție încrucișată pot fi prezenți în sânge, a căror producție nu a fost provocată de infecția cu HIV.

În ultimii ani, frecvența rezultatelor fals pozitive a scăzut semnificativ datorită utilizării sistemelor de testare de generația III și IV, care conțin peptide și proteine ​​recombinante mai sensibile (sunt sintetizate folosind inginerie genetică in vitro). După utilizarea unor astfel de teste ELISA, frecvența rezultatelor fals pozitive a scăzut semnificativ și este de aproximativ 0,02-0,5%.

Un rezultat fals pozitiv nu înseamnă că o persoană este infectată cu HIV. În astfel de cazuri, OMS recomandă un alt test ELISA (generația IV obligatorie).

Sângele pacientului este trimis la un laborator de referință sau de arbitraj marcat „repeat” și testat pe un sistem de testare ELISA de generația IV. Dacă rezultatul noii analize este negativ, atunci primul rezultat este recunoscut ca fiind eronat (fals pozitiv) și IB nu este efectuat. Dacă rezultatul este pozitiv sau îndoielnic în timpul celui de-al doilea test, pacientul trebuie să fie supus IB în 4-6 săptămâni pentru a confirma sau infirma infecția cu HIV.

blotting imun

Un diagnostic definitiv al infecției cu HIV poate fi pus doar după obținerea unui rezultat pozitiv de blotting imun (IB). Pentru implementarea sa se folosește o bandă de nitroceluloză, pe care se aplică proteine ​​virale.

Prelevarea de sânge pentru IB se efectuează dintr-o venă. Apoi este supus unui tratament special și proteinele conținute în serul său sunt separate într-un gel special în funcție de sarcina și greutatea moleculară a acestora (manipularea se efectuează pe echipamente speciale sub influența câmp electric). Pe gelul de ser sanguin se aplică o bandă de nitroceluloză și se efectuează blotting („blotting”) într-o cameră specială. Banda este prelucrată și dacă materialele folosite conțin anticorpi împotriva HIV, aceștia se leagă de benzile antigenice de pe IB și apar ca linii.

IB este considerat pozitiv dacă:

  • conform criteriilor americane CDC - există două sau trei linii gp41, p24, gp120 / gp160 pe bandă;
  • conform criteriilor FDA americane - există două linii p24, p31 și o linie gp41 sau gp120 / gp160 pe bandă.

În 99,9% din cazuri, un rezultat pozitiv IB indică infecția cu HIV.

În absența liniilor - IB este negativ.

La identificarea liniilor cu gp160, gp120 și gp41, IB este îndoielnic. Un astfel de rezultat poate fi detectat atunci când:

  • boli oncologice;
  • sarcina;
  • transfuzii de sânge frecvente.

În astfel de cazuri, se recomandă efectuarea unui al doilea studiu folosind un kit de la o altă companie. Dacă, după IB suplimentar, rezultatul rămâne îndoielnic, atunci este necesară urmărirea timp de șase luni (IB se efectuează la fiecare 3 luni).

reacția în lanț a polimerazei

Testul PCR poate detecta ARN-ul virusului. Sensibilitatea sa este destul de mare și permite detectarea infecției cu HIV încă de la 10 zile după infectare. În unele cazuri, PCR poate da rezultate fals pozitive, deoarece sensibilitatea sa ridicată poate reacționa și la anticorpii la alte infecții.

Această tehnică de diagnosticare este costisitoare, necesită echipamente speciale și specialiști cu înaltă calificare. Aceste motive nu permit să fie efectuată în timpul testării în masă a populației.

PCR este utilizată în astfel de cazuri:

  • pentru a detecta HIV la nou-născuții care s-au născut din mame infectate cu HIV;
  • pentru a detecta HIV în „perioada fereastră” sau în caz de IB îndoielnic;
  • pentru a controla concentrația HIV în sânge;
  • pentru studiul sângelui donatorului.

Numai prin testul PCR, diagnosticul HIV nu se face, ci se realizează ca metodă suplimentară de diagnosticare pentru rezolvarea disputelor.


Metode Express

Una dintre inovațiile în diagnosticarea HIV a devenit testele rapide, ale căror rezultate pot fi evaluate în 10-15 minute. Cele mai eficiente si precise rezultate se obtin cu teste imunocromatografice bazate pe principiul fluxului capilar. Sunt benzi speciale pe care se aplică sânge sau alte fluide de testare (salivă, urină). În prezența anticorpilor împotriva HIV, după 10-15 minute, pe test apare o bandă colorată și de control - un rezultat pozitiv. Dacă rezultatul este negativ, apare doar linia de control.

