Immunoblotting (immunoblot) este o metodă de referință foarte specifică și foarte sensibilă care confirmă diagnosticul pentru pacienții cu rezultate pozitive sau nedeterminate ale testelor obținute, incl. folosind RPGA sau ELISA .

Această metodă de detectare a anticorpilor la antigeni patogeni individuali se bazează pe ELISA pe membrane de nitroceluloză, pe care se aplică proteine ​​specifice sub formă de benzi separate, separate prin electroforeză pe gel. Dacă există anticorpi împotriva anumitor antigeni, apare o linie întunecată la locul benzii corespunzător. Unicitatea imunoblotului constă în conținutul său ridicat de informații și fiabilitatea rezultatelor obținute.

Material de cercetare este ser sau plasmă umană. Pentru cercetarea pe o bandă, sunt necesari 1,5-2 ml de sânge sau 15-25 µl de ser.

Conform recomandării OMS, imunoblot (western blot) este utilizat în diagnosticul infecției cu HIV ca metodă suplimentară de expertiză, care ar trebui să confirme rezultatele ELISA. Această metodă este de obicei folosită pentru a verifica rezultat pozitiv cu ELISA, deoarece este considerat mai sensibil și mai specific, deși mai complex și mai costisitor.

Imunoblotting combină imunotestul enzimatic (ELISA) cu separarea electroforetică preliminară a proteinelor virale într-un gel și transferul lor pe o membrană de nitroceluloză. Procedura de imunoblot constă în mai multe etape. În primul rând, pre-purificat și distrus în componentele sale constitutive, HIV este supus electroforezei, în timp ce toți antigenii care alcătuiesc virusul sunt separați prin greutate moleculară. Apoi, prin blotting, antigenele sunt transferate din gel pe o bandă de nitroceluloză sau un filtru de nailon, care conțin acum un spectru de proteine ​​caracteristice HIV, invizibile pentru ochi. Apoi, materialul de testat (ser, plasmă a pacientului etc.) este aplicat pe bandă, iar dacă există anticorpi specifici în probă, aceștia se leagă de benzile de proteine ​​antigene care le corespund strict. Ca rezultat al manipulărilor ulterioare (cum ar fi ELISA), rezultatul acestei interacțiuni este vizualizat - făcut vizibil. Prezența benzilor în anumite zone ale benzii confirmă prezența în serul studiat a anticorpilor la strict anumiti antigeni HIV.

Imunoblotting este cel mai frecvent utilizat pentru a confirma diagnosticul de infecție cu HIV. OMS consideră serul pozitiv dacă anticorpii la oricare două dintre proteinele învelișului HIV sunt detectați prin imunoblot. Conform acestor recomandări, dacă există o reacție doar cu una dintre proteinele învelișului (gp160, gp120, gp41) în combinație sau fără reacție cu alte proteine, rezultatul este considerat îndoielnic și se recomandă un al doilea studiu folosind un kit dintr-un alt serie sau de la o altă companie. Dacă după aceea rezultatul rămâne îndoielnic, studiile continuă la fiecare 3 luni.

Particularități

Analiza imunoblot este o metodă fiabilă care vă permite să determinați prezența anticorpilor la antigenele HIV de primul și al doilea tip. Dacă o persoană este infectată, în două săptămâni apar anticorpii, care pot fi detectați mult mai târziu. Particularitatea HIV este că numărul de anticorpi crește rapid și rămâne în sângele pacientului. Chiar dacă sunt prezente, boala poate să nu se manifeste timp de doi sau mai mulți ani. Metoda ELISA nu determină întotdeauna cu exactitate prezența bolii, prin urmare, este necesară confirmarea rezultatelor prin imunoblotting și PCR dacă imunotestul enzimatic este pozitiv.

Indicații pentru programare

Ce este acest „imunoblot” a fost deja descoperit, dar cui i se prescrie acest studiu? Motivul pentru a face teste pentru virusul imunodeficienței umane (HIV) prin imunoblot este un rezultat ELISA pozitiv. Este necesar să se treacă prin imunotest enzimatic pentru pacienții care vor fi operați. În plus, ar trebui făcută o analiză pentru femeile care planifică o sarcină, precum și pentru toți cei care sunt promiscui sexual. Atribuiți imunoblotting pacienților cu HIV, dacă rezultatele ELISA sunt îndoielnice.

Motivele pentru a consulta un medic pot include: simptome de anxietate:

• pierdere bruscă în greutate;
• slăbiciune, pierderea capacității de lucru;
• tulburare intestinală (diaree) care durează trei săptămâni;
• deshidratarea organismului;
• febră;
• crește noduli limfatici pe corp;
• dezvoltarea candidozei, tuberculozei, pneumoniei, toxoplasmozei, exacerbarea herpesului.

Pacientul nu trebuie să se pregătească înainte de donare sânge venos. Cu 8-10 ore înainte de studiu, nu puteți mânca. Nu este recomandat să bei băuturi alcoolice și de cafea, să te angajezi în exerciții fizice grele, să experimentezi emoție cu o zi înainte de donarea de sânge.

Cum se face cercetarea?

Din punctul de vedere al pacientului, imunoblotul nu este diferit de orice altă analiză: se prelevează sânge venos, se examinează și se obține rezultatul. Dar dacă intri în puțin mai multe detalii despre tehnică, atunci nu este foarte simplu, dar încearcă totuși să-l dai seama.

În primul rând, un virus al imunodeficienței umane „de referință” este luat la fabrica de reactiv. Apoi, folosind o procedură specială (electroforeză) într-un mediu de gel, virusul este distrus până la cele mai mici componente: proteine ​​(antigeni virali). Apoi, folosind blotting-ul propriu-zis (din engleză umezire), particulele sunt plasate pe un material special - nitroceluloză sau un filtru de nailon, se obține un indicator gata de utilizare, așa-numita bandă. O bandă este o bandă în care antigenele sunt distribuite în funcție de greutatea lor moleculară, într-o secvență clară, adică fiecărui milimetru de hârtie îi corespunde o anumită proteină.

După cum probabil știți, dacă virușii sunt prezenți în sângele unei persoane, atunci organismul începe să producă anticorpi împotriva învelișului lor (anumite proteine), iar fiecare virus are propriul său set individual de proteine ​​antigene. Detectarea anticorpilor la proteinele antigene din sânge este baza metodei imunoblot. La urma urmei, dacă un anticorp se ciocnește cu un antigen, atunci cu siguranță vor interacționa între ei - se „lipesc”.

Deci, antigenele sunt pe banda de bandă și, dacă există antigene adecvate în sângele subiectului de testat, ei vor interacționa în mod necesar unul cu celălalt, iar în acest loc, pe banda de bandă, va apărea un indicator - un plat va apărea apar (ca un test de sarcina). Mai mult, într-un loc specific al benzii, în acest fel medicul va înțelege dacă există un set de proteine ​​caracteristice unui anumit virus în sânge.

Deci, de exemplu, dacă există o întunecare pe bandă în locurile de localizare a proteinei gp160, gp120, gp41 HIV este diagnosticat, pentru alte virusuri va fi un set complet diferit de proteine.

Trebuie remarcat faptul că imunoblotul vă permite să determinați cu exactitate prezența virusului numai dacă setul de anticorpi din sânge este complet, adică dacă proteinele gp160, gp120, gp41 sunt prezente în același timp, atunci acesta este 100% infecție HIV. Dar dacă cel puțin unul lipsește, de exemplu: gp41 este absent, dar există doar gp160, gp120, atunci testul este considerat îndoielnic și necesită repetare.

FAQ

Care sunt etapele imunoblot?

1. Pregătirea benzii. Virusul imunodeficienței (HIV), care a fost anterior purificat și distrus în componentele sale constitutive, este supus electroforezei, în timp ce antigenele care alcătuiesc HIV sunt separați prin greutate moleculară. Apoi, prin blotting (analog cu stoarcerea excesului de cerneală pe un „blotter”), antigenele sunt transferate pe o bandă de nitroceluloză, care conține acum un spectru de benzi antigenice caracteristice HIV care este invizibilă pentru ochi.
2. Exemplu de studiu. Materialul de testat (ser, plasma sanguină a pacientului etc.) se aplică pe banda de nitroceluloză, iar dacă există anticorpi specifici în probă, aceștia se leagă de benzile antigenice strict corespunzătoare (complementare). Ca urmare a manipulărilor ulterioare, rezultatul acestei interacțiuni este vizualizat - făcut vizibil.
3. Interpretarea rezultatului. Prezența benzilor în anumite zone ale plăcii de nitroceluloză confirmă prezența în serul studiat a anticorpilor la antigenele HIV strict definite.

• Banda A - Control pozitiv
• Banda B - Control pozitiv slab
• Banda C - Control negativ
• Stripe D - Probă pozitivă (anticorpi la HIV-1 detectați)

Cum să descifrem analiza?

Dacă ELISA a arătat prezența tuturor sau aproape a tuturor anticorpilor la antigene conform acestui sistem de testare, aceasta înseamnă analiză pozitivă pentru HIV. Dacă răspunsul după al doilea imunotest serologic enzimatic este pozitiv, atunci trebuie efectuată o imunoblot. Interpretarea rezultatelor sale va fi mai corectă. Dacă testul imunosorbent legat de enzime a dat un rezultat pozitiv, următoarea analiză de imunoblot a arătat și prezența HIV, atunci rezultatul final este pus.

Când analizele sunt descifrate, trebuie să știți că un test HIV pozitiv este determinat de:

• 60% până la 65% la 28 de zile după infecție;
• în 80% - după 42 de zile;
• în 90% - după 56 de zile;
• în 95% - după 84 de zile.

Dacă răspunsul la HIV este pozitiv, aceasta va însemna că au fost detectați anticorpi împotriva virusului. Pentru a evita un răspuns fals pozitiv, este necesar să retestați, de preferință de două ori. Dacă anticorpii împotriva imunodeficienței sunt detectați la trecerea a două teste din două sau la trecerea a 3 teste la 2 dintre ele, atunci se consideră că rezultatul este pozitiv.

Antigenul p24 poate fi detectat în sânge încă de la 14 zile de la data infecției. Folosind metoda imunoenzimatică, acest antigen este detectat între 14 și 56 de zile. După 60 de zile, nu mai este în sânge. Numai atunci când SIDA se formează în organism are loc re-creșterea acestei proteine ​​p24 în sânge. Prin urmare, sistemele de testare imunoenzimatică sunt utilizate pentru a detecta HIV în primele zile de infecție sau pentru a determina modul în care boala progresează și pentru a monitoriza procesul de tratament. Sensibilitatea analitică ridicată a imunotestului enzimatic detectează antigenul p24 în materialul biologic pentru HIV al primului subtip la o concentrație de 5 până la 10 pg/ml, pentru HIV din al doilea subtip de la 0,5 ng/ml sau mai puțin.

Sub dubios rezultatul unui imunotest enzimatic implică faptul că la diagnosticare, au făcut o greșeală undeva, de regulă, lucrătorii medicali au amestecat ceva sau persoana are semne de infecție, iar rezultatul este negativ, ceea ce provoacă suspiciuni, persoana este trimisă pentru re-testare.

Sub fals pozitiv Rezultatul este înțeles ca rezultat atunci când analizele de sânge au fost efectuate în următoarele condiții ale pacientului:

• sarcina;
• dacă o persoană are un dezechilibru hormonal;
• cu imunosupresie prelungită.

Cum să descifrem analiza în acest caz? Un rezultat fals pozitiv este dat dacă este detectată cel puțin o proteină. Datorită faptului că antigenul p24 este foarte dependent de variațiile individuale, folosind această metodă, 20% până la 30% dintre pacienți sunt detectați în prima perioadă de infecție.