Ca și în cazul testelor ELISA, rezultatele testelor rapide trebuie confirmate prin analiza IB. Numai atunci poate fi pus un diagnostic de infecție cu HIV.

Există kituri expres pentru testarea acasă. Testul OraSure Technologies1 (SUA) este aprobat de FDA, disponibil fără prescripție medicală și poate fi utilizat pentru a detecta HIV. După test, în cazul unui rezultat pozitiv, pacientului i se recomandă să fie supus unei examinări într-un centru specializat pentru confirmarea diagnosticului.

Testele rămase pentru uz casnic nu au fost încă aprobate de FDA și rezultatele lor pot fi foarte discutabile.

În ciuda faptului că testele rapide sunt inferioare ca precizie față de testele ELISA de generația IV, acestea sunt utilizate pe scară largă pentru testarea suplimentară a populației.

Te poți testa pentru infecția HIV la orice policlinică, Spitalul Regional Central sau la centrele specializate SIDA. Pe teritoriul Rusiei, acestea sunt ținute în mod absolut confidențial sau anonim. Fiecare pacient se poate aștepta să primească sfaturi medicale sau psihologice înainte sau după analiză. Va trebui să plătiți doar pentru testele HIV în reclamă institutii medicale, si in clinici publice iar spitalele se efectuează gratuit.

Pentru informații despre cum vă puteți infecta cu HIV și ce mituri există despre posibilitățile de a vă infecta, citiți

Cel mai răspândit în lume astăzi este SIDA – un virus din subfamilia retrovirusurilor, ei mai sunt numiti și lentivirusuri, sau „lent”. Într-adevăr, în corpul uman, ele încep să manifeste activitate după un timp relativ lung, aproximativ 10 ani mai târziu.

Există o imunodeficiență de primul și al doilea tip. Dar putem vorbi în siguranță despre extinderea primului tip de virus. Odată ajuns în sânge și alăturându-se celulei responsabile de imunitate, virusul începe să se înmulțească rapid. În timp ce molecula CD4 responsabilă de recunoașterea sa identifică inamicul insidios, aceasta reușește să infecteze întregul organism. Prin urmare, cu cât este diagnosticat mai devreme, cu atât este mai probabil ca pacientul să primească tratament în timp util și să trăiască mai mult.

Dacă o persoană are un motiv pentru a se testa pentru SIDA, aceasta ar trebui făcută imediat. Cel mai adesea, baza unui astfel de diagnostic este determinarea anticorpilor împotriva imunodeficienței în sânge - proteine ​​care apar ca reacție la prezența unui virus și încep să se formeze în perioada de la 1,5 la 6 luni de la momentul posibila infectie. În consecință, este mai oportun să se supună diagnosticului după această perioadă.

Cantitatea de anticorpi este determinată folosind un test numit imunotest enzimatic (ELISA). Această metodă este de încredere, este relativ precisă și foarte sensibilă, aceste cifre sunt de peste 99,5%. Piața farmaceutică oferă o serie de truse de diagnosticare pentru ELISA: Combibest HIV, Anti-HIV 1 2, CombiBest anti-HIV, CombiBest anti-HIV 1 2, CombiBest anti-HIV 1 2 d 0172. Aceste sisteme de testare aparțin celui de-al treilea. generaţie. Dezavantajul acestor reactivi este că nu detectează întotdeauna boala în întâlniri timpurii. O persoană este deja purtătoare de virus, este potențial periculoasă pentru parteneri, dar anticorpii nu sunt încă prezenți în sânge.

Trusele sunt echipate în principal cu un număr de teste pentru 12*8 sau 192 de teste anti-HIV. Nu este recomandat să le folosiți pe cont propriu. Descrierea medicamentelor afirmă că scopul lor principal este de a detecta cantitatea de anticorpi împotriva ambelor tipuri de SIDA. Și, de asemenea, pentru a determina anticorpii din toate clasele împotriva SIDA. Dacă nu există anticorpi, atunci boala nu este diagnosticată.

A patra generație de teste „vede”, în plus față de anticorpi și antigene SIDA, ei sunt capabili să detecteze infecția mai devreme decât mijloacele din a treia generație. Spre comparație: antigenul HIV este în sânge, începând din a 5-a zi, iar primii anticorpi apar nu mai devreme de o lună mai târziu. CombiBest HIV 1, 2 AG/AT (setul 1) și CombiBest HIV 1, 2 AG/AT (setul 2) aparțin testelor de generația a 4-a. Folosind un set de acești reactivi, anticorpii la antigenul de tip 1, 2 și p24 sunt detectați prin examinarea serului sau plasmei umane. Multe țări folosesc testarea ELISA de exact 4 generații, care se mai numește și Antigen / Anticorp, abreviat AGAT.