Cât de fiabil este un rezultat pozitiv al testului?

Uneori, ELISA are rezultate fals pozitive (în aproximativ 1% din cazuri), motivul acestui rezultat poate fi sarcina, diferite infecții virale, precum și un simplu accident. După primirea unui rezultat pozitiv, este necesar un test mai precis - un imunblot, în funcție de rezultatele căreia se pune un diagnostic. Rezultat imunoblot pozitiv după ELISA pozitiv 99,9% fiabil - aceasta este acuratețea maximă pentru orice test medical. Dacă imunoblotul este negativ, atunci primul test a fost fals pozitiv și, de fapt, persoana nu are HIV.

Ce este un rezultat nedeterminat (dubios)?

Dacă ELISA este pozitivă sau negativă, atunci imunoblotul poate fi pozitiv, negativ sau nedeterminat. Rezultat imunoblot nedeterminat, de ex. prezența în imunoblot a cel puțin o proteină la virus poate fi observată dacă infecția a avut loc recent și există încă puțini anticorpi împotriva HIV în sânge, caz în care imunoblotul va deveni pozitiv după un timp. De asemenea, un rezultat nedeterminat poate apărea în absența infecției cu HIV în hepatită, unele boli cronice schimb de natură, sau în timpul sarcinii. În acest caz, fie imunoblotul va deveni negativ, fie se va găsi cauza rezultatului nedeterminat.

Cât costă analiza?

Imunoblot pentru HIV nu se aplică cercetării ieftine. În medie, o examinare de screening prin imunotest enzimatic costă între 500 și 900 de ruble. Imunoblotting este un studiu de verificare, al cărui cost este de la trei la cinci mii de ruble. Mai mult metode complexe sunt mult mai scumpe. De exemplu, pentru analiza reacției în lanț a polimerazei (PCR), va trebui să plătiți aproximativ 12.000 de ruble.

Unde se face analiza?

Unde pot fi testat pentru HIV? Studiile ELISA, imunoblot sunt efectuate în clinici private urbane, rezultatele sunt eliberate într-o zi. Diagnosticul imediat este, de asemenea, posibil. În instituțiile medicale de stat, testele ELISA și imunoblotting sunt efectuate gratuit, în conformitate cu legislația Federației Ruse. Femeile însărcinate, precum și pacienții care urmează să fie internați sau supuși unei intervenții chirurgicale, trebuie să fie testați pentru boli infecțioase.

Imunoblotting -(din engleză „blot” - spot) - o metodă de identificare a antigenelor (sau a anticorpilor) folosind seruri (sau antigene) cunoscute. Este o combinație de electroforeză pe gel cu ELISA. Inițial, celulele bacteriene sau virionii sunt distruși cu ajutorul ultrasunetelor, iar apoi toți antigenii virusului sau celulele bacteriene sunt separați prin electroforeză și se obține un reactiv comercial pe o peliculă specială de nitroceluloză. La instalarea imunoblotării, serul de testare al pacientului este aplicat pe filmul cu antigeni cunoscuți. După incubarea și spălarea anticorpilor nelegați, aceștia trec la ELISA - un antiser pentru imunoglobulinele umane marcat cu o enzimă și un substrat cromogen care își schimbă culoarea atunci când interacționează cu enzima sunt aplicate pe film. În prezența complexelor antigen-anticorp-antiser la imunoglobulină-enzimă, pe purtător apar pete colorate. Metoda de imunoblotting vă permite să detectați separat anticorpi la diferiți antigeni ai agentului patogen (de exemplu, în infecția cu HIV, imunoblotajul detectează anticorpi la gp120, gp24 și alți antigeni ai virusului).

Radioimunotest (RIA)

Metoda se bazează pe reacția antigen-anticorp folosind un antigen sau un anticorp cu un radionuclid. 125I, 14C, 3H, 51Cr și alți radionuclizi sunt utilizați ca etichetă. Complexele imune rezultate sunt izolate din sistem și radioactivitatea lor este determinată pe contoare (radiație β). Intensitatea radiației este direct proporțională cu numărul de antigen și molecule de anticorpi legați.

Versiunea în fază solidă a RIA care utilizează anticorpi marcați sau antigeni adsorbiți în godeurile panourilor de polistiren este utilizată pe scară largă.

RIA este utilizat pentru a detecta antigenele microbilor, virușilor, diverși hormoni, enzime, substanțe medicinale, imunoglobulinele, precum și alte substanțe conținute în materialul de testat în concentrații minore de 10-12-10-15 g/l.

Întrebări de control

Reacția de bacterioliză imună: ce fel de reacție este; ce este un antigen, ce este un anticorp, mecanism de reacție, metode de stadializare, uz practic . Reacție de hemoliză imună: ingrediente necesare, metoda de fixare; controale, aplicare practică. Reacția de hemoliză locală în gel (reacția Yerne): principiul reacției, metoda de formulare, aplicarea practică. Reacția de fixare a complementului: principiu de reacție; ce se formează atunci când serul imunitar interacționează cu un antigen specific; ce se întâmplă cu complementul dacă este prezent în această interacțiune? Care este soarta complementului dacă nu există o afinitate specifică între antigen și anticorpi? Ce reacție poate fi folosită pentru a determina ce sa întâmplat cu complementul; de ce se folosește această reacție; care este rezultatul pozitiv vizibil al RSK? De ce? Ce proprietate a complementului este folosită în prima fază a CSC? In faza a doua? Dacă rezultatul final al RSK este hemoliza, înseamnă asta un rezultat pozitiv sau negativ? Explicați rezultatele: RSK+ + + +, RSK+ + +, RSK+ +, RSK+. Numiți ingredientele primului sistem RSK și ingredientele celui de-al doilea sistem RSK. De ce trebuie să fie inactivat serul de testare? Cum se titra complementul? Ser hemolitic: ce conține, cum se obține, ce este titrul și cum se determină? Ce animale sunt folosite pentru a obține componente RSC? Tehnica de a seta RSC la frig. Atunci când stadializați care dintre următoarele reacții, este necesară participarea unui complement: precipitare, floculare, aglutinare, detectarea anticorpilor incompleti, bacterioliză imună, hemoliză imună, Jerne, CSC? Reacția de imunofluorescență (RIF) - indică succesiunea evenimentelor din reacția directă Coons; ingredientele necesare. Ce este un antigen, ce este un anticorp, cum sunt marcați anticorpii, cum este luat în considerare rezultatul reacției, cum arată un rezultat pozitiv? Aplicație practică - ce se poate determina folosind această reacție? Reacție de imunofluorescență indirectă - indicați succesiunea evenimentelor din această reacție, ingredientele necesare, care este antigenul, ce seruri imune sunt utilizate; uz practic; avantajul RIF indirect față de reacția directă. Imunotestul enzimatic (ELISA) - principiul reacției; ingredientele necesare; indicați secvența evenimentelor la stabilirea unei reacții pentru a detecta un antigen în materialul de testat; ingredientele necesare; ce se întâmplă cu un rezultat pozitiv, cum arată? Specificați secvența acțiunilor în timpul ELISA pentru a detecta anticorpii în serul de testat; ingredientele necesare; ce se intampla cu un rezultat pozitiv? Imunoblotting - principiul reacției; etapele principale; ingredientele necesare; Cum se ia în calcul rezultatul? beneficii de reacție. Radioimunotest (RIA) - care sunt principalele etape ale reacției; cu ce sunt marcați anticorpii sau antigenele, cum se ia în considerare rezultatul? Microscopia imunoelectronică - principiul metodei; etapele principale; ingredientele necesare; Cu ce ​​sunt marcați anticorpii? cum se ia în considerare rezultatul reacției. Reacții de imobilizare - principiul metodei, tehnica de setare, componente, contabilizarea rezultatelor.

Sarcini de îndeplinit în procesul de autoformare.

Completați tabelul Reacții de imunitate pentru reacțiile abordate în acest subiect.

Reacții imune

Lucrarea elevului într-o lecție practică

Începeți munca imediat cu formularea primei faze a RSC, dar notați-o într-un caiet mai târziu (vezi mai jos).

1. Reacția de hemoliză imună. Vizualizați o reacție demonstrativă a hemolizei imune, desenați-o sub formă de diagramă, explicați rezultatul în tuburile experimentale și de control.

2. Reacția de legare a complementului

a) dezasamblați RSC conform tabelului;

b) desenează într-un caiet o schemă de stabilire a RSC sub formă de tabel;

c) pune faza a doua a RSK (prima faza este pusa la inceputul lectiei);

d) dezasamblați preparatele de diagnostic necesare RSK;

e) ţine cont de rezultat. Formulați o concluzie despre prezența anticorpilor specifici în serul de testat.

3. Reacția de imunofluorescență. Studiați tabelul, întocmește o schemă de stabilire a reacției în caiet; vezi seruri de diagnostic; determinați ce conține serul, cum este preparat, pentru ce reacție (RIF directă sau indirectă) este utilizat. Uitați-vă la rezultatul demonstrației RIF într-un microscop fluorescent.

4. Imunotestul enzimatic (ELISA). În caiet, întocmește o schemă de reacție în două versiuni: pentru detectarea unui antigen în materialul de testat și pentru detectarea anticorpilor în ser. Examinați trusa de ingrediente pentru diagnosticul HIV și hepatitei B. Determinați ce conține fiecare ingredient și pentru ce este utilizat.

5. Imunoblotting. Faceți o diagramă a reacției în caiet; vezi demo - rezultatul reacției.

6. Radioimunotest (RIA). Desenați schema de reacție în caiet.

7. Microscopia electronică imunitară (IEM). Urmărește demonstrația - rezultatul reacției, întocmește o schemă de reacție în caiet, indica antigenul (virusul) și anticorpii etichetați cu săgeți.

Immunoblotting este o metodă de detectare a proteinelor extrem de sensibilă, bazată pe o combinație de electroforeză și ELISA sau RIA. Imunoblotting este utilizat ca metoda de diagnostic cu infecție HIV etc.

Într-un sens general, imunoblotarea este înțeleasă ca analiza unui amestec de proteine ​​transferate pe o membrană suport solidă, cu care se leagă prin legături covalente, urmată de imunodetecție.

Este posibil să se analizeze un amestec de proteine ​​depus direct pe un substrat (analiza dot blot) sau după fracţionarea lui preliminară prin electrofocalizare, electroforeză pe disc sau electroforeză bidimensională (Western blotting).

Antigenii patogeni sunt separați prin electroforeză pe gel de poliacrilamidă, apoi transferați din gel pe hârtie activată sau membrana de nitroceluloză și dezvoltați prin ELISA.

Firmele produc astfel de benzi cu „bloturi” de antigene. Pe aceste benzi se aplică serul pacientului. . Apoi, după incubare, pacientul este spălat de anticorpii nelegați ai pacientului și se aplică ser împotriva imunoglobulinelor umane marcate cu enzima. . Complexul format pe bandă (antigen + anticorp al pacientului + anticorp împotriva Ig umană) este detectat prin adăugarea unui substrat cromogen care își schimbă culoarea sub acțiunea enzimei.

Această metodologie se aplică și selecției clonelor de bacterii, fagi sau viruși care exprimă produsele genelor țintă donate.

Transferul proteinelor pe membrană se realizează fie pasiv sau folosind un aparat de electrotransfer. Eficiența transferului de proteine ​​către membrană este afectată de mulți factori, cum ar fi greutatea moleculară a proteinelor, porozitatea gelului, timpul de transfer și compoziția soluției tampon (tampon trans) utilizată.

În funcție de sarcinile și condițiile experimentului, sunt selectate condițiile de transfer care oferă cele mai bune rezultate. Substraturile utilizate în mod obișnuit sunt nitroceluloza, difluorura de poliviniliden (PVDF) sau membranele de nailon încărcate pozitiv. Nitroceluloza poate lega până la 80-100 micrograme de proteine ​​la 1 cm2.

Proteinele cu greutate moleculară mică (cu o greutate moleculară mai mică de 20 kDa) pot fi pierdute ca urmare a spălărilor, ceea ce face posibilă studierea preliminară a polimorfismului anumitor loci genetici prin lungimile fragmentelor de ADN de restricție corespunzătoare.

În plus, folosind hibridizarea Southern, este ușor să aflați dacă gena țintă are un loc de hidroliză de către o anumită enzimă de restricție în partea sa internă, ceea ce vă permite să alegeți strategia optimă pentru clonarea regiunii genomului studiat.

Conform unei scheme similare, moleculele de ARN pot fi, de asemenea, transferate din gel de agaroză la un filtru de nitroceluloză. Această metodă a fost numită Northern blot spre deosebire de Southern blot, deoarece numele de familie Southern in Limba englezăînseamnă „sudic”.

Transferul la filtre din gelul proteic a fost denumit în consecință Western blot. Proteinele mari (mai mare de 100 kDa) denaturate în soluție de dodecil sulfat de sodiu (SDS) pot fi transferate slab la membrană dacă etanolul este prezent în tamponul trans. Alcoolul îmbunătățește semnificativ transferul de proteine ​​din gelul SDS-poliacrilamidă, dar îngustează porii din gel, ceea ce duce la reținerea proteinelor mari.

Membrana PVDF este optimizată pentru imunodetecție și este capabilă să rețină proteinele legate în mod specific până la 160 µg/cm2 cu un nivel foarte scăzut de legare nespecifică.

Imunoblotting

O proprietate importantă a acestei membrane este posibilitatea utilizării sale repetate. Membranele de nailon Zeta-Probe leagă eficient proteinele SDS în absența alcoolului, iar această legare este rezistentă la tratamentele ulterioare. Proteinele cu greutate moleculară mică sunt de asemenea reținute eficient. Cu o capacitate mare de legare de aproximativ 480 μg de proteină per 1 cm2, membranele Zeta-Probe permit detectarea urmelor de proteine ​​în amestecurile de analiză.

După ce antigenul este imobilizat pe membrană, locurile de legare rămase sunt blocate cu soluții de gelatină, sau albumină serică bovină sau lapte degresat.

Apoi membrana este incubată într-o soluție de anticorpi policlonali sau monoclonali la antigenul testat. După spălarea anticorpilor nelegați, membrana este incubată într-o soluție de anticorpi secundari, care sunt un conjugat de enzime fosfatază alcalină (fosfatază alcalină, AP) sau peroxidază de hrean (HRP) cu anticorpi anti-specie (anticorpi de capră la iepure, șoarece sau imunoglobuline umane) sau proteine ​​A (proteina Staphylococcus aureus) sau G (proteina Streptococcus sp.) având o afinitate mare pentru regiunea Fc a imunoglobulinelor.

Detectarea complexelor imune formate se realizează prin metoda chimică sau chimiluminiscentă. Substraturi pentru reactie chimica atunci când utilizați conjugați de fosfatază alcalină, utilizați 5-brom-4-cloro-3-indolil fosfat (BCIP) sau albastru de tetrazoliu (NBT), iar când utilizați conjugați de peroxidază de hrean, utilizați 4-clor-1-naftol și peroxid de hidrogen.

Ca rezultat al reacțiilor enzimatice, pe membrană se formează o bandă sau o pată colorată la locul de localizare a complexului antigen-anticorp.

Sensibilitatea acestei metode este de 100 pg de proteină atunci când se utilizează conjugate AP și 100-500 pg când se utilizează conjugate HRP. Detectarea chemiluminiscentă a complexelor imune poate detecta mai puțin de 5 pg de antigen. Principiul acestei metode este că atunci când HRP reacționează cu peroxid de hidrogen și diacilhidrazineluminol ciclic, se emite lumină la o lungime de undă de 428 nm, care poate fi înregistrată pe o peliculă fotosensibilă.

Reacția de imunoblot (RI) a fost dezvoltată pe baza ELISA. Este cea mai specifică și sensibilă metodă de analiză imunochimică. Immunoblotting (din engleză blot - a se uda, spot) combină ELISA cu electroforeza. Este folosit pentru a detecta nu anticorpi complecși la HIV, ci anticorpi la proteinele sale structurale individuale (proteine-p24, glicoproteine-gp120, gp 41 etc.). Consultați reacțiile experților (de confirmare) pentru diagnosticul infecției cu HIV.

Reacția se desfășoară în mai multe etape:

Virusul este distrus în componente - antigene (p24, gp120, gp 41 etc.), care sunt supuse electroforezei într-un gel de poliacrilamidă, adică separarea antigenilor în fracții după greutatea moleculară.

2. Gelul este acoperit cu o membrană de nitroceluloză și fracțiile de antigen sunt transferate în acesta prin electroforeză. Nitroceluloza se comportă ca hârtie absorbantă. Membrana este tăiată în benzi (fâșii). Firmele produc astfel de benzi cu „bloturi” de antigene.

Imunoblotting - o metodă indirectă suplimentară

Benzile cu antigeni HIV aplicați sunt scufundate în serul subiectului și apoi spălate din materialul nelegat.

4. Benzile se incubează cu ser antiglobulină marcat cu peroxidază și se spală.

Se adaugă un substrat și se notează numărul de fracții colorate (pete), care corespund zonei de localizare a complexului AG-AT.

Prezența dungilor în anumite zone ale benzii confirmă prezența în serul studiat a anticorpilor la antigenele HIV strict definite. Rezultatul imunoblotării este considerat pozitiv dacă benzile corespunzătoare oricărui doi dintre cei trei antigeni HIV - p24, gp41 și gp 120 sunt vizibile pe membrană (Fig. 37).

DESENE

LISTA LITERATURII UTILIZATE

Literatura principală

Microbiologie medicală, virologie și imunologie: un manual pentru studenții la medicină. universități ed. a II-a, corectată. si suplimentare — 702 p. Ed. A.A. Vorobyov. M. : MIA, 2012.

2. Microbiologie, virologie și imunologie: un ghid pentru studii de laborator: ghid de studiu / (V.B. Sboychakov și colab.); ed. V.B.Sboychakova, M.M.Karapats. – M.: GEOTAR-Media, 2014.- 320 p.: ill.

3. Microbiologie medicală, imunologie și virologie [Resursa electronică]: un manual pentru miere.

universități - 760 p. — Mod de acces: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785299004250.html Korotyaev A.I., Babichev S.A. Sankt Petersburg: Spetslit, 2010.

4. Microbiologie medicală, virologie și imunologie [Resursa electronică] : manual: în 2 volume / V. 1. - 448 p. — Mod de acces: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142241.html Zverev V.V., Boychenko M.N.

M. : Geotar Media, 2010. .

5. Microbiologie medicală, virologie și imunologie [Resursă electronică]: manual: în 2 volume.Vol. 2. - 480 p. Mod de acces: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142242.html Zverev V.V., Boychenko M.N. M. : Geotar Media, 2010.

literatură suplimentară

1. Reacții de imunodiagnostic: tutorial/ compilat de: G.K. Davletshina, Z.G. Gabidullin, A.A. Akhtariyeva, M.M.

Khusnarizanova, Yu.Z. Gabidullin, M.M. Alsynbaev - Ufa: Editura GBOU VPO BSMU a Ministerului Sănătății al Rusiei, 2016. - 86p.

2. Caracteristicile unor proprietăți care determină potențialul patogen al variațiilor co-cultivate ale bacteriilor Enterobacter, Сitrobacter, Serratia, E. coli, Proteus: publicație științifică / Yu. Z. Gabidullin, R. S. Sufiyarov, I. I. Dolgushin - Ufa, 2015. - 250 s.

Acasă » Immunoblot - ce este? Imunoblot în diagnosticul bolilor infecțioase

Imunoblot - ce este? Imunoblot în diagnosticul bolilor infecțioase

Ce este un imunblot? Aceasta este o metodă comună diagnostic de laborator infecții virale umane. Este una dintre cele mai precise și fiabile modalități de a detecta prezența HIV.

Pentru fiabilitate, este chiar mai mare decât testul imunosorbent cuplat cu enzime (elisa). Rezultatele imunoblot sunt considerate concludente și concludente.Informații generale

Imunoblot - ce este? Pentru a recunoaște o persoană ca fiind HIV pozitivă, trebuie să fii supus unui test de laborator pentru a testa prezența anticorpilor în serul sanguin.

Metoda secțiunilor Western blot se mai numește și Western blot (western blot). Este folosit pentru a detecta infecțiile virale umane, ca metodă suplimentară expertă. Acest lucru este necesar pentru a confirma ELISA - un test de laborator care vă permite să determinați prezența anticorpilor împotriva HIV în sânge. Immunoblot reverificare ELISA pozitiv.

Este considerat cel mai sensibil, complex și costisitor.

Ţintă

Ce este un imunblot? Această metodă de testare de laborator a serului de sânge pentru prezența anticorpilor împotriva virusului.

Pe parcursul studii speciale proteine ​​virale totale în gel și pe membranele de nitroceluloză.

Imunoblotting (detecția anticorpilor în serul pacienților împotriva anumitor antigeni patogeni)

Procedura secțiunii Western blot are scopul de a determina infecția cu HIV diferite etape. În prima etapă, virusul purificat din părțile sale constitutive este supus electroforezei și antigenii incluși în acesta, împărțiți la greutatea moleculară.

Virusul imunodeficienței umane se reproduce în celulele vii încorporate în informațiile sale genetice. În această etapă, persoana devine purtătoare a virusului HIV dacă ați fost infectat.

Specificul acestei boli este că pentru o lungă perioadă de timp nu apare. Virusul distruge limfocitele, astfel, imunitatea unei persoane scade și organismul devine incapabil să lupte împotriva infecțiilor.

Dacă HIV este tratat corect și în timp util, pacientul va trăi până la o vârstă înaintată. Lipsa tratamentului duce inevitabil la moarte. Din momentul infectării, dar fără tratament, perioada maximă nu este mai mare de zece ani.

Particularități

Analiza imunoblot este o metodă fiabilă care vă permite să determinați prezența anticorpilor la antigenele HIV de primul și al doilea tip.

Dacă o persoană este infectată, după două săptămâni de anticorpi, care pot fi depistați mult mai târziu. O caracteristică a HIV este că cantitatea de anticorpi crește rapid și rămâne în sângele pacientului. Chiar dacă sunt prezente, boala poate să nu se manifeste timp de doi sau mai mulți ani. Metoda ELISA nu indică întotdeauna cu exactitate prezența bolii, necesitând confirmarea rezultatelor din secțiunile PCR și Western blot dacă imunotestul enzimatic a arătat un rezultat pozitiv.

Indicatii pentru

Ce fel de „imunoblot” a fost deja descoperit, dar care este introdus în studiu?

Motivul pentru testarea pentru imunoblotul cu virusul imunodeficienței umane (HIV) va fi un rezultat ELISA pozitiv. Este necesar să treacă printr-un test imunosorbent legat de enzime la pacienții care urmează să fie supuși unei intervenții chirurgicale. În plus, ar trebui să faceți o analiză a femeilor care plănuiesc să rămână însărcinate, precum și a celor care sunt promiscue. Secțiunile Western blot sunt administrate pacienților cu infecție HIV dacă rezultatele elisa sunt discutabile.