Testarea se face anonim.

Descriere

Pregătirea

Indicatii

Interpretarea rezultatelor

Descriere

Metoda de determinare Imunotestul enzimatic (ELISA).

Material în studiu Ser

Vizita la domiciliu disponibila

Detectarea combinată a anticorpilor la HIV tipurile 1 și 2 și a antigenului HIV p24, un test calitativ.


Atenţie. În cazul reacțiilor pozitive și îndoielnice, termenul de eliberare a rezultatului poate fi prelungit până la 10 zile lucrătoare. HIV (virusul imunodeficienței umane), care provoacă SIDA (sindromul imunodeficienței dobândite), aparține familiei retrovirusurilor. Se transmite de la o persoană la alta prin utilizarea de ace și seringi contaminate pt administrare intravenoasă medicamente sau proceduri terapeutice, act sexual, atât heterosexuali cât și homosexuali. Transmiterea virusului se poate produce prin transfuzia de sânge infectat și a produselor acestuia, donarea de organe sau lichid seminal, la lucrătorii din domeniul sănătății - atunci când sunt răniți de ace sau instrumente infectate. Infecția cu HIV este posibilă prin transmiterea ei de la o mamă infectată la copil (cale verticală), deși metodele moderne de prevenire care utilizează terapia antiretrovială, dacă sunt respectate toate recomandările, pot reduce acest risc la minimum.

Procesul de interacțiune a unui virus cu o celulă include o serie de etape: legarea virusului de celulă, eliberarea acestuia din coajă, pătrunderea în citoplasmă, sinteza ADN din ARN viral și integrarea ADN-ului viral în genomul celula gazdă. După aceasta, începe stadiul latent al infecției. În această stare, ADN-ul proviral poate exista o perioadă de timp fără a prezenta activitate și fără a afecta activitatea vitală a celulei gazdă. Atâta timp cât nu există o expresie a proteinelor virale, nu există un răspuns imun la virus. Anticorpii împotriva HIV, care caracterizează răspunsul imun al organismului, apar după activarea ADN-ului viral și începutul reproducerii active a virusului. Durata perioadei latente depinde de o serie de factori, inclusiv de caracteristicile genetice individuale ale organismului.

Anticorpii împotriva HIV pot apărea începând cu a doua săptămână după infectare; conținutul lor crește în 2-4 săptămâni și persistă mulți ani. La 90-95% dintre cei infectați apar în primele trei luni după infectare, la 5-9% - în perioada de la trei până la șase luni, în 0,5-1% - la o dată ulterioară.

În primele săptămâni de infecție, chiar înainte de apariția anticorpilor împotriva virusului (adică înainte de seroconversie), prezența antigenelor HIV, inclusiv a proteinei capsidei p24, poate fi detectată în probele de ser sau plasmă. Mai târziu, după seroconversie, devine de obicei nedetectabil.

Testele combinate de a patra generație, cum ar fi testul HIV Ag/Ab Combo (Arhitect, Abbott), detectează atât anticorpii HIV de tip 1 și 2, cât și antigenul HIV p24, permițând detectarea precoce a infecției. Caracteristicile speciale ale testului de screening utilizat în laboratorul INVITRO pentru depistarea infecției cu HIV includ specificitatea ridicată a studiului (> 99,5%); Sensibilitatea testului de 100% la anticorpii caracteristici perioadei de seroconversie, iar sensibilitatea testului la antigenul p24 este de aproximativ 18 pg/ml.

Procedura de testare de laborator pentru HIV este strict reglementată de ordinele Ministerului Sănătății al Federației Ruse și include etapa unui studiu de screening (screening) a prezenței anticorpilor la HIV prin metode imunoenzimatice (ELISA) aprobate pentru utilizare. , și stadiul unui studiu de verificare (confirmare) mai detaliat în laboratorul centrului SIDA al orașului. Trebuie remarcat faptul că nici cele mai bune sisteme ELISA de screening nu garantează o specificitate de 100%, adică există o oarecare posibilitate de a obține rezultate nespecifice, fals pozitive asociate cu caracteristicile serului sanguin al pacientului. Prin urmare, un rezultat ELISA de screening pozitiv poate să nu fie confirmat în testele de confirmare, după care pacientului i se va da un rezultat negativ sau nedeterminat. Dacă rezultatul studiului de confirmare este nedeterminat, testarea trebuie repetată în dinamică în 2-3 săptămâni.