Următoarele simptome alarmante pot fi motivul pentru care mergeți la medic: pierdere rapidă în greutate; slăbiciune, pierdere a funcției; tulburări intestinale (diaree), care durează trei săptămâni; deshidratare; febră; ganglioni limfatici umflați în organism; dezvoltarea candidozei, tuberculoză, pneumonie, toxoplasmoză, exacerbare a herpesului.

Pacientul nu trebuie să se pregătească înainte de a dona sânge venos.

Nu mâncați cu 8-10 ore înainte de test. Nu este recomandat să beți alcool și băuturi de cafea, exerciții fizice grele, pentru a experimenta emoție cu o zi înainte de donarea de sânge.

Unde se face analiza?

Unde pot fi testat pentru HIV?

ELISA, o analiză de imunoblot efectuată în clinici private urbane, dă rezultate într-o zi. Diagnosticul imediat este, de asemenea, posibil. În instituțiile publice, testele medicale elisa și secțiunile Western blot sunt gratuite, în conformitate cu legislația Federației Ruse.

Screening obligatoriu pentru bolile infecțioase ale femeilor însărcinate și ale pacienților care necesită spitalizare sau intervenție chirurgicală Cum este realizat acest studiu?

Cum se efectuează un ELISA? Imunoblot pozitiv/negativ confirmă sau infirmă rezultatele elisa. Procedura este destul de simplă. Specialistul ia sânge venos, în timp durează mai puțin de cinci minute.

După prelevare, locul de injectare trebuie dezinfectat și sigilat cu un ipsos. Eșantionarea se efectuează pe stomacul gol, așa că după procedură nu strica să mănânci un baton de ciocolată neagră sau o băutură caldă dulce.

Pentru a obține o recomandare pentru o analiză gratuită la o instituție medicală publică, trebuie să vizitați un terapeut.

În general, imunoblotul nu diferă de alte teste de sânge prin prelevare. Metodologia cercetării este simplă. Dacă un virus este prezent în sângele unei persoane, organismul începe să producă anticorpi pentru a-l distruge. Există multe antigene proteice pentru fiecare virus. Detectarea acestor anticorpi este baza metodei de secționare Western blot. Preț

Câtă analiză? Imunoblot HIV se referă la cercetare ieftină.

În medie, metodele de imunotestare de screening variază de la 500 la 900 de ruble. Secțiunile Western blot sunt un control de studiu, al cărui cost variază de la trei la cinci mii de ruble. Metodele mai complexe sunt mult mai scumpe. De exemplu, pentru analiza reacției în lanț a polimerazei (PCR), va trebui să plătiți aproximativ 12.000 de ruble.

Interpretarea rezultatelor

Cele mai comune metode de diagnosticare a infecției cu HIV sunt imunotestul enzimatic și imunoblot.

Sunt pentru determinarea anticorpilor serici împotriva virusului imunodeficienței umane. Infecția este de obicei confirmată prin două teste: screening și confirmator. Interpretarea rezultatelor ar trebui făcută de un medic, el diagnostichează și prescrie tratament. Dacă imunoblotul este pozitiv, înseamnă că organismul uman are un virus.

Un rezultat pozitiv nu ar trebui să fie un motiv pentru auto-tratament deoarece fiecare pacient poate avea propria sa imagine asupra bolii.

Analiza calitativă include screening și certificare. Dacă pacientul nu are virusul, rezultatul este „negativ”. Când acest certificat este găsit, sunt efectuate teste suplimentare de screening. Analiza imunoblot care confirmă sau infirmă screening-ul. Dacă benzile de testare apar în întunecarea anumitor zone (localizarea proteinelor), diagnosticul este „HIV”.

Dacă rezultatele sunt îndoielnice, atunci testele sunt efectuate în termen de trei luni.

Pentru a preveni infectarea cu virusul imunodeficienței umane, este posibil dacă urmați anumite reguli R: evitați sexul ocazional, folosiți prezervative atunci când intrați în contact, nu folosiți droguri.

Dacă boala este detectată la o femeie însărcinată, este important să urmați recomandările medicului curant, nu uitați de testele pentru prezența virusului.

Ce este Western Blotting?

Identificarea proteinelor în amestecuri complexe sau extracte din diferite țesuturi este una dintre problemele frecvent întâlnite. Folosind un astfel de instrument ca anticorpi specifici, este posibil să se determine proteina studiată cu un minim de timp și costuri financiare.

În metoda Western blotting, în prima etapă, un amestec de proteine ​​este separat prin electroforeză în prezența dodecilsulfatului de sodiu (SDS), apoi transferat pe o membrană de nitroceluloză prin electroblotting.

Esența acestei metode constă în faptul că gelul după electroforeză este plasat pe o membrană de nitroceluloză între straturi de hârtie de filtru. „Sandvișul” asamblat în acest fel este plasat într-un câmp electric astfel încât complexele proteină-SDS să se deplaseze peste placa de gel și să fie imobilizate (ca urmare a sorbției nespecifice) pe suprafața membranei de nitroceluloză.

Forțele implicate în legarea complexului proteină-SDS de membrana de nitroceluloză sunt în principal natura electrica, iar această interacțiune este multipunctivă și duce la „răspândirea” proteinelor pe suprafața membranei. Astfel, după electrotransfer, obținem o replică a gelului pe nitroceluloză cu proteine ​​dispuse la fel ca în gelul de poliacrilamidă.

După SDS - electroforeză, electrotransfer și sorbția proteinelor din gel pe o membrană de nitroceluloză, conformația terțiară a proteinei este mult modificată, dacă în general este corect să vorbim despre existența unei structuri terțiare pentru proteină după un tratament atât de dur. . Prin urmare, pentru detectarea imunochimică a proteinei studiate, sunt utilizați de obicei doar anticorpi mono- sau policlonali specifici regiunilor liniare ale moleculei proteice.

51. Imunotest enzimatic, imunoblot. Mecanism, componente, aplicație.

Anticorpii specifici pentru epitopii conformaționali (sau situsurile care implică contacte între subunități) nu sunt, în general, adecvați pentru utilizare în metoda Western blot.

După transferul proteinei, membrana este incubată secvenţial cu anticorpi specifici proteinei studiate, iar apoi cu anticorpi secundari specifici pentru fragmentele Fc ale anticorpilor primari, conjugaţi cu o etichetă enzimatică (sau un alt) (Fig.

1 A). În cazul în care anticorpii primari specifici antigenului studiat sunt conjugați direct cu eticheta, anticorpii secundari nu sunt necesari (Fig. 1 B). Complexele imune formate la locul localizării proteinei studiate sunt „manifestate” cu ajutorul unui substrat cromogen (în funcție de tipul etichetei).

Sensibilitatea și specificitatea metodei sunt foarte dependente de anticorpii utilizați în studiu.

Anticorpii utilizați trebuie să fie specifici pentru o secvență unică de aminoacizi specifică numai proteinei studiate. În caz contrar, este posibilă interacțiunea (mai ales în cazul extractelor de proteine ​​grosiere) a anticorpilor cu mai multe molecule de proteine, ceea ce la rândul său va duce la apariția mai multor benzi colorate pe membrană.

Identificarea proteinei studiate în acest caz este adesea dificilă sau chiar imposibilă.

Al doilea factor important de avut în vedere atunci când alegeți anticorpi este afinitatea. Cu cât afinitatea anticorpilor utilizați este mai mare, cu atât benzile proteice colorează mai luminoase și mai clare, cu atât sensibilitatea metodei este mai mare. Când se utilizează anticorpi cu afinitate mare, se poate obține o sensibilitate de 1 ng și chiar mai mare.

Pentru a vizualiza rezultatul interacțiunii dintre antigenul legat de membrană și anticorpii, se folosesc anticorpi secundari conjugați cu agenți capabili să dea un anumit semnal în anumite condiții.

De obicei, se folosește ca astfel de agent o enzimă (peroxidază sau fosfatază), al cărei produs de reacție are o culoare și precipită pe membrană sub formă de precipitat insolubil.

De asemenea, în aceasta metoda pot fi utilizate etichete fluorescente.

Orez. 1. Schema de colorare imunochimică a proteinei studiate: A - folosind anticorpi secundari conjugați cu o etichetă enzimatică; B - anticorpul primar este conjugat direct cu o etichetă enzimatică.

Protocol:

I. Prepararea gelului și membranelor și electrotransferul proteinelor

Gelul de poliacrilamidă după electroforeză a fost plasat într-o baie cu tampon de blotting (25 mM Tris, pH 8,3, 192 mM glicină, 10% etanol).

Două coli de hârtie de filtru, tăiate după forma casetei de blotting și umezite cu tampon de blotting, sunt plasate pe partea casetei care va fi îndreptată spre anod. Apoi, pe hârtia de filtru se pune o membrană de nitroceluloză pre-umezită cu același tampon, asigurându-se că între membrană și hârtie nu există bule de aer.

După aceea, gelul trebuie așezat cu atenție pe membrană, acordând din nou o atenție deosebită absenței bulelor de aer între gel și membrană. Sandvișul este completat de două straturi de hârtie de filtru umezită, care sunt așezate pe suprafața gelului (Fig. 2). Sandvișul rezultat este prins în casetă și plasat între electrozi, astfel încât membrana să fie orientată spre anod.

Orez. 2. Schema electrotransferului proteinelor către membrană.

II. electrotransfer

Electrotransferul proteinelor pe o membrană de nitroceluloză se efectuează într-un tampon care conține 25 mM Tris, pH 8,3, 192 mM glicină, 10% etanol timp de 30-50 min la o tensiune constantă de 100 V.

Timpul de electrotransfer depinde de mărimea proteinelor transferate, cu cât proteina este mai mare, cu atât electrotransferul durează mai mult. Calitatea electrotransportului și aranjarea benzilor proteice se evaluează prin colorarea membranei de nitroceluloză cu o soluție 0,3% de Ponceau S în 1% acid acetic. Înainte de imunocolorare, membrana trebuie spălată de mai multe ori cu o soluție apoasă de Tris ușor alcalină pentru a îndepărta colorantul legat de proteine.

III. Colorarea imunochimică a proteinelor imobilizate pe o membrană de nitroceluloză

Pentru a bloca locurile de legare nespecifică a anticorpilor, membrana este incubată cu agitare constantă la temperatura camerei timp de 30 de minute în PBST (pentru mai bine blocare Se poate folosi o soluție PBST care conține 10% lapte praf degresat).

După blocare, membrana este incubată timp de o oră la temperatura camerei cu agitare constantă în PBST care conține 1-10 μg/ml de anticorpi specifici.

Concentrația optimă de anticorpi este selectată empiric și depinde de afinitatea interacțiunii anticorpilor cu antigenul.

La sfârșitul incubării, membrana a fost spălată de 5 ori cu PBST și transferată într-o soluție de anticorpi secundari conjugați cu peroxidază de hrean. Diluția conjugatului este de obicei indicată de producător pe ambalaj sau este selectată empiric de către cercetător. Se incubează membrana într-o soluție de anticorpi secundari timp de 1 oră cu agitare constantă.

După spălare minuțioasă (cel puțin 5-6 modificări tampon), membrana PBST este transferată într-o soluție de substrat cromogenă care conține 3 mg diaminobenzidină (DAB) și 10 µl de peroxid de hidrogen 30% în 10 ml de Tris-HCl 0,1 M, pH 7,6 .

Incubarea se efectuează cu agitare timp de 5 până la 10 minute. După terminarea incubării cu substratul, membrana trebuie spălată cu PBST, uscată prin tamponare cu hârtie de filtru și imediat făcută o copie electronică prin scanare color. Dacă membrana se usucă complet, dungile proteice vopsite se estompează, iar imaginea este mai puțin strălucitoare și contrastantă.

Notă: DAB este toxic și un potențial cancerigen. Lucrați numai cu mănuși de cauciuc!

Numele lui este SIDA Vyacheslav Zalmanovich Tarantul

Imunoblotting - o metodă indirectă suplimentară

Pe lângă ELISA, în anumite cazuri, o procedură numită „immunoblotting” sau „immunoblotting” (uneori numită și „western blot”) este utilizată pentru a testa infecția cu HIV. Conform recomandării OMS, imunoblotarea este utilizată în diagnosticul infecției cu HIV ca metodă suplimentară expertă, care ar trebui să confirme rezultatele ELISA. Această metodă este de obicei utilizată pentru a verifica un rezultat pozitiv ELISA, deoarece este considerată mai sensibilă și mai specifică, deși mai complexă și mai costisitoare. Dar înainte de a semna verdictul final asupra pacientului, medicul trebuie să fie pe deplin convins de corectitudinea diagnosticului. Prin urmare, problema complexității și a costului ridicat nu poate fi decisivă aici.

Atât din punct de vedere al scopului, cât și al modului de execuție, binecunoscuta expresie „puneți pe un blotter” este bine potrivită pentru imun blotting. Imunoblotting combină imunotestul enzimatic (ELISA) cu separarea electroforetică preliminară a proteinelor virale într-un gel și transferul lor pe o membrană de nitroceluloză („blotter”). Procedura de imunoblot constă din mai multe etape (Fig. 27). În primul rând, pre-purificat și distrus în componentele sale constitutive, HIV este supus electroforezei, în timp ce toți antigenii care alcătuiesc virusul sunt separați prin greutate moleculară. Apoi, prin blotting (analog cu stoarcerea excesului de cerneală pe un „blotter”), antigenele sunt transferate din gel pe o bandă de nitroceluloză sau un filtru de nailon, care conțin acum o serie de proteine ​​caracteristice HIV care sunt invizibile pentru ochi. . Apoi, materialul de testat (ser, plasma sanguină a pacientului etc.) este aplicat pe bandă, iar dacă există anticorpi specifici în probă, aceștia se leagă de benzile de proteine ​​antigene care le corespund strict. Ca rezultat al manipulărilor ulterioare (cum ar fi ELISA), rezultatul acestei interacțiuni este vizualizat - făcut vizibil. În cele din urmă, prezența dungilor în anumite zone ale benzii confirmă prezența anticorpilor la antigenele HIV strict definite în serul studiat.

Imunoblotting este cel mai frecvent utilizat pentru a confirma diagnosticul de infecție cu HIV. OMS consideră serul pozitiv dacă anticorpii la oricare două dintre proteinele învelișului HIV sunt detectați prin imunoblot. Conform acestor recomandări, dacă există o reacție doar cu una dintre proteinele învelișului (gp160, gp120, gp41), în combinație sau fără reacție cu alte proteine, rezultatul este considerat dubios și un al doilea test folosind un kit din altă serie sau de la alta firma este recomandata. Pentru asigurare, dacă

Orez. 27. Pentru imunoblotting, în prima etapă, proteinele conținute în serul sanguin sunt separate într-un gel în funcție de greutatea lor moleculară și de încărcare folosind câmp electric(folosind electroforeza pe gel). Apoi, o membrană de nitroceluloză sau nailon este aplicată pe gel și „umedă” (aceasta este blotting). Acest lucru se realizează într-o cameră specială, care permite transferul complet al materialului de la gel la membrană. Ca urmare, modelul de aranjament al proteinelor care a fost pe gel este reprodus pe membrană (blot), care poate fi apoi ușor manipulat. Inițial, membrana este tratată cu anticorpi la antigenul dorit și, după spălarea materialului nelegat, se adaugă un conjugat marcat radioactiv care se leagă în mod specific la anticorpi (ca în ELISA). Locația complexului conjugat marcat antigen-anticorp rezultat este determinată prin autoradiografie folosind film cu raze X. După manifestarea acesteia, devine clar dacă există sau nu antigene în sânge, iar după aceea rezultatul rămâne îndoielnic, se recomandă urmărirea timp de șase luni (cercetarea continuă la fiecare trei luni).

În prezent, în Federația Rusă, se recomandă utilizarea a cinci sisteme de testare pentru utilizarea în diagnosticarea infecției cu HIV, printre care se numără atât cele rusești, cât și cele străine.

Din cartea Anestezie și Resuscitare autor Marina Aleksandrovna Kolesnikova

Din cartea Oddities of Our Body. Anatomie distractivă de Steven Juan

Din cartea Manual de prim ajutor autorul Nikolai Berg

Din cartea Cum să renunți la fumat 100% sau să te iubești și să-ți schimbi viața autorul David Kipnis

Din cartea The Complete Guide to Nursing autor Elena Iurievna Hramova

Din cartea Manual îngrijire de urgență autor Elena Iurievna Hramova

Din cartea SECȚIUNEA CEZARIANĂ: O cale de ieșire sigură sau o amenințare pentru viitor? de Michelle Auden

de Gary Griffin

Din cartea Cum să măresc dimensiunea penisului masculin de Gary Griffin

Din cartea Flatfoot. Cele mai eficiente tratamente autor Alexandra Vasilieva

Din cartea Frumusețea și sănătatea unei femei autor Vladislav Gennadievici Liflyandsky

Din cartea Yoga și practici sexuale de Nick Douglas

Când am fost testat pentru BTS, am decis să mă testez pentru HIV. A doua zi, am primit teste gata făcute pentru ifa, cu excepția HIV, ca urmare, am fost diagnosticată cu chlamydia. Herpes și microplasmoză. Dar vich-ul nu a venit niciodată. Mă sună în 3 zile și spun că trebuie să vii la centrul SIDA pentru a lua din nou sângele. Imunablotul poate fi fals pozitiv în bolile cu Chlamydia Micraplasmoza HPV Herpes

Experții Woman.ru

Obțineți o opinie de specialitate pe tema dvs

Anastasia Shesterikova

Rusina Irina Vladimirovna

Psiholog, Reducerea stresului. Specialist de la b17.ru

Olga Iurievna Diganaeva

Psiholog. Specialist de la b17.ru

Olga Borisenko

Psiholog, terapeut gestalt. Specialist de la b17.ru

Dmitri Valerievici Tişakov

Psiholog, supervizor, terapeut sistemic de familie. Specialist de la b17.ru

Shiyan Olga Vasilievna

Psiholog, Psiholog-consultant. Specialist de la b17.ru

Oksana Lushankina

Psiholog, Relații în familie. Specialist de la b17.ru

Anna Dashevskaya

Psiholog, consultatii Skype. Specialist de la b17.ru

Irina Bukina

Psiholog. Specialist de la b17.ru

Aksyonova Anna Mikhailovna

Psiholog, Candidat în analiză de grup. Specialist de la b17.ru

Nu vreau să te sperii, dar când te cheamă la centrul SIDA, este aproape întotdeauna pozitiv, nu o relua, mult succes, principalul lucru este să iei terapie și să trăiești mult

Un prieten trăiește cu HIV de zece ani, având grijă de el.
Ei spun că în trei ani probabil vor găsi un leac.
În orice caz, nu dispera și nu o răspândi, tratează-te

Nu, IB nu poate fi fals pozitiv și nicio BTS nu afectează această analiză, dacă este pozitivă, atunci, din păcate, aveți HIV, trebuie să vă monitorizați celulele imune și să începeți terapia la timp.

vai, nu ((dacă au sunat la centru, atunci cu siguranță este HIV

Din câte știu, primele și chiar rezultatele ulterioare ale imunoblot pot fi discutabile. nu false pozitive, ci îndoielnice. iar apoi se ordonă o reanaliza. Iată textul de pe site:
„Blotul imun este cel mai adesea folosit pentru a confirma diagnosticul de infecție cu HIV. OMS consideră serul pozitiv dacă anticorpii la oricare două dintre proteinele învelișului HIV sunt detectați prin imunoblot. Conform acestor recomandări, dacă există o reacție doar cu una dintre proteinele învelișului (gp160, gp120, gp41) în combinație cu sau fără reacție cu alte proteine, rezultatul este considerat îndoielnic și se recomandă un al doilea studiu folosind un kit de la un serii diferite sau de la alta firma. Dacă după aceea rezultatul rămâne îndoielnic, studiile sunt continuate la fiecare 3 luni.
poti cauta pe google. dacă da, sper să nu fii testat pozitiv pentru HIV. dar daca se confirma sa stii ca astazi cu acest diagnostic traiesc si traiesc cat oameni sanatosi iar copiii se nasc. condiția principală este disciplina în tratament. sanatate tie!

Terapie antiretrovirală online

Calculatoare

Site-ul este destinat lucrătorilor medicali și farmaceutici 18+

Descifrarea analizei - imunoblot

Vă rog să mă ajutați să descifrez analiza
ENV(GP160)+
ENV(GP110/120)+
ENV(GP41)+
GAG(P55)+
GAG(P40)+
GAG(P25)+
POL(P68)+
POL(P52)+
POL(P34)+

Buna ziua! Acum 2,5 ani am făcut un test HIV, a existat un astfel de imunblot:
Gp-160+, Gp-110/120+, Gp-41+, p17+, p25+, p31+, p34+, p52+, p55+, p68+. Și iată imunoblot din 30/05/18: Gp-160+, Gp-41+, GAG 1 -, poll+, env2-. Nu este clar ce înseamnă rola +? Este singurul de acolo sau nu a fost dezvăluit? Și unde au ajuns restul proteinelor?

Pol și Env sunt gene care codifică grupuri de proteine. Consideră-l doar un alt record. Întrebarea este diferită. Și ce așteptăm? De ce luăm în considerare o pată? Totul este destul de clar. Trebuie făcut ceva.

M-am obișnuit deja cu faptul că am HIV. Și gata de terapie.
Sunt doar curios să vă aud părerea. Este aceasta o infecție proaspătă sau îmi scapă ceva? Sau uneori se întâmplă ca imunoblotul să se deschidă încet foarte mult?

Mi-am verificat testele azi dosar personal(realizat în SC):
ELISA pe primul sistem de testare - pozitiv
ELISA pe cel de-al doilea sistem de testare este negativ (cum este?)

Mai departe IB (realizat in invitro și SC acum o lună):
imunoblot pe primul sistem de testare: gp 160+, gp 41+
imunoblot pe alt sistem de testare: gp41+, p24+, p17+
imunoblot pe al treilea sistem de testare: gp160+, gp120+, gp41+, p24+

Conform previziunilor mele, aș fi putut să fiu infectat acum un an (stadiul acut a fost în aprilie pe undeva), sau acum 9 luni, dar în general - xs când) am folosit întotdeauna protecție și am făcut sex fără prezervative o singură dată în toamna lui. 2017.

Astăzi încă o dată am transmis VN și IP. Teru va începe peste o lună, când sosește comanda.

Date supuse testelor menționate.

Prima pată înainte de ELISA? Nu bate. Nu există niciun moment aici care să ne permită să spunem că o nouă infecție este foarte probabilă, sau invers.
Va rămâne un mister dacă nu găsiți accidental sursa și nu comparați.

Pentru a clarifica, atunci

Predat in Invitro.
Primul IFA este 11 mai.
Apoi același ser a trecut la blot și a venit o analiză pozitivă, unde au fost identificate două proteine.
gp 160+, gp 41+

Apoi deja am predat din nou SC.
Sânge donat pe 29 mai.
Și acolo a fost trecut prin mai multe sisteme de testare, unde primul a dat negativ, al doilea pozitiv. ELISA negativ este totuși amuzant.
Apoi același ser merge la pata de unde provin datele:

Primul sistem de testare: gp41+, p24+, p17+
Al doilea sistem de testare: gp160+, gp120+, gp41+, p24+

Dar nu ideea.
A venit o nouă analiză a IP - 754. Acest lucru mulțumește. VN nu este încă gata. De îndată ce sosește, probabil că voi începe teru.