Diagnosticul de laborator al infecției cu HIV la copiii născuți din mame infectate cu HIV are propriile sale caracteristici. Anticorpii materni împotriva HIV (clasa IgG) pot circula în sângele lor până la 18 luni din momentul nașterii. Absența anticorpilor împotriva HIV la nou-născuți nu înseamnă că virusul nu a trecut bariera placentară. Copiii mamelor infectate cu HIV sunt supuși examinării diagnostice de laborator în termen de 36 de luni de la naștere.

Pregătirea

Nu este necesară o pregătire specială. Se recomandă prelevarea de sânge nu mai devreme de 4 ore după ultima masă. CU recomandari generale pentru a se pregăti pentru cercetare pot fi găsite. Este recomandabil să se efectueze un studiu pentru detectarea antigenului și a anticorpilor la HIV nu mai devreme de două săptămâni după o posibilă infecție, cu repetarea acestuia după trei și șase săptămâni în cazul rezultat negativ. Înregistrarea cererilor de cercetare la INVITRO LLC se efectuează în conformitate cu un pașaport sau un document care îl înlocuiește (carte de migrare, înregistrare temporară la locul de reședință, certificat de militar, certificat de la biroul de pașapoarte în caz de pierdere a pașaportului, carte de înregistrare). dintr-un hotel). Documentul transmis trebuie să conțină informații despre înregistrarea temporară sau permanentă pe teritoriul Federației Ruse și o fotografie. În lipsa unui pașaport (un document care îl înlocuiește), pacientul are dreptul de a face o cerere anonimă pentru livrarea de biomaterial. Cu o examinare anonima, aplicatiei si proba de biomaterial primita de la client i se atribuie un numar cunoscut doar pacientului si personalului medical care a plasat comanda. ! Rezultatele studiilor efectuate anonim nu pot fi depuse pentru internare, examinări profesionale și nu fac obiectul înregistrării la ORUIB.

Indicații pentru programare

  • Crește noduli limfatici mai mult de două zone.
  • Leucopenie cu limfopenie.
  • Transpirații nocturne.
  • Pierdere bruscă în greutate de cauză necunoscută.
  • Diaree de mai mult de trei săptămâni de cauză necunoscută.
  • Febră de cauză necunoscută.
  • Planificarea sarcinii.
  • Pregătirea preoperatorie, spitalizare.
  • Identificarea următoarelor infecții sau a combinațiilor acestora: tuberculoză, toxoplasmoză evidentă, adesea recurentă infecție cu herpesvirus, candidoza organe interne, nevralgie recurentă herpes-zosterică, cauzată de micoplasme, pneumocystis sau pneumonie cu legionella.
  • Sarcomul lui Kaposi la o vârstă fragedă.
  • Sex ocazional.

Interpretarea rezultatelor

Interpretarea rezultatelor testelor conține informații pentru medicul curant și nu reprezintă un diagnostic. Informațiile din această secțiune nu trebuie utilizate pentru auto-diagnosticare sau auto-tratament. Un diagnostic precis este pus de medic, folosind ambele rezultate acest sondaj, și informațiile necesare din alte surse: anamneză, rezultatele altor examinări etc.

Unitati de masura in Laboratorul Independent INVITRO: test calitativ. Forma de prezentare a rezultatelor: în absența anticorpilor împotriva antigenului HIV 1 și 2 și p24, răspunsul este „negativ”. În cazul depistarii anticorpilor HIV sau antigenului în testul ELISA de screening, proba de ser este trimisă spre analiză prin metoda imunoblot de confirmare la centrul SIDA al orașului, care verifică rezultatele pozitive și nedeterminate.

Rezultat pozitiv:

  1. infecție cu HIV;
  2. rezultat fals pozitiv care necesită studii repetate sau suplimentare*);
  3. studiul nu este informativ la copiii sub 18 luni născuți din mame infectate cu HIV.

*Specificitatea sistemului de testare de screening a anticorpilor HIV 1 și 2 și a antigenului HIV 1 și 2 (HIV Ag/Ab Combo, Abbott) este estimată de producătorul reactivului a fi de aproximativ 99,6% atât în ​​populația generală, cât și în grupul de pacienți cu interferențe potențiale (infecții HBV, HCV, rubeolă, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E.coli, Chl.trach. etc., patologii autoimune(inclusiv artrita reumatoidă, prezența anticorpilor antinucleari), sarcină, nivel ridicat IgG, IgM, gammapatie monoclonală, hemodializă, transfuzii multiple de sânge).