Sunt 80% sigur că infecția a fost acum un an. Și faptul că pata se deschide încet și ELISA este negativ este ciudat. Sau este în limitele normale?

ELISA negativ este totuși amuzant. As dori sa stiu si numele sistemului pentru a-l nota intr-un caiet negru. Deși, acest moment, dacă nu iei teoria cu căsătoria, este puternic pentru infecția timpurie.
Sunt 80% sigur că infecția a fost acum un an. Slabă pată pentru acea perioadă. Nu imposibil, dar improbabil.

La un moment dat, chiar am început să mă îndoiesc de rezultatele testelor HIV - așa că aștept VN.
Aici ultimul punct din întrebare va fi deja pus.

Se consideră, de asemenea, în limitele normale că IP a crescut cu 200 de exemplare fără tera într-o lună? Iau Ursosan acum pentru un polip în vezica biliară - insertul spune că medicamentul îmbunătățește imunitatea.

Este necesar să se evalueze ambele cu un conținut relativ și să se țină cont de datele unui laborator cu o singură metodă de calcul. Pentru că - Dumnezeu știe ce se întâmplă cu CD4.

În general, numărul de CD4 este de 780 celule/µl. VN - 250 de exemplare / ml.
Asta fără terapie. Adică, CD4 din 486 a sărit la 780 într-o lună.
BH a scăzut de la 550 la 250 de exemplare.

Totuși, acest lucru nu este ciudat sau sunt astfel de salturi în limitele normale? Este timpul să începi Tera?

Buna ziua! Am trecut ifa de trei ori, de fiecare dată +, a venit un imunoblot p24+ p18+ de la SC. Riscul potențial a fost acum mai bine de șase luni. p24 indică faptul că este încă HIV?

Pata indoielnica, repeta dupa 6-8 saptamani. Cel mai probabil o alarmă falsă.

O zi buna!
Rezultatele testului au revenit, inclusiv o pată:

Contact periculos: 24.04.2018
Testul ELISA pentru HIV 23.05.2018 (4 săptămâni de la contact periculos sau 29 de zile) rezultat „+”
Test ELISA pentru HIV 28.05.2018 (5 săptămâni de la contact periculos sau 34 de zile) rezultatul „reluare”
Testul ELISA pentru HIV 06.01.2018 (5 săptămâni de la contact periculos sau 38 de zile) rezultat „+”

O pată a venit de la prima analiză (23/05/18):
GP160 sl.
P24 sl.

Noi teste au fost trecute pe 06.06.2018 ELISA și PCR HIV ARN la centrul local de SIDA. Încă așteptăm rezultatele.

Blot întrebări:
1. Dacă P24 este prezent, este neapărat un antigen HIV sau o astfel de proteină poate fi detectată în alte boli?
2. Ce înseamnă abrevierea „sl” lângă proteină? De obicei, în petele descrise există + sau -
3. Ce determină desfășurarea unui blot? Din termen sau din caracteristicile individuale ale corpului?
4. Cu o astfel de pată la a 4-a săptămână de la un contact periculos, există vreo șansă ca acesta să nu fie HIV?

Sa ai o zi buna si multumesc.

1. nu, poate fi doar o proteină similară de natură diferită. 2. slab. acestea. îndoielnic. 3. termene limită și implementare caracteristică individuală, dar în medie totul este foarte aproape. 4. întrebarea este greșită, există întotdeauna o șansă până la stabilirea diagnosticului.

Buna ziua!
Vă rog să mă ajutați să navighez în rezultatele analizelor și să înțeleg cum să mă comport corect, astfel încât analizele repetate să fie corecte.

Analize predate 25.05.2018
HIV IB
NEW LAV BLOT 1 - nedefinit din 29.05.2018
Markeri HIV IB
gp 160+
gp 120 —
gp 41 -
p55+
p40-
p 24+
p18-
p 68 —
p 52 —
p 34 —
ELISA HIV
ADVIA Centaur HIV Ag-Ab Reactivitate ELISA 12.00 pozitiv (28.05.2018)
Se recomandă repetarea analizei după 2 săptămâni.

În noiembrie 2017 am avut un NPA, după care am făcut teste pe sistemul de testare HIV Ag\Ab Combo Abbott Architect, apoi rezultatul a fost negativ.

În paralel predat analiza generala sânge. Limfocitele sunt ușor crescute, eozinofilele sunt exact 0 (dar am avut astfel de indicatori pentru eozinofile înainte.

Întrebarea principală este:
Ce medicamente pot și nu pot fi luate în aceste două săptămâni? (Nu vreau să „fâlpească” nimic)
Am crize alergice ocazionale, de obicei beau tavegil. Ar trebui abandonat?
Pot fi luate antibiotice înainte de testare? (dacă este prescris de un medic pentru tratamentul altor infecții și boli)

Imunoblotting în diagnosticul HIV

Imunblotting (immunoblot, Western Blot, Western blot)- combină imunotestul enzimatic (ELISA) cu transferul electroforetic preliminar pe o bandă (bandă) de nitroceluloză de antigene virale.

În acest frumos nume științific, „blot” se traduce cel mai probabil prin „blot”, iar „western” prin „western” reflectă direcția de distribuție a acestui „blot” pe hârtie de la stânga la dreapta, adică pe o hartă geografică aceasta corespunde direcției de la vest la est.”. Esența metodei „blot imun” este că reacția imunoenzimatică se realizează nu cu un amestec de antigene, ci cu antigene HIV, distribuite anterior prin imunoforeză în fracții situate în funcție de greutatea moleculară pe suprafața unei membrane de nitroceluloză. Ca urmare, principalele proteine ​​ale HIV, purtători de determinanți antigenici, sunt distribuite pe suprafață sub formă de benzi separate, care apar în timpul imunotestului enzimatic.

Imunoblot include mai multe etape:

Pregătirea benzii. Virusul imunodeficienței (HIV), care a fost anterior purificat și distrus în componentele sale constitutive, este supus electroforezei, în timp ce antigenele care alcătuiesc HIV sunt separați prin greutate moleculară. Apoi, prin blotting (analog cu stoarcerea excesului de cerneală pe un „blotter”), antigenele sunt transferate pe o bandă de nitroceluloză, care conține acum un spectru de benzi antigenice caracteristice HIV care este invizibilă pentru ochi.

Exemplu de studiu. Materialul de testat (ser, plasma sanguină a pacientului etc.) se aplică pe banda de nitroceluloză, iar dacă există anticorpi specifici în probă, aceștia se leagă de benzile antigenice strict corespunzătoare (complementare). Ca urmare a manipulărilor ulterioare, rezultatul acestei interacțiuni este vizualizat - făcut vizibil.

Interpretarea rezultatului. Prezența benzilor în anumite zone ale plăcii de nitroceluloză confirmă prezența în serul studiat a anticorpilor la antigenele HIV strict definite.

În prezent, imunblotting (immunoblot) este principala metodă de confirmare a prezenței anticorpilor specifici virusului în serul de testat. În unele cazuri de infecție cu HIV, înainte de dezvoltarea seroconversiei, anticorpii specifici sunt detectați mai eficient prin metoda blotting imun decât ELISA. Un studiu de blotting imun a arătat că anticorpii la gp 41 sunt cel mai adesea detectați în serul pacienților cu SIDA, iar detectarea p24 la persoanele examinate în scop profilactic necesită studii suplimentare pentru prezența infecției cu HIV. Sistemele de testare imunoblot bazate pe proteine ​​recombinante modificate genetic s-au dovedit a fi mai specifice decât sistemele convenționale bazate pe lizat de virus purificat. Atunci când se utilizează un antigen recombinant, nu se formează o bandă de antigen difuză, ci o bandă îngustă clar definită, care este ușor accesibilă pentru contabilizare și evaluare.

Serul persoanelor infectate cu HIV-1 detectează anticorpi la următoarele proteine ​​majore și glicoproteine ​​- proteine ​​structurale ale anvelopei (env) - gp160, gp120, gp41; nuclee (gag) - p17, p24, p55, precum și enzime virale (pol) - p31, p51, p66. Pentru HIV-2, anticorpii la env sunt tipici - gp140, gp105, gp36; gag - p16, p25, p56; pol-p68.

Dintre metodele de laborator necesare pentru a stabili specificitatea reacției, cea mai mare recunoaștere are cea mai mare recunoaștere detectarea anticorpilor la proteinele anvelopei HIV-1 - gp41, gp120, gp160 și HIV-2 - gp36, gp105, gp140.

OMS consideră serul pozitiv dacă anticorpii la oricare două glicoproteine ​​HIV sunt detectați prin imunoblot. Conform acestor recomandări, dacă există o reacție doar cu una dintre proteinele învelișului (rp 160, rp 120, rp 41) în combinație sau fără reacție cu alte proteine, rezultatul este considerat îndoielnic și se recomandă un al doilea test folosind un kit dintr-o altă serie sau de la o altă firmă. Dacă după aceasta rezultatul rămâne îndoielnic, se recomandă observarea timp de 6 luni (cercetare după 3 luni).

Disponibilitate reacție pozitivă cu antigenul p24 poate indica o perioadă de seroconversie, deoarece anticorpii la această proteină apar uneori primii. În acest caz, se recomandă, în funcție de datele clinice și epidemiologice, să se repete studiul cu o probă de ser prelevată cel puțin 2 săptămâni mai târziu, și exact așa este atunci când în infecția HIV sunt necesare seruri pereche.

Reacțiile pozitive cu proteinele gag și pol fără prezența unei reacții cu proteinele env pot reflecta stadiul de seroconversie timpurie și pot indica, de asemenea, infecția cu HIV-2 sau o reacție nespecifică. Persoanele cu astfel de rezultate după testarea HIV-2 sunt reexaminate după 3 luni (în decurs de 6 luni).

Întrebare: Analize repetate pentru HIV?

Am fost testat pentru infecții cu transmitere sexuală (fără simptome, îmi doream încredere într-o relație cu o femeie). Testul HIV a fost pozitiv. În urma ecografiei a arătat o tumoare la rinichi, îndepărtată (s-a dovedit a fi malign).
Am citit cartea lui Sazonova I.M., se spune că o tumoare malignă poate da un rezultat pozitiv la testul HIV.
Ar putea fi așa, sau nu este nimic de sperat?

Trebuie să faceți un test de control pentru HIV. Dacă primul test HIV a fost determinat prin ELISA, atunci rezultatul poate fi fals pozitiv. Fiabilitatea acestuia poate fi verificată printr-o metodă de diagnostic mai sensibilă - PCR (polimeraza reacție în lanț), care detectează ADN-ul virusului în sânge.

Ajutor. 16.12.10 ELISA (+) IB (+) apoi de la 23.03.11 la 19.05.11 nouă ELISA negative (-) și PCR cantitativ. nu sunt determinate. în 2002 în timpul sarcinii ELISA apoi (+) apoi (-) dar IB este întotdeauna (-). din 2004 până în 2008 am luat ELISA (-) de 2 ori pe an, dar pe 30.04.08 ifa (+) și IB-undefined. apoi din nou la fiecare 2 luni predat IFA întotdeauna (-). iar din decembrie 2010 s-a scris mai sus.Totodată eu nu m-am injectat niciodată, soțul meu are mereu ELISA (-). celule CD4 980. si chiar sangele pentru sifilis din 29.04 a dat 3 +++.si apoi de trei ori. negativ la fiecare 10 zile. hepatită toate (-). A avut cineva unul asemanator. Mulțumesc.

Vă rugăm să precizați dacă ați suferit RIBT (reacție de imobilizare a treponemului pallidum), dacă da, care sunt rezultatele acestui studiu.

nu mi-a oferit nimeni sa fac o astfel de analiza.ce va arata? Sper că înțelegeți că vorbeam despre testele HIV. Mulțumesc. Ați avut cazuri similare în practica dumneavoastră? apropo, despre securitatea informațiilor în 2008 a fost incert. a fost proteina p24/25. în 2010 proteine ​​IB(+) gp160.41.120 p24.17.31. apoi când ifa a fost din nou trimis de 3 ori (-) la IB pe 4 aprilie. rezultatul a venit pozitiv, dar proteinele gp 120 și 41. restul sunt tăiate cu pastă roșie și în partea de jos cu roșu IB REPEAT. dar PCR din același număr va fi refuzat. dupa 4 aprilie am predat IFA deja de 4 ori neg. totul în centrul SIDA, inclusiv antigen și anticorpi. Acum aștept un al doilea IB și un PCR de înaltă calitate. asta este. FOARTE OBOSIT SA GANDI SI SA ASTEPT. Sperând în ce e mai bun. MULȚUMESC. Aștept cu nerăbdare un răspuns.

Dacă puneți vreo întrebare, vă rugăm să încercați data viitoare să o formulați mai specific, cu o clarificare a diagnosticului. RIBT este utilizat pentru a confirma diagnosticul de sifilis. Pentru un diagnostic precis al infecției cu HIV, anticorpii la HIV din sânge sunt determinați prin ELISA și imunoblot. Diagnosticul este confirmat numai dacă ambele rezultate sunt pozitive.

scuze pentru formularea imprecisa a intrebarii. Am scris că în decembrie IFA și Imunblot pentru HIV au venit pozitiv. dar din martie ifa pentru HIV este negativ de 9 ori. daca am fost inregistrat in centrul SIDA, atunci se intampla asta in principiu. HIV este întotdeauna pozitiv sau negativ. și cum poate fi pus un imunblot pe HIV dacă rezultatul ELISA este negativ? atunci toată lumea va nega dacă trebuie verificată pentru imunoblot, deci ce se întâmplă? în centrul nostru de viteză nu îmi pot răspunde nimic. Iată ce am apelat la tine. Mulțumesc.

Din păcate, atât ELISA, cât și imunoblot pot da rezultate fals pozitive. De aceea, diagnosticul HIV este considerat definitiv, doar cu depistarea simultană a HIV prin ELISA și metoda imunoblot.

buna ziua.azi am primit rezultatele PCR pentru HIV calitative - virusul nu a fost detectat si s-a repetat imunoblot pt. rezultat HIV nedeterminată din cauza proteinei 41. în CENTRUL SIDA au spus că cel mai probabil HIV nu, darîn corpul meu există corpuri asemănătoare ca structură cu HIV. și ce credeți, având în vedere întrebările mele din 15 și 16 iunie (vezi mai sus), există HIV sau nu. MULȚUMESC.

ÎN acest caz diagnosticul de infecție HIV este incert.

Scrieți că doar cu depistarea simultană a HIV cu ajutorul FI și imunoblot, diagnosticul HIV este considerat definitiv. Dar în cazul meu cum rămâne? la urma urmei, toate ptsr vor nega. și blot și ifa sar tot timpul. timp de 9 ani. spune-mi, dacă virusul a fost în sângele meu, atunci ARN-ul și ADN-ul lui ar putea fi determinate cu precizie timp de atâția ani. și poate dura atât de mulți ani perioada de incubație sau „fereastra”? Există rezultate fals negative ale PCR pentru HIV având în vedere o astfel de perioadă de timp? Da, am uitat sa spun ca testele rapide HIV pe care le fac la CPD sunt mereu negative sau nu ma pot baza nici pe ele? Mulțumesc.

În acest caz, diagnosticul PCR nu este metoda principală de identificare a dinamicii procesului - metodele serologice sunt mai informative. În acest caz, probabilitatea unor rezultate fals negative este mare. testele rapide HIV au un prag de sensibilitate ridicat, prin urmare pot da și un rezultat fals negativ.

Îmi pare rău. Cu siguranță am scris în locul greșit. va rog sa raspundeti la subiectul HIV sau nu HIV. Mulțumesc.

În cazul în care nu ați primit o notificare de primire a unui răspuns la e-mailul dvs., puteți vizualiza răspunsul la întrebarea dvs. la această adresă http://tiensmed.ru/news/answers/vich-ili-ne-vich- .html

Buna ziua! Vă rog să-mi spuneți, pentru a mă înregistra la LCD (acum însărcinată în 10 săptămâni), am trecut testele pentru HIV, un medic m-a sunat acum câteva zile și mi-a spus că testele preliminare pentru HIV au fost pozitive (prima a fost făcută la Kirovograd, dar încă nu există un rezultat oficial de la Kiev ), în aceeași zi, în laboratorul orașului nostru, au fost efectuate două analize expres ale companiei Pharmasco CITO TEST HIV 1/2, ambele rezultate sunt negative, asistentul de laborator a spus că aceste analize sunt de încredere și nu trebuie să-mi fac griji, deoarece acest lucru se întâmplă în timpul sarcinii, iar acele analize ar putea pur și simplu deruta. Doctorul a spus să donez din nou sânge și mi-am mai donat sângele de două ori pentru analize în diferite spitale (încă nu am niciunul dintre cele trei rezultate). Sunt foarte ingrijorat, nu sunt dependent de droguri, nu au existat relatii sexuale dubioase, daca ma imbolnavesc foarte rar, alte analize sunt toate normale. Pot fi de încredere testele rapide? Se întâmplă cu adevărat acest lucru în timpul sarcinii? Doar de puternic, doctorul m-a speriat. Mulțumesc

În primul rând, trebuie să te calmezi și să nu te gândești la rău. Uneori, în timpul sarcinii, există rezultate fals pozitive. Este necesar să redonați sânge pentru HIV și să așteptați rezultatele examinării.

Buna ziua! Chestia este că la mine acum 2 luni a fost un contact sexual cu fata (până acum ne întâlnim). după 1,5 săptămâni temperatura a crescut la 37,4. a dormit curând. pentru a fi sigur, am trecut de analiza IF după 2 săptămâni și din nou după 1,5 luni. Ambele răspunsuri sunt negative. dar mai am febra si tuse cu o ameliorare variabila. Imi puteti spune va rog daca exista un risc? pe langa eu perioadă lungă de timp Am lucrat șapte zile pe săptămână și acum o săptămână eram în concediu medical (orvi). testele de sânge și plămâni sunt bune. Mulțumesc.

Această temperatură poate fi legată de transferul boala virala, organismul nu și-a revenit încă, sau suprasolicitare cronică. În cazul în care o patologie organică este exclusă, un test general de sânge și urină se află în limitele normale, precum și datele unui studiu fluorgrafic sunt, de asemenea, în limitele normale, atunci este necesar să se excludă bolile cu transmitere sexuală: chlamydia, micoplasmoza, ureaplasmoza, care poate provoca inflamarea organelor pelvisului mic și uretrei și, ca urmare, o creștere a temperaturii corpului. Citiți mai multe despre motivele creșterii temperaturii corpului făcând clic pe linkul: Temperatura ridicată.

Buna ziua. Există așa ceva - în urmă cu mai bine de un an a existat un contact sexual neprotejat cu o fată care mergea. M-a asigurat că nu era bolnavă de nimic, dar nu pot să cred 100 la sută. Ea a mai asigurat că a fost supusă unui control medical înainte de a se angaja (a lucrat ca vânzător) și totul a fost în regulă. La 7 luni de la contact, am trecut în continuare un test HIV în laboratorul citylab - rezultatul a fost negativ. Dar în În ultima vreme Deseori am început să mă îmbolnăvesc - de 3 săptămâni, am o durere în gât roșie și nu o pot vindeca. Din nou a început să-i fie frică, dar deodată a prins-o atunci? Spuneți-mi, este posibil acest lucru și merită să aveți încredere în analiza de la citylab? Mi-e teamă să renunț din nou, nervii mei nu vor suporta..

În cazul în care rezultatul este negativ, atunci cel mai probabil nu sunteți bolnav și nu sunteți infectat cu HIV/SIDA. Cu toate acestea, pentru clarificarea diagnosticului, se recomandă reanalizarea în laboratoarele de specialitate din instituțiile de stat, această examinare se efectuează în mod anonim. În cazul în care autotratamentul nu aduce rezultatul dorit, se recomandă să consultați un otolaringolog pentru a efectua o examinare adecvată și a prescrie un tratament adecvat. Citiți mai multe despre testarea HIV într-o serie de articole făcând clic pe linkul: HIV.

Spune-mi, poți să dai vreo descriere a laboratorului Citylab? Cu toate acestea, nu este întotdeauna posibil să treceți o analiză când institutie publica. Și care este șansa procentuală ca un bărbat să se infecteze prin contact neprotejat?

Din păcate, nu dăm o evaluare comparativă a laboratoarelor și instituțiilor medicale private. În cazul în care vă îndoiți de fiabilitatea rezultatelor, efectuați un sondaj într-un alt centru și solicitați mai întâi o licență pentru a furniza date servicii medicale dacă acest centru are dreptul să efectueze această examinare și dacă totul respectă standardele acceptate. Riscul de infecție este același pentru ambele sexe prin actul sexual neprotejat. Citiți mai multe despre testarea HIV într-o serie de articole făcând clic pe linkul: HIV.

Bună ziua Copilul are 8 luni, a trecut analiza pt metoda HIV ELISA în sânge a dezvăluit gp160 + și p25 + restul este totul în minus, concluzia IB este îndoielnică. Judecând după aceste analize, se dovedește că copilul este +? gp160 + gp110/120 - p68 - p55 - p52 - gp41 - p34 - p25 + p18 -

Din păcate, pe baza datelor obținute, este imposibil să se facă un diagnostic cu o probabilitate de 100 la sută, deoarece un rezultat fals pozitiv nu este exclus. Pentru a face un diagnostic precis, va trebui să faceți o serie de examinări, inclusiv repetarea această analiză prin ELISA, precum și să treacă analiza prin metoda PCR. După aceea, trebuie să contactați o instituție medicală specializată, unde specialistul în boli infecțioase va putea evalua rezultatele într-un complex. Puteți afla mai multe despre manifestările infecției cu HIV în secțiunea tematică a site-ului nostru făcând clic pe linkul: HIV

Poate arăta un rezultat fals pozitiv în „ARI” sau boli infecțioase mai acute? Undeva am citit ca cu 58 de boli sau chiar mai mult poate arata “+”, inclusiv vaccinarea impotriva hepatitei B, daca rinichii etc., sufera?

Există posibilitatea unui rezultat fals pozitiv, așa că vă recomand să faceți următoarele: reanalizați folosind metoda ELISA și Metoda PCR, iar apoi reconsultați specialistul în boli infecțioase. Puteți afla mai multe despre diagnosticul infecției cu HIV în secțiunea tematică: HIV

Bună ziua Imunoblot nedeterminat din cauza proteinei p25. Care este probabilitatea de HIV?

În această situație, este necesar să se studieze cu atenție protocoalele de studiu în combinație cu alți indicatori, deoarece nu este posibil să se facă o ipoteză pe baza acestor date. Probabil, rezultatul poate fi considerat îndoielnic și este necesară o reexaminare după 3 luni. Citiți mai multe în secțiunea site-ului nostru: HIV

Bună ziua.
Puteți comenta despre ELISA pentru HIV
1 ser +3,559 k=13,3
+2,121 k=4,9
p 24 neg
Ser 2 +3,696 k=13,9
+2,477 k=5,7

În acest caz, un rezultat fals pozitiv nu este exclus, având în vedere că metoda ELISA este indirectă, așa că vă recomand să faceți o analiză folosind o altă metodă, mai sensibilă - imun blotting. Puteți afla informații mai detaliate despre această problemă în secțiunea relevantă a site-ului nostru făcând clic pe următorul link: HIV

Bună seara, spune-mi ce să mă acord? Acum un an, când plănuiam un copil, eu și soțul meu ne-am făcut toate testele, inclusiv pentru HIV (au luat-o foarte în serios și corect), am fost examinat în Kr. SIDA din Kiev. După ce am trecut analiza la Centru, răspunsul a venit negativ și mie. Acum sunt în poziție la 14 săptămâni, adică. Mă înscriu, trec prin toate testele și iar răspunsul a revenit, testul HIV a fost nedeterminat, l-am trecut din nou la clinică și am trecut un test expres să mă liniștesc la Dovir, dar nu m-au liniștit , testul expres a arătat un rezultat pozitiv (a doua bandă a fost mai puțin pronunțată), imediat după toată această procedură, fără să piard timp, am aplicat la Centrul SIDA și am trecut și o analiză, aștept rezultatul. (Nu mă pot calma) Vă rog să-mi spuneți cât de mult puteți avea încredere în testele expres și de ce prima dată nu există răspuns la testul HIV? (eu și soțul meu ducem un stil de viață sănătos și ne iubim). Mulțumesc.

Nu intrați în panică înainte de timp - diagnosticarea expresă nu este baza pentru a face un diagnostic HIV, vă permite să identificați grupuri de pacienți care necesită un studiu mai aprofundat. În astfel de situații, se recomandă să se efectueze blotting imun și să se consulte personal cu un medic de boli infecțioase. Puteți afla informații mai detaliate despre această problemă în secțiunea tematică a site-ului nostru făcând clic pe următorul link: HIV. De asemenea, puteți obține informații suplimentare în următoarea secțiune a site-ului nostru: Diagnosticare de laborator

Buna ziua, eram intr-o boala infectioasa, doar azi am fost externata cand am plecat, m-a sunat medicul si mi-a explicat ca am ifa pozitiv, mai intai cand am fost la spital a fost negativ, apoi cand am reluat a devenit pozitiv , au trimis un studiu de imunoblot la soimii de pe munte au spus ca va fi gata saptamana viitoare, am fost in spital cu dureri in gat si virusuri paragripale, ajung in stare de soc, inca nu inteleg cum sa fac În ceea ce privește, a fost întocmit și un extras pentru clinica mea care indică că dacă a fost găsită și mai jos că imunoblotul a fost în lucru, dacă mâine am fost externat la clinica dumneavoastră, atunci totul va fi indicat în acest extras, cât de probabil este HIV? este posibil ca din cauza faptului că am fost tratat pentru o durere în gât a virusului paragripal, să arăt rezultate pozitive pentru ifa?

Probabilitatea unui rezultat fals pozitiv este foarte mare. Prezența unui rezultat pozitiv nu oferă încă motive pentru a stabili un diagnostic de HIV, așa că vă recomandăm să așteptați rezultatul imunoblotării și apoi să vă consultați personal cu un specialist în boli infecțioase cu privire la examinarea și observarea ulterioară. Angina, paragripa și altele raceli nu a afectat semnificativ rezultatele analizei.

Vreau sa cred, dar la sfarsitul lui august m-am simtit rau, mi-a crescut temperatura, 37,5-38 Am avut scaune moale vreo 4 zile, era in vacanta unde erau multe discoteci, am baut apa de la robinet ca multe. altele, pentru că era foarte scump un pahar de apă costa 300 de ruble, am asociat scaune moale cu o asemenea temperatură cu un fel de infecție intestinală prinsă în apă, nu-mi amintesc exact, dar a fost și o mică erupție cutanată în apă. partea superioară a corpului, când am ajuns acasă cu o temperatură am sunat la doctor, ea a scris o infecție cu rotavirus, după 5 zile de boală, m-am oferit voluntar să-l părăsesc și să merg la muncă unde m-am îmbolnăvit câteva zile mai târziu de sinuzită (în perioada aceea). perioada de timp in care trebuia sa fiu pe strada) am conectat ca o scadere mare de temperatura din vacanta si intoxicatie mi-au scazut imunitatea si de aceea am racit inca o data cu sinuzita, in total este din nou concediu medical, in directia de Laura am baut klacid cf 500 10 zile, a trecut, m-am intors la munca dupa 3 saptamani am fost intr-o calatorie de afaceri intr-o tara fierbinte de 3 zile. aparatele de aer conditionat din transport si hotel au fost nemiloase si la intoarcerea acasa, in avion aveam temperatura deja de 39,5.aici eram acasa cu temperatura de 40, am chemat doctorul in casa, mi-a scris orvi si mi-a spus. gatul era foarte rosu, aveam amigdalita cronica si i-a spus asta Laurei, ea insasi a scris sa bea un antibiotic Levolet r. a chemat ambulanta pentru ca avea febra si ritmul era de 40 si nu scadea, nu s-a oferit spitalizare, urmatoarea ziua aceeași poveste - ambulanța a făcut o injecție antipiretică și a plecat.A treia oară când am insistat asupra spitalizării, abia m-au dus la spitalul de boli infecțioase, unde a fost depistată o infecție mixtă de paragripa și infecție cu adenovirus, dar la externare, doctor - sefa sectiei a spus ca am avut HIV pozitiv daca au facut-o de 2 ori, sunt in soc, nu stiu ce sa fac nu pot sa mananc si sa beau .a spus ca am un pronunțat acut infecție cu HIVși pentru verificare, au trimis o analiză a sângelui meu pentru o imunoblot la centrul SIDA,
acum, trasând o analogie a evenimentelor care mi s-au întâmplat în ultima vreme, precum și 3 foi de concediu medical la rând, am încercat toate simptomele și sunt îngrozită de ceea ce ar putea fi, după ce am fost externată în aceeași zi, am mers sa fac o analiza in vitro ananimal si a doua zi rezultatul pentru ifa a fost acelasi +
Îmi pare rău pentru informații atât de detaliate, dar sunt măturat și ucis, beau sedative puternice și nu am poftă de mâncare și practic nu mănânc, am slăbit foarte mult
Am si eu o astfel de intrebare incat medicul cu un extras din spital a indicat rezultatul HIV prin ifa a fost gasit si mai jos ca imunoblotul este in lucru, dar imediat ce inchid bl-ul in clinica mea de la locul respectiv, totul va fi. fi scris acolo. ce ar trebui sa fac?nu va mai fi confidential. Am rugat-o pe medic să nu scrie această analiză în extras, la care mi-a refuzat, în ce măsură îmi sunt respectate aici drepturile la nedivulgarea informațiilor.

Din păcate, rezultatele studiilor efectuate în spital se încadrează în extras, deoarece medicul de raion curant trebuie să aibă informații complete despre starea dumneavoastră de sănătate. În această situație, nu vorbim despre divulgarea informațiilor, deoarece acestea sunt transferate doar unui alt medic curant, care va continua să vă observe.

Buna ziua! Mi-am făcut teste pentru HIV pentru că aveam nevoie de un certificat pentru FMS, nu au dat testele câteva săptămâni, apoi m-au invitat la cap și mi-au dat rezultat pozitiv, au luat o grămadă de chitanțe și au trimis la centrul regional SIDA pentru examinare ulterioară, după cum scrie pe certificat. Vreau sa trec in alta clinica si apoi sa merg la cea regionala, sau are sens sa o refac? Pur și simplu nu înțeleg de ce nu le-au dat atât de mult timp, dar doctorul a spus că ar fi făcut un fel de analiză și le mai datorez încă 4 mii de ruble, pentru că dacă ar face-o, probabil ar da detalii detaliate. informații despre boală în plus față de certificat?

În această situație, nu trebuie să intrați în panică înainte de timp - obținerea unui rezultat pozitiv nu permite încă să se judece în mod fiabil despre o posibilă infecție, deoarece rezultatele fals pozitive nu sunt excluse. Vă recomandăm să faceți din nou testul și, dacă există un rezultat pozitiv, va trebui să treceți la o altă examinare - imunoblot. De regulă, laboratorul nu oferă informații detaliate despre rezultate, ceea ce este o practică normală și obișnuită. Toate întrebările pe care le puteți avea pot primi răspuns de către medicul curant după examinare la o consultație personală.

Am uitat sa adaug ca de la inceputul lunii iunie si pana la jumatatea lui septembrie mi-am facut singur un curs de steroizi anabolizanti si anume sustanon 250 este un amestec de testosteron si stanozolol cu ​​primabolan, am vrut sa ma pregatesc pentru vara si vacanta să-mi doboare imunitatea și tot ce mi s-a întâmplat.

Deteriorarea imunității, precum și prezența boală autoimună poate da rezultate fals pozitive la testul HIV. De aceea, în cazul obținerii a 2 rezultate pozitive prin ELISA, se recomandă imunoblot, care vă va permite să răspundeți cu exactitate la întrebarea dacă există sau nu infecție.

ce inseamna prezenta bolilor autoimune?ce sunt acestea?
în general, pot spune că mi s-a făcut rău destul de des din copilărie și chiar și acum câțiva trei ani i-am cerut medicului curant să aibă grijă de imunitatea mea, pentru că eram în mod constant obosit și adesea bolnav, mai ales urechi, gât, nas. , dar tot timpul pe care l-am avut rezultate negative pe vich, le-am predat cu suficienta usurinta, fara ezitare.

Un rezultat fals pozitiv al testului HIV poate fi după un recent infectie virala, vaccinarea împotriva hepatitei B, cu tuberculoză, hepatită, herpes, precum și pe fondul bolilor autoimune, precum: artrita reumatoidă, lupus eritematos sistemic, dermatomiozită, sclerodermie, boli țesut conjunctiv etc.

Vreau să adaug la întrebarea mea, a venit imunoblotul, a fost negativ, dar doctorul a spus că, din moment ce erau două if-uri + când eram în spitalul de boli infecțioase, mai trebuie să reluez analiza, dar puțin mai târziu

În acest caz, tacticile medicale sunt justificate - vă recomandăm să luați din nou un imunoblot în 1,5-2 luni.

Care este probabilitatea: 2 ifa + diferența dintre prelevările de sânge de aproximativ 2 zile, imunoblot - ; a fost în spitalul de boli infecțioase cu infecție cu adenovirus și paragripa, unde a fost prelevat sânge, imunoblotul a fost trimis la centrul SIDA

Bună ziua M-am inregistrat la LCD, am trecut prin toate analizele, doctorul zice ca am herpes in sange, apoi suna de la centrul SIDA si spun ca trebuie sa-l refac, am aplicat si imi spun ca am HIV pozitiv, in panica m-am dus cu sotul sa-mi pun la dispozitie o secunda am avut si ifa si imunoblot + sotul meu a facut o analiza, am dat din nou o luna mai tarziu. Am + sotul meu - acum sunt insarcinata in 23 saptamani!

In aceasta situatie, din pacate, exista posibilitatea infectiei cu HIV, insa diagnosticul final nu poate fi pus nici macar cu un imunoblot pozitiv, data fiind starea de sarcina. În această situație, este necesară excluderea rezultatelor fals pozitive, de aceea vă recomandăm să faceți din nou testul și să vă consultați personal cu un specialist în boli infecțioase.

dacă imunoblotul a arătat un rezultat pozitiv pentru HIV, iar screening-ul este negativ, în ce rezultat trebuie să avem încredere?

Imunoblot este un studiu mai precis, prin urmare, când acest studiu dacă se obține un rezultat pozitiv, este necesar să se continue studiul și să se viziteze personal un specialist în boli infecțioase